病理检验技术试题及答案

病理检验技术试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分）1.在HE染色中，苏木素与细胞核结合的化学基础是A.氢键B.范德华力C.金属络合D.静电吸附答案：C解析：苏木素氧化为苏木红后，与铝离子形成带正电的络合物，再与带负电的DNA磷酸骨架通过静电与配位双重作用结合，故选C。2.下列关于PAS染色的叙述，错误的是A.过碘酸氧化1,2-乙二醇基生成醛基B.Schiff试剂中的碱性品红与醛基结合呈紫红色C.中性黏液呈阳性，酸性黏液呈阴性D.淀粉样物质呈强阳性答案：D解析：淀粉样物质主要含β-折叠蛋白，无糖原或黏多糖侧链，PAS呈阴性；糖原、中性黏液阳性，故D错误。3.免疫组化EnVision二步法中，"多聚体"指的是A.辣根过氧化物酶B.羊抗鼠IgGC.葡聚糖骨架上偶联多个酶分子与二抗D.链霉亲和素答案：C解析：EnVision系统将数十个HRP分子及二抗F(ab')₂段共价结合到葡聚糖骨架，形成"多聚体"，极大提高信号强度。4.冰冻切片出现"冰晶空洞"的主要原因是A.切片刀钝B.组织固定过度C.冷冻速率过慢D.抗卷板角度过大答案：C解析：缓慢冷冻使细胞内外水形成大冰晶，挤压组织结构，出现空泡；速冻可减少冰晶。5.计算核分裂象时，常规肿瘤病理计数单位面积是A.1mm²B.0.2mm²C.10个高倍视野D.0.5mm²答案：B解析：WHO软组织肿瘤分类推荐0.2mm²（等同于10个40×视野，视野直径0.5mm）。6.下列固定剂对免疫荧光标记影响最小的是A.4%多聚甲醛B.10%中性缓冲福尔马林C.Bouin液D.95%乙醇答案：A解析：多聚甲醛交联度低，抗原表位保留好；Bouin液含苦味酸，可淬灭荧光；乙醇使蛋白变性严重。7.电镜标本常用包埋剂是A.石蜡B.环氧树脂618C.OCTD.明胶答案：B解析：环氧树脂618黏度低、聚合均匀、耐电子束，是标准电镜包埋剂。8.原位杂交检测HPV16E6mRNA，探针标记最佳方式是A.地高辛-11-dUTPB.生物素-16-dUTPC.荧光素-12-dUTPD.³²P-dCTP答案：A解析：地高辛标记灵敏度达0.1copy/μl，无放射性，显色稳定，为FFPE标本首选。9.流式细胞术检测细胞周期，G₀/G₁峰CV值应控制在A.<2%B.<5%C.<8%D.<10%答案：B解析：临床流式规范要求CV<5%，过高提示样品降解或染色异常。10.特殊染色中，维多利亚蓝显示A.胶原纤维B.弹性纤维C.网状纤维D.肌纤维答案：B解析：维多利亚蓝与弹性蛋白的赖氨酸残基形成盐键，呈蓝绿色。11.免疫组化阳性对照应选择A.已知阳性组织B.试剂公司提供的阳性切片C.患者自身正常组织D.任意癌组织答案：A解析：阳性对照需与待测组织同处理，确认试剂有效；商业对照片仅作批间质控。12.石蜡切片厚度一般设置为A.2μmB.4μmC.6μmD.8μm答案：B解析：4μm兼顾细胞形态与透光性，过厚易重叠，过薄易碎。13.下列关于Masson三色染色叙述正确的是A.胶原纤维呈红色B.肌纤维呈绿色C.细胞核呈蓝色D.红细胞呈黑色答案：C解析：Weigert铁苏木素染核呈蓝黑色，磷钼酸分化后胶原蓝绿，肌纤维红。14.抗体稀释液中加入BSA主要目的是A.增加渗透压B.封闭非特异结合C.提供营养D.调节pH答案：B解析：BSA可占据疏水位点，减少一抗与组织非特异吸附。15.荧光原位杂交（FISH）探针变性温度通常为A.65℃5minB.75℃5minC.85℃10minD.95℃10min答案：B解析：75℃5min使DNA双链打开而不致FFPE切片脱片，随后立即冰浴。16.电镜负染色常用试剂是A.醋酸铀B.磷钨酸C.柠檬酸铅D.四氧化锇答案：B解析：磷钨酸pH6.8，电子密度高，背景暗，病毒颗粒亮。17.PCR-SSCP检测突变，最关键的步骤是A.退火温度B.变性聚丙烯酰胺凝胶浓度C.上样量D.银染时间答案：B解析：凝胶浓度决定单链DNA构象差异能否被区分，常用12%-15%。18.免疫组化DAB显色后，阳性颗粒颜色为A.红色B.蓝色C.棕黄色D.紫色答案：C解析：HRP催化DAB生成不溶性棕黄色聚合物。19.石蜡切片脱蜡至水最后一步常用A.100%乙醇B.95%乙醇C.自来水D.蒸馏水答案：D解析：蒸馏水去除离子，防止后续染色产生沉淀。20.计算Ki-67指数时，计数细胞数为A.100B.200C.500D.1000答案：D解析：WHO乳腺肿瘤分类推荐至少计数1000个肿瘤细胞，减少抽样误差。21.下列哪项不是抗原修复方法A.高压热修复B.胰酶消化C.微波修复D.