病理技师考试试题及答案

病理技师考试试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分）1.在HE染色中，苏木素主要与细胞内的哪种结构结合？A.线粒体B.核糖体C.染色质D.高尔基体答案：C解析：苏木素为碱性染料，可与细胞核内的酸性成分——染色质（DNA）结合，使细胞核呈蓝紫色。2.下列哪项不是石蜡切片脱水的目的？A.去除组织内水分B.使组织透明C.便于石蜡浸透D.固定组织蛋白答案：D解析：脱水是为了去除水分、透明剂置换、利于石蜡浸透；固定由前期福尔马林完成，脱水步骤不再承担固定功能。3.免疫组化染色中，DAB显色终产物颜色为：A.红色B.蓝色C.棕黄色D.绿色答案：C解析：DAB（3,3'-二氨基联苯胺）在H₂O₂存在下被HRP催化氧化生成不溶性棕黄色沉淀。4.下列哪种固定液兼具脱水作用？A.10%中性缓冲福尔马林B.Carnoy液C.Bouin液D.Zenker液答案：B解析：Carnoy液含无水乙醇与氯仿，兼有固定与脱水作用，适用于糖原、DNA等特殊染色。5.切片出现“裂纹”最常见的原因是：A.刀钝B.石蜡熔点过低C.组织固定不足D.切片室湿度过高答案：A解析：刀钝导致组织撕裂而非顺畅切割，形成裂纹；其他因素可致褶皱、挤压或干燥假象。6.用于显示横纹肌横纹的特殊染色是：A.Masson三色B.PTAHC.PASD.刚果红答案：B解析：磷钨酸苏木素（PTAH）可显示肌原纤维横纹，A显示胶原，C显示糖原，D显示淀粉样物。7.免疫组化抗原热修复最常用的缓冲液是：A.Tris-HClpH7.4B.PBSpH7.2C.EDTApH8.0D.CitratepH6.0答案：D解析：柠檬酸钠缓冲液（CitratepH6.0）是最经典的热修复液，对多数核抗原修复效果佳。8.组织透明剂二甲苯的替代环保试剂是：A.乙醇B.丙酮C.异丙醇D.柠檬烯答案：D解析：柠檬烯（d-limonene）为萜烯类环保透明剂，毒性低，可替代二甲苯。9.下列哪项属于非特异性染色控制方法？A.一抗对照B.省略一抗C.阳性对照D.内源性生物素阻断答案：D解析：内源性生物素阻断可消除组织内源生物素导致的非特异染色；B为阴性对照，A、C为特异性对照。10.显微镜NA值（数值孔径）增大，分辨率：A.降低B.不变C.提高D.先升后降答案：C解析：根据瑞利判据d=11.石蜡切片厚度一般设置为：A.1–2μmB.3–5μmC.8–10μmD.15–20μm答案：B解析：常规病理诊断切片3–5μm，兼顾细胞形态与透光度。12.免疫荧光染色后，标本长期保存需：A.室温避光B.4℃避光C.−20℃避光防结晶D.37℃干燥答案：C解析：荧光染料易淬灭，−20℃避光可延缓淬灭并防结晶。13.下列哪种酶可用于骨组织脱钙终点的判断？A.胰蛋白酶B.胃蛋白酶C.碱性磷酸酶D.5%草酸答案：C解析：脱钙终点可用ALP染色，若骨小梁周边呈阳性，提示钙盐已除尽，酶活性恢复。14.切片封固使用中性树胶的主要目的是：A.增加折光率B.溶解染料C.防止褪色D.硬化组织答案：A解析：中性树胶折光率1.52，与玻片接近，可减少光散射，提高透明度。15.免疫组化中，HRP的底物不包括：A.DABB.AECC.TMBD.NBT/BCIP答案：D解析：NBT/BCIP为AP（碱性磷酸酶）底物，其余为HRP底物。16.组织固定后流水冲洗的主要目的是：A.增强染色B.去除多余固定液C.硬化组织D.增加折光答案：B解析：冲洗可去除残留固定液，防止后步染色中产生沉淀或影响抗原。17.下列哪项不是冰冻切片优点？A.快速C.抗原保存好D.细胞形态佳答案：D解析：冰冻切片因无脱水透明包埋，细胞易肿胀、冰晶形成，形态不如石蜡。18.