生物安全柜操作规程

生物安全柜操作规程一、引言生物安全柜作为实验室生物安全防护的核心设备，其正确使用与规范操作是保障实验人员健康、防止实验材料交叉污染、以及保护环境免受生物危害因子污染的关键环节。本规程旨在提供一套系统、详实且易于遵循的操作指引，确保生物安全柜在各类微生物实验及相关操作中发挥其应有效能。所有操作人员必须经过严格培训，充分理解并熟练掌握本规程后方可上岗。二、适用范围本规程适用于实验室中所有类型生物安全柜（包括Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级，具体操作可根据不同级别安全柜特性略作调整）的日常操作、维护与管理。涉及的操作活动包括但不限于病原微生物的分离、培养、鉴定、制备，以及其他可能产生气溶胶或飞溅物的生物实验操作。三、操作前准备（一）个人防护装备（PPE）穿戴1.操作人员进入实验室前，应按规定穿戴好洁净的实验服或专用防护服。2.操作前务必佩戴一次性乳胶或丁腈手套，手套应包裹实验服袖口，确保无皮肤暴露。若手套有破损或污染，需立即更换。3.根据实验需要及生物安全等级要求，佩戴护目镜或面罩，以防止液体飞溅或气溶胶对眼部及面部造成伤害。4.长发应束起，不佩戴首饰、手表等易藏污纳垢或可能妨碍操作的饰品。（二）生物安全柜检查与准备1.外观检查：检查安全柜外壳、玻璃视窗是否完好无损，有无裂痕、破损或异常变形。检查电源插座及电源线是否安全，无破损、裸露现象。2.功能检查：*开启电源，确认风机正常启动，观察风压指示（如有）是否在正常范围。*检查前窗玻璃升降是否顺畅，能否固定在规定的操作高度（通常为指示线位置）。*确认紫外灯、照明灯工作正常。在进行操作前，如需要紫外消毒，应提前开启紫外灯对柜内进行至少30分钟的照射消毒（注意：紫外灯开启时，人员不得在柜前停留，避免紫外线直接照射）。操作开始前，务必关闭紫外灯，开启照明灯。3.清洁消毒：*用75%乙醇或其他合适的消毒剂擦拭安全柜内工作台面、侧壁、后壁及玻璃内表面。消毒时应遵循由上至下、由内至外的顺序，确保所有表面均得到充分擦拭。*对安全柜的前窗操作口边缘及柜体外表面可能接触的区域也进行消毒处理。*待消毒剂自然挥发干燥后，方可进行后续操作。（三）实验物品准备与摆放1.操作前，将本次实验所需的所有物品（如培养基、试剂、移液器、试管、培养皿等）集中准备齐全，并检查其包装是否完好，有无泄漏或污染。2.物品进入安全柜前，应先对其外表面进行消毒处理（如用75%乙醇擦拭），以避免将外部污染物带入柜内。3.物品在安全柜内的摆放应遵循以下原则：*分区放置：将物品按操作流程从左至右（或从右至左）依次摆放，形成“清洁区-操作区-污染区”的有序排列。例如，移液器、未使用的耗材放置在清洁区；正在操作的样品置于操作区中央；废弃物容器、污染的耗材放置在污染区。*避免阻挡：物品摆放不宜过高、过密，不得阻挡安全柜背部的回风隔栅和顶部的送风口，确保气流能够正常循环。*重物稳定：较重的物品应放置在工作台面后部靠近风机的位置，以保持安全柜的稳定性。*废弃物容器：在操作区一侧放置适当的生物废弃物容器，并确保其盖子易于开启和关闭，或使用一次性废物袋。四、操作中规范（一）开机与平衡1.确认所有准备工作就绪后，打开生物安全柜风机，让其运行至少5-10分钟，以建立稳定的气流屏障并清除柜内可能残留的污染物。2.在开始操作前，再次确认前窗玻璃已降至正确的操作高度。（二）手部与手臂消毒每次将手臂伸入安全柜前，以及在操作过程中接触可能被污染的物品后，均需用75%乙醇对手套表面进行消毒，并待其干燥。（三）操作行为规范1.动作轻柔缓慢：操作过程中，手臂在安全柜内的移动应轻柔、平稳，避免快速移动或突然动作，以防干扰柜内的气流模式，导致污染物外溢。2.保持在工作区内：所有操作，包括移液、混匀、开盖等，均应在工作台面中央区域进行，避免在靠近前窗操作口或后壁回风隔栅的区域进行关键操作。