酸水解答案：D解析：酸水解用于Feulgen染色，非抗原修复。22.流式CD45/SSC设门主要排除A.红细胞B.血小板C.碎片D.有核细胞答案：A解析：CD45+设门选白细胞，红细胞无核不表达CD45。23.石蜡包埋组织DNA提取，脱蜡首选A.二甲苯B.丙酮C.氯仿D.异丙醇答案：A解析：二甲苯溶解石蜡，随后乙醇梯度水化。24.特殊染色显示含铁血黄素用A.Perls蓝B.PASC.油红OD.刚果红答案：A解析：Perls蓝反应：Fe³⁺+亚铁氰化钾→普鲁士蓝沉淀。25.免疫组化一抗4℃过夜孵育优点A.节省时间B.降低背景C.提高穿透D.减少抗体用量答案：B解析：低温减缓非特异结合，背景干净。26.电镜锇酸固定主要保存A.糖原B.脂类C.DNAD.RNA答案：B解析：四氧化锇与不饱和脂肪酸双键结合，电子密度高，膜结构清晰。27.PCR扩增失败，电泳无条带，最先排查A.引物二聚体B.dNTP降解C.退火温度过高D.模板降解答案：D解析：模板DNA断裂或量不足为最常见原因。28.冰冻切片免疫荧光，封闭液常用A.5%羊血清B.0.1%TritonX-100C.3%H₂O₂D.10%脱脂牛奶答案：A解析：同种属正常血清可封闭Fc受体，减少非特异荧光。29.石蜡切片烘片温度时间A.37℃30minB.56℃30minC.60℃1hD.80℃10min答案：C解析：60℃1h使蜡微熔，切片牢固贴附。30.计算肿瘤坏死面积比例，采用A.目镜测微尺B.图像分析软件阈值分割C.肉眼估算D.称重法答案：B解析：软件阈值分割可客观计算坏死像素/总面积，误差<3%。二、填空题（每空1分，共20分）31.免疫组化中，H₂O₂阻断内源性过氧化物酶的浓度为________%，室温时间________min。答案：3，10解析：3%H₂O₂室温10min可灭活红细胞及组织内过氧化物酶，避免假阳性。32.流式细胞术PI染色，RNA酶终浓度为________μg/mL，37℃孵育________min。答案：100，30解析：RNA酶去除RNA，防止PI结合RNA干扰DNA定量。33.电镜超薄切片厚度设定为________nm，常用染色液为________和________。答案：70，醋酸铀，柠檬酸铅解析：70nm获银-金干涉色，双染色提高膜对比。34.PCR扩增体系25μL，引物终浓度为________pmol/μL，Taq酶用量________U。答案：0.4，0.5解析：0.4pmol/μL≈10pmol/25μl，0.5UTaq为常规浓度。35.特殊染色显示黏液，阿尔辛蓝pH________时，羧基化黏液呈蓝色；pH________时，硫酸化黏液呈蓝色。答案：2.5，1.0解析：pH2.5染羧基化（唾液酸黏液），pH1.0染硫酸化（软骨、结肠杯状细胞）。36.免疫组化一抗浓度通过________曲线确定，最佳稀释比对应________平台期。答案：棋盘滴定，最高信噪比解析：棋盘滴定选信号最强且背景最低的稀释度。37.FISH探针浓度通常为________ng/μL，杂交后洗脱液0.1×SSC含________mmol/LNaCl。答案：10，15解析：10ng/μL探针足够，0.1×SSC=15mmol/LNaCl，严格洗涤去非特异。38.石蜡切片脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各________min，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各________min。答案：10，3解析：二甲苯10min充分溶蜡，乙醇3min梯度水化。39.计算核面积公式：A=答案：长轴，短轴解析：椭圆面积公式，核不规则时以椭圆近似。40.流式分选回收率计算公式：回收率=________/________×100%。答案：分选后活细胞数，目标细胞理论数解析：衡量分选效率的核心指标。三、名词解释（每题4分，共20分）41.抗原修复答案：利用热、酶或化学方法打断福尔马林固定导致的蛋白交联，恢复抗原表位空间构象，提高抗体结合效率的技术。42.荧光淬灭答案：荧光分子受激发后，因环境因素（pH、自由基、光照）导致电子跃迁能量以非辐射形式耗散，荧光强度不可逆降低的现象。43.高分辨率熔解曲线（HRM）答案：在PCR结束后逐步升温，实时监测双链DNA饱和荧光染料释放的荧光信号，通过熔解温度差异识别突变、甲基化等序列变异的技术。44.核分裂象答案：指细胞分裂中期、后期、末期形态可辨的染色体排列，是评估肿瘤增殖活性的重要组织学指标。45.原位杂交答案：利用标记的核酸探针与组织细胞内互补RNA或DNA序列杂交，通过显色或荧光信号定位基因表达或染色体异常的技术。