显微镜Köhler照明步骤中，首先调整的是：A.聚光器孔径光阑B.视场光阑C.光源聚焦D.目镜屈光度答案：C解析：Köhler照明先调光源聚焦，使灯丝像落在聚光器孔径光阑平面。19.特殊染色中，PAS阳性物质为：A.DNAB.RNAC.糖原D.弹性纤维答案：C解析：PAS（过碘酸-雪夫）染多糖，糖原呈紫红色。20.免疫组化二抗系统“聚合物法”比ABC法优势在于：A.灵敏度低B.背景高C.操作步骤少D.内源生物素干扰少答案：D解析：聚合物法无生物素参与，避免内源生物素背景。21.组织处理机中“真空+热”模式主要解决：A.脂肪组织浸蜡难B.血液丰富组织自溶C.小标本丢失D.骨组织脱钙答案：A解析：脂肪组织因脂质阻碍石蜡浸透，真空加热可降低熔融石蜡黏度，促进浸透。22.切片出现“搓衣板”征，最先排查：A.切片速度B.刀架松动C.石蜡温度D.组织固定答案：B解析：刀架松动致刀刃震动，出现规律横纹，形似搓衣板。23.免疫组化一抗浓度通常用何种方法优化？A.棋盘滴定B.单次梯度C.固定浓度D.厂家推荐即可答案：A解析：棋盘滴定同时改变一抗浓度与孵育时间，找到信噪比最佳点。24.显微镜分辨率公式d=A.组织厚度B.光源波长C.介质折射率D.物镜倍率答案：B解析：λ为照明光波长，波长越短，分辨率越高。25.石蜡包埋中心温度一般控制在：A.45℃B.56℃C.65℃D.80℃答案：B解析：石蜡熔点56–58℃，中心设56℃可保持液态且减少组织碳化。26.免疫组化中，阻断内源过氧化物酶常用：A.0.3%H₂O₂甲醇溶液B.10%山羊血清C.avidinD.冰醋酸答案：A解析：H₂O₂可灭活红细胞内过氧化物酶，降低背景。27.切片封片后气泡最常见原因是：A.树胶过稀B.盖玻片倾斜放下C.切片过厚D.中性树胶含酸答案：B解析：盖玻片倾斜放下可挤出空气，垂直放下易trapping气泡。28.下列哪种染料属于异染性染料？A.伊红B.甲苯胺蓝C.苏木素D.亮绿答案：B解析：甲苯胺蓝与硫酸软骨素结合后呈紫红色，为异染现象。29.免疫组化阳性信号在胞核定位，复染宜选：A.苏木素B.伊红C.甲基绿D.刚果红答案：C解析：甲基绿染核呈绿色，与DAB棕黄对比明显，避免同色重叠。30.组织切片脱蜡至水最后一步乙醇浓度为：A.100%B.95%C.80%D.70%答案：B解析：脱蜡后100%、95%、80%、70%梯度复水，最后95%→水，防止直接入水致组织脱落。二、配伍题（每题1分，共10分）A.10%中性缓冲福尔马林B.4%多聚甲醛C.丙酮D.醇性福尔马林E.Bouin液31.用于免疫荧光固定，减少自发荧光32.用于糖原保存良好33.用于脂肪染色的初始固定34.用于骨髓活检脱钙前固定35.用于快速固定大标本答案：31-B32-E33-D34-A35-A解析：多聚甲醛交联少，自发荧光低；Bouin含苦味酸，糖原保存佳；醇性福尔马林可固定脂滴；骨髓先中性福尔马林固定防细胞变形；大标本用中性福尔马林穿透快。三、判断题（每题1分，共10分，正确打“√”，错误打“×”）36.冰冻切片可直接入丙酮固定10min后染色。答案：√解析：丙酮可沉淀蛋白，固定冰冻切片，保持抗原。37.免疫组化中，一抗孵育温度越高，背景越低。答案：×解析：高温增加非特异结合，背景升高，通常室温或4℃。38.石蜡切片烤片温度可达80℃，时间越长越好。答案：×解析：80℃超30min易使抗原过度交联，信号减弱，一般60℃30–60min。39.显微镜聚光器孔径光阑开大，可增加对比度。答案：×解析：孔径开大提高分辨率但降低对比度，需权衡。40.PAS染色前过碘酸氧化时间可延长至30min以增强信号。答案：×解析：过碘酸超10min易过度氧化，产生醛基丢失，信号反而下降。41.