《临床检验技术》课件-项目一：临床检验基础与血液标本处理

1.血液标本添加剂临床检验技术抗凝剂我们在去医院验血的时候，血液从血管里面抽出来放到试管里面，为什么有的血液并没有凝固呢？疑问一：抗凝剂老师问什么试管里面有一些液体成分？疑问二：这些试管的颜色并不一样？疑问三：抗凝剂抗凝剂答疑时间到！凝血机制ⅫⅫa胶原Ⅺ前激肽释放酶激肽释放酶Ⅺa（正反馈）ⅨCaⅨaⅧ血小板磷脂ⅨaⅧ-Ca-Ca血小板磷脂Ⅹ组织损伤释放组织凝血活酶CaⅦ-Ca组织凝血活酶-Ca-Ⅴ磷脂(凝血酶原激活物)Ⅹa凝血酶原凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白单体可溶性纤维蛋白多聚体Ca稳定的纤维蛋白多聚体ⅩⅢⅩⅢaCaCaⅩa或Ⅱa血液凝固过程图反应进行方向促进Ⅶ共同途径抗凝：采用物理或化学的方法去除或抑制某种凝血因子的活性，以阻止血液凝固的方法称为抗凝。抗凝剂：能够阻止血液凝固的化学物质称为抗凝剂（anticoagulant）或抗凝物质。抗凝剂凝血机制ⅫⅫa胶原Ⅺ前激肽释放酶激肽释放酶Ⅺa（正反馈）ⅨCaⅨaⅧ血小板磷脂ⅨaⅧ-Ca-Ca血小板磷脂Ⅹ组织损伤释放组织凝血活酶CaⅦ-Ca组织凝血活酶-Ca-Ⅴ磷脂(凝血酶原激活物)Ⅹa凝血酶原凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白单体可溶性纤维蛋白多聚体Ca稳定的纤维蛋白多聚体ⅩⅢⅩⅢaCaCaⅩa或Ⅱa血液凝固过程图反应进行方向促进Ⅶ共同途径抗凝剂枸橼酸钠（柠檬酸钠）乙二胺四乙酸

EDTA-K2/K3/Na2草酸钠肝素常用抗凝剂抗凝剂为什么试管里面有一些液体成分？疑问二：抗凝剂为什么采血管会有不同的颜色？疑问三：抗凝剂抗凝剂抗凝原理临床用途

真空采血管颜色枸橼酸钠（柠檬酸钠）与血液中的Ca2+结合形成可溶性螯合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固血栓与止血检验（1:9）血沉测定（1:4）血液保养液蓝色黑色乙二胺四乙酸

EDTA-K2/K3/Na2与血液中的Ca2+结合形成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固全血细胞分析紫色草酸钠与血液中的Ca2+形成草酸钙沉淀，阻止血液凝固

血细胞比容、血细胞计数、网织红细胞计数等（不常用）灰色肝素加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶作用

血细胞比容测定临床生化项目绿色常用抗凝剂抗凝剂分离胶抗凝剂0102促凝剂03分离胶血液标本添加剂血液标本添加剂习题1.加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶的形成A.氟化钠

B.枸橼酸钠

C.双草酸盐D.EDTA

E.肝素2.哪种颜色管盖的真空采血管用于自动血细胞计数仪计数的标本采集A.红色B.紫色C.黑色D.淡蓝色E.绿色2.血涂片染色临床检验技术瑞特（氏）（Wright）染色法吉姆萨（Giemsa）染色法复合染色法染料的组成染料的组成MCL

＋NaE―――ME↓＋NaCL

亚甲蓝（碱性）

伊红（酸性）

瑞特染料瑞特染料+甲醇+甘油-----瑞氏染液甲醇的作用：溶解染料，解离出M+和E-

凝固蛋白增加染色效果细胞着色原理包括物理吸附和化学亲和作用。染色原理染色原理成分本质染色原理染色结果血红蛋白、嗜酸性颗粒碱性蛋白（嗜酸性物质）正电荷，碱性物质，易与带负电荷的酸性染料伊红结合被染成粉红色或红色系列RNA、DNA等细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆及嗜碱性颗粒酸性蛋白（嗜碱性物质）负电荷，酸性物质，易与带正电荷的亚甲蓝结合被染成蓝色系列中性颗粒中性物质与酸性染料和碱性染料结合染成紫红色染色原理操作勿冲洗再加等量或稍多瑞氏染色乙液用洗耳球吹匀，使之与染液充分混匀，并染色5－10分钟直接流水冲洗3-5分钟（切勿先到掉染液）涂片经水洗干燥后待检李四123涂片干燥后加瑞氏染色甲液3-5滴覆盖整个血膜0.5-1分钟染色结果血膜外观成紫红色。红细胞呈粉红色，细胞核呈紫红色，嗜酸性颗粒呈桔红色，嗜碱性颗粒呈紫黑色。质量保证瑞特染液质量封闭条件下，染液储存时间愈久，染色效果愈好PH染液偏酸，染色偏红，染液偏碱，染色偏蓝脱色与复染过深，甲醇脱色过浅，复染操作染色时机染液用量混匀染色时间冲洗血涂片染色质量保证缓冲液的pH6.4－6.8由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定偏酸性环境中下正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝质量保证-PH染色偏酸，红细胞和嗜酸性粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。染色偏碱，细胞呈灰蓝色，嗜酸性颗粒可染成暗褐色，甚至紫黑色或黑色。质量保证偏酸合适偏碱染色时机：未干透的血膜不能染色，否则染色时血膜会脱落。染液用量：以刚好覆盖血膜为宜。染色时间：环境温度越低，细胞数越多，染色时间越长。冲洗：冲洗时不能先倒掉染料，应用流水冲去，以防染料沉淀在血膜上。质量保证-操作对胞浆染色效果好，特别是中性颗粒，对核着色较差。瑞特（氏）（Wright）染色法对核染色好，但胞质和颗粒较差。吉姆萨（Giemsa）染色法：即以稀释吉姆萨液代替缓冲液。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。复合染色法：方法学评价：郭丽香3.细胞显微镜计数案例身体一向健康的广州市民杜先生在体检的时候发现血小板检验结果仅29×109/L，复查后血小板数量继续降低为15×109/L，怀疑血液病建议做骨髓穿刺排除。后经专家建议进行人工计数，结果显示血小板数量为141×109/L，血小板骤降的原因是EDTA抗凝剂引起的“假性血小板降低”。课程思政血液血浆血细胞红细胞白细胞血小板中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞单核细胞嗜碱性粒细胞血液中细胞血液经稀释液以一定的倍数稀释，有时候还需要将细胞进行染色，将稀释的血液充入血细胞计数池中，在显微镜下计数一定容积内的细胞数，经换算即可求出每升血液中的细胞数量。血细胞计数的原理血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片10μl20μl血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片改良牛鲍计数板高0.1ｍｍ血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片1mm1mm每个大方格体积：1ｍｍ2×0.1mm=0.1mm3=0.1μlWBC血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片中央大方格由25个中方格组成，每个中方格由16个小方格组成血细胞计数的器材①显微镜②微量吸管③计数板④盖玻片特制的计数池专用盖片24mm×20mm×0.6mm。计数误差显微镜计数的误差可分为技术误差和固有误差两种。（1）技术误差：由于操作不正规或使用器材不准确造成的误差。如：器材和试剂质量不佳、采血部位不当、稀释倍数不准确、充池不