2026年生物化学与分子生物学研究方法与技术题库

2026年生物化学与分子生物学研究方法与技术题库一、选择题（每题2分，共20题）1.在蛋白质印迹（WesternBlot）实验中，用于将目标蛋白转移到膜的试剂是？A.Tris-HClB.SDSC.甲醇D.尿素2.PCR反应体系中，引物退火温度通常取决于？A.引物长度B.引物GC含量C.脱氧核苷酸浓度D.基因大小3.用于检测基因表达差异的芯片技术是？A.质谱分析B.基因芯片C.流式细胞术D.等温扩增4.在蛋白质组学研究中，减少样品污染常用的方法是？A.酶联免疫吸附试验（ELISA）B.脉冲场凝胶电泳（PFGE）C.脱盐处理D.超速离心5.以下哪种技术可用于检测DNA序列中的小片段缺失？A.Sanger测序B.差异凝胶凝胶电泳（DGGE）C.连接酶检测反应（LDR）D.基因芯片6.基因敲除实验中，常用的同源重组载体是？A.载脂蛋白A1B.pBR322C.ΦX174D.FLP-FRT系统7.用于检测蛋白质翻译后修饰的技术是？A.液相色谱-质谱联用（LC-MS）B.活性染色剂C.原位杂交D.免疫荧光8.在代谢组学研究中，用于检测小分子代谢物的技术是？A.基因测序B.液相色谱-质谱联用（LC-MS）C.脉冲场凝胶电泳（PFGE）D.电子显微镜9.用于检测RNA剪接异构体的技术是？A.基因芯片B.RT-qPCRC.原位杂交D.基因编辑10.在细胞培养中，用于维持细胞生长的培养基通常包含？A.胰岛素B.脱氧核糖核酸酶C.胶原蛋白D.乙酸盐二、填空题（每空1分，共10空）1.WesternBlot实验中，蛋白印迹前处理的目的是__________________________。2.PCR反应中，引物的设计原则包括__________________________和__________________________。3.蛋白质组学研究中，减少样品污染的方法是__________________________和__________________________。4.基因芯片技术主要用于__________________________和__________________________。5.DNA测序中，Sanger测序法的原理是__________________________。6.蛋白质翻译后修饰包括__________________________、__________________________和__________________________。7.代谢组学研究中，LC-MS技术的优势在于__________________________和__________________________。8.基因敲除实验中，CRISPR-Cas9系统的核心酶是__________________________和__________________________。9.细胞培养中，维持细胞生长的培养基通常包含__________________________、__________________________和__________________________。10.RNA干扰技术（RNAi）的机制是通过__________________________降解靶标mRNA。三、简答题（每题5分，共4题）1.简述WesternBlot实验的基本步骤及其原理。2.PCR反应中，引物退火温度如何优化？简述影响因素。3.基因芯片技术在疾病诊断中的应用有哪些？4.蛋白质翻译后修饰有哪些类型？简述其生物学意义。四、论述题（每题10分，共2题）1.论述Sanger测序技术的原理及其在基因组学研究中的应用。2.结合实际案例，论述代谢组学技术在药物研发中的作用。答案与解析一、选择题答案与解析1.C.甲醇解析：WesternBlot中，将蛋白转移到PVDF或NC膜时，需用甲醇预湿膜，以增强蛋白结合。2.A.引物长度解析：引物长度影响退火温度，通常长度越长，Tm值越高。GC含量也重要，但长度是主要因素。3.B.基因芯片解析：基因芯片可高通量检测基因表达差异，适用于研究疾病或药物干预的分子机制。4.C.脱盐处理解析：脱盐可去除盐离子干扰，提高蛋白质组学分析的准确性。5.C.连接酶检测反应（LDR）解析：LDR可检测小片段DNA缺失或插入，适用于基因突变分析。6.D.FLP-FRT系统解析：FLP-FRT系统通过位点特异性重组实现基因敲除，广泛应用于模式生物研究。7.A.液相色谱-质谱联用（LC-MS）解析：LC-MS可检测磷酸化、乙酰化等翻译后修饰，是蛋白质组学研究的重要工具。8.B.液相色谱-质谱联用（LC-MS）解析：LC-MS可检测小分子代谢物，适用于代谢组学研究。9.B.RT-qPCR解析：RT-qPCR可检测RNA剪接异构体，灵敏度高，适用于表达分析。10.A.胰岛素解析：培养基通常含血清、胰岛素等促生长因子，支持细胞增殖。二、填空题答案与解析1.封闭非特异性位点解析：蛋白印迹前用封闭剂（如BSA）封闭非特异性位点，减少背景噪声。2.特异性和互补性解析：引物需特异性结合目标序列，且与模板互补才能高效扩增。3.脱盐处理和酶消化解析：脱盐去除干扰离子，酶消化（如胰蛋白酶）可减少交叉污染。4.基因表达分析和疾病诊断解析：基因芯片用于研究疾病相关基因表达，辅助诊断和预后评估。5.测序反应终止法解析：Sanger测序通过ddNTPs终止延伸，根据终止位置确定碱基序列。6.磷酸化、乙酰化和糖基化解析：这些修饰影响蛋白功能，是信号转导的关键调控机制。7.高灵敏度和高通量解析：LC-MS可检测微量代谢物，适用于复杂体系分析。8.Cas9核酸酶和向导RNA（gRNA）解析：Cas9切割DNA，gRNA引导至目标位点实现基因敲除。9.氨基酸、维生素和无机盐解析：培养基需含必需营养素，支持细胞正常生长。10.小干扰RNA（siRNA）解析：RNAi通过siRNA降解靶标mRNA，抑制基因表达。三、简答题答案与解析1.WesternBlot基本步骤及原理-步骤：蛋白提取→SDS电泳→转膜→封闭→一抗孵育→二抗孵育→化学发光检测。-原理：通过抗体特异性识别目标蛋白，结合化学发光显色，实现定量分析。2.PCR引物退火温度优化-影响因素：引物GC含量、长度、模板复杂度。-优化方法：梯度PCR（如25-75℃）确定最佳Tm值，通常Tm=（GC含量×2+AT含量×4）+5℃。3.基因芯片在疾病诊断中的应用-肿瘤：检测肿瘤相关基因表达，辅助分型。-感染：快速检测病原体基因组，指导抗生素选择。-药物：分析药物靶点，预测个体化用药反应。4.蛋白质翻译后修饰类型及意义-类型：磷酸化（信号转导）、乙酰化（染色质调控）、糖基化（蛋白折叠）。-意义：调控蛋白活性、稳定性及相互作用，影响细胞功能。四、论述题答案与解析1.Sanger测序技术原理及应用-原理：通过ddNTPs终止延