四、简答题（每题10分，共30分）46.简述免疫组化染色出现非特异性着色的常见原因及对策。答案：原因：①内源性生物素或Fc受体结合；②一抗与非靶蛋白交叉反应；③二抗种属交叉；④DAB沉淀扩散；⑤组织干燥。对策：①用2%卵白素或动物血清封闭；②增加一抗特异性验证，采用敲除组织阴性对照；③选用高交叉吸附二抗；④缩短显色时间，控制DAB浓度；⑤湿盒孵育，避免气流。47.写出流式细胞术检测细胞凋亡AnnexinV/PI双染的实验步骤及结果判定。答案：步骤：1.收集1×10⁶细胞，PBS洗2次；2.重悬于100μLBindingBuffer，加5μLFITC-AnnexinV，室温避光15min；3.加400μLBuffer及5μLPI（50μg/mL），上机；4.设FITC/PI双参数散点图。判定：Q3区（AnnexinV⁻PI⁻）活细胞；Q4区（AnnexinV⁺PI⁻）早期凋亡；Q2区（AnnexinV⁺PI⁺）晚期凋亡/坏死；Q1区（AnnexinV⁻PI⁺）机械损伤或裸核。48.描述PCR-RFLP检测KRASG12D突变的原理及电泳结果判读。答案：原理：野生型KRASexon2含BstNI识别序列5'-CC↓WGG-3'，G12D突变（c.35G>A）破坏该位点。扩增152bp片段后，BstNI酶切：野生型：152bp→112+40bp（40bp过小跑出凝胶）；突变型：152bp不被切，保持单一条带；杂合型：152+112bp两条带。电泳：3%琼脂糖凝胶，100V40min，野生型见112bp带，突变型152bp，杂合型152/112bp。五、综合应用题（共50分）49.病例：女性，52岁，乳腺肿物穿刺活检，直径1.8cm，镜下示小管状结构，肌上皮缺失。免疫组化结果：ER90%强+，PR80%强+，HER21+，Ki-678%，p63-，Calponin-，CD10-。问题：（1）给出病理诊断及依据（6分）；（2）若Ki-67指数误差要求±2%，需计数多少细胞（给出计算式）（6分）；（3）若实验室HER2检测流程出现假阴性，列出3种技术原因（6分）；（4）简述ER免疫组化半定量H-score公式并计算本例得分（6分）；（5）若需行FISH检测HER2，说明探针类型、杂交区域及阳性判定标准（6分）。答案：（1）诊断：低级别浸润性导管癌，Nottingham1级。依据：小管状结构、肌上皮标记阴性、ER/PR高表达、Ki-67低增殖。（2）由公式n=，取置信度95%（Z=1.96），允许误差E=0.02，预期阳性率p=0.08，得n（3）假阴性原因：①组织固定延迟>1h，抗原降解；②切片烘烤温度过高，抗原表位破坏；③HER2抗体克隆号敏感性低（如CB11较SP3敏感性差）；④染色过程中抗体孵育时间不足；⑤FISH探针未覆盖17号染色体着丝粒，无法校正倍体。（4）H-score=∑(PI×I)=（0×%阴性）+(1×%弱阳)+(2×%中阳)+(3×%强阳)。本例90%强阳，10%阴性，H-score=0×10+3×90=270。（5）探针：HER2/CEP17双探针，杂交区域17q12（HER2）与17p11.1-q11.1（CEP17）。阳性：HER2/CEP17≥2.0或HER2平均拷贝数≥6.0signals/细胞。50.设计实验：验证某新型纳米载体能否提高结直肠癌组织PD-L1免疫组化灵敏度。要求：①列出分组；②说明对照设置；③描述结果量化方法；④给出统计学检验；⑤预期结果表述。答案：①分组：A.传统一抗4℃过夜；B.纳米载体-一抗复合物4℃过夜；C.纳米载体-一抗复合物室温1h；D.空白对照（PBS代替一抗）。每组n=10例FFPE标本。②对照：阳性对照采用已知PD-L1高表达扁桃体组织；阴性对照采用CRISPR敲除PD-L1的SW480细胞系移植瘤；试剂对照以同型IgG替代一抗。③量化：使用AperioAT2扫描仪获取全片，ColorDeconvolution算法分离DAB信号，计算H-score；同时由两名病理医师双盲评估，取均值。④统计：H-score以me⑤预期：纳米载体组H-score较传统组提高≥30%，室温1h组与4℃过夜组等效，背景H-score<5，表明纳米载体可缩短流程并提升灵敏度。六、计算题（共20分）51.已知某组织切片面积2.5mm²，显微镜40×物镜视野直径0.5mm，计数核分裂象12个，计算每mm²分裂象数目。若该肿瘤最大径2cm，估算整个肿瘤总分裂象数（假设密度均匀）。答案：视野面积=π=分裂象密度=≈61.2肿瘤面积=π×总分裂象数=61.2×52.实时荧光定量PCR，目的基因与内参扩增效率均为100%，