3.避免遮挡：操作时，头部不要伸入安全柜内，不要在柜内进行书写记录（可在柜外进行）。避免用手臂或物品遮挡面部前方的气流。4.防止气溶胶产生：*尽量避免在安全柜内进行可能产生大量气溶胶的操作，如剧烈振荡、超声破碎等。若必须进行，应采取额外的防护措施，如使用密封的离心管或在密闭容器内操作。*打开离心管、培养瓶等容器时，应将开口远离操作者，并缓慢开启，以减少气溶胶的释放。*使用移液辅助器进行移液，严禁用口吸移液管。5.及时清理洒落物：一旦发生液体泄漏，应立即停止操作，用浸有合适消毒剂的吸水材料覆盖并吸收泄漏物，作用适当时间后（如10-15分钟），再将其彻底清除。清除过程中避免产生气溶胶。6.物品进出原则：操作过程中，尽量减少物品进出安全柜的频率和次数。物品进出时，应缓慢通过前窗操作口，避免干扰气流。（四）实验材料处理1.实验过程中产生的生物废弃物，应及时放入柜内指定的、带有盖的生物安全废弃物容器中。2.污染的吸管、移液枪头应立即放入盛有消毒液的防刺穿容器内。3.实验材料在安全柜内的传递应避免交叉污染，不同样品的处理工具应分开使用。五、操作后处理（一）实验物品移出与处理1.操作结束后，将所有实验样品、试剂等妥善密封，标记清楚，按规定程序移出安全柜并进行后续处理或存放。2.污染的耗材和废弃物应确保密封完好，从安全柜中取出后，按实验室生物废弃物处理规定进行处理。（二）柜内清洁与消毒1.先用75%乙醇或其他合适的消毒剂擦拭所有曾接触过实验材料的表面，包括工作台面、侧壁、后壁、玻璃内表面以及可能被污染的设备表面。2.对于可能有明显污染物残留的区域，应先进行擦拭清除，再进行消毒。3.消毒后，将废弃物容器密封好移出安全柜。（三）安全柜关闭程序1.确保柜内物品已全部清理完毕，且消毒程序已完成。2.让风机继续运行至少5-10分钟，以确保将柜内可能残留的气溶胶彻底排出。3.如需进行紫外消毒（通常在每日最后一次使用结束后），可开启紫外灯照射30分钟以上，然后关闭紫外灯、照明灯，最后关闭总电源。4.如为连续操作，中间短暂离开时，可保持风机运行，仅关闭照明灯。六、日常维护与保养1.定期清洁：除每次操作前后的清洁外，应定期（如每周）对生物安全柜进行一次彻底的清洁消毒，包括对柜内顶部送风格栅的清洁。2.高效过滤器（HEPA）监测：应按照制造商建议或相关标准要求，定期（通常每年一次）对安全柜的HEPA过滤器进行完整性检测和风量、风速监测，确保其性能符合要求。检测应由专业人员进行。3.紫外灯管更换：紫外灯管的使用寿命有限，应根据使用频率和制造商建议定期更换（通常每12个月或累计使用时间达到规定上限时），即使灯管仍能发光也应更换，因为其杀菌效能可能已下降。4.零部件检查：定期检查安全柜的各种开关、指示灯、玻璃视窗密封条等是否完好，如有损坏或故障，应及时报修，不得带病运行。5.记录：建立生物安全柜使用与维护记录，详细记录每次使用情况、清洁消毒情况、维护保养情况及检测结果等。七、注意事项与应急处理1.禁止事项：*严禁在生物安全柜内使用明火（如酒精灯），除非有特殊且必要的实验需求，并采取了有效的防火和防止气流干扰措施。*严禁在安全柜运行时将前窗玻璃完全打开。*严禁在安全柜内放置与实验无关的物品。2.异常情况处理：*如在操作过程中发现安全柜出现异常声音、异味、风速明显变化、玻璃破损或其他故障时，应立即停止操作，将正在处理的生物材料妥善封存，撤离实验人员，关闭安全柜电源（若情况允许），并立即报告实验室负责人或设备管理人员，由专业人员进行检查和维修。*发生严重生物泄漏或意外暴露事故时，应立即启动实验室应急处理预案，采取相应的应急措施，并按规定上报。八、记录与存档每次使用生物安全柜后，操作人员应认真填写使用记录，内容至少包括：使用日期、时间、操作人员、实验内容（简述）、安全柜运行状况、清洁消毒情况、以及