免疫组化中，使用Triton可通透细胞膜。答案：√解析：TritonX-100为去垢剂，可打孔，利于抗体进入胞内。42.中性树胶封片后无需再干燥，可直接观察。答案：√解析：中性树胶为树脂，固化后无需额外干燥。43.骨组织脱钙液pH越低，脱钙速度越慢。答案：×解析：pH越低，酸解钙越快，但易损伤组织。44.免疫荧光二抗标记FITC，激发波长为495nm。答案：√解析：FITC最大激发495nm，发射519nm。45.切片刀角度增大，切片厚度增加。答案：×解析：刀角影响切削力，不改变设定厚度，厚度由进尺旋钮控制。四、填空题（每空1分，共20分）46.免疫组化中，阻断非特异结合常用________血清，浓度为________%。答案：正常山羊/兔，5–10%47.石蜡包埋常用熔点为________℃的石蜡，加入________蜡可提高硬度。答案：56–58，聚乙烯48.显微镜分辨率与波长λ、NA关系公式为________。答案：d49.HE染色中，苏木素染液氧化剂常用________，其反应为________反应。答案：碘酸钠，氧化-还原50.免疫组化显色后，如需长期保存，可用________封片剂，避免________淬灭。答案：水性封片剂，荧光51.骨组织脱钙终点可用________试纸测定，pH应大于________。答案：pH，4.552.切片刀背面的倾斜角称为________角，一般设定为________°。答案：clearance，5–753.免疫组化热修复常用________缓冲液，pH________，温度________℃，时间________min。答案：citrate，6.0，95–100，15–2054.脂肪组织特殊染色OilRedO需用________切片，封片用________封片剂。答案：冰冻，甘油明胶55.显微镜Köhler照明时，视场光阑缩小后，边缘应位于视野________%，再调________光阑。答案：80，孔径五、简答题（每题6分，共30分）56.简述免疫组化中“特异性对照”包含哪些类型及其意义。答案：1.阳性对照：已知阳性组织，验证系统有效性；2.阴性对照：省略一抗或使用同型IgG，检测非特异染色；3.吸收对照：过量抗原与一抗预孵育，信号消失证明抗体特异；4.替代对照：用无关抗体替代一抗，排除二抗非特异结合；5.自身对照：同一组织内已知阴阳性区域对比，减少个体差异。意义：确保染色结果真实可靠，避免假阳/阴性，提高诊断准确性。57.描述石蜡切片出现“褶皱”的原因及解决措施。答案：原因：1.切片室温度过高，石蜡软化；2.切片刀钝或角度不当；3.组织脱水不彻底，含水分；4.摊片水温过高或时间过长。措施：1.调低切片室温度至20–22℃；2.更换新刀或调整刀角；3.重设脱水程序，确保酒精浓度梯度；4.控制摊片水温45–48℃，时间3–5s，及时捞片。58.说明免疫荧光与免疫酶标染色在操作步骤上的三点主要差异。答案：1.固定：荧光常用4%多聚甲醛，避免醛基自发荧光；酶标可用福尔马林；2.显色：荧光用荧光素标记二抗，直接激发发光；酶标用HRP/AP催化底物显色；3.封片：荧光需用含抗淬灭剂的水性封片剂，4℃避光保存；酶标可用中性树胶，室温长期保存。59.写出脱钙液EDTA配方（pH7.2）并说明其优点。答案：配方：EDTA·2Na10g，溶于800mL蒸馏水，用NaOH调pH至7.2，补足至1000mL，加入0.5gThymol防腐。优点：1.对组织损伤小，抗原保存好；2.可微波加速，缩短时间；3.无酸沉淀，不影响后续染色；4.适合免疫组化及分子检测。60.解释“抗原修复”机制并列举两种常用方法。答案：机制：福尔马林固定使蛋白交联，遮蔽抗原表位；热或酶修复可断裂交联，暴露表位，恢复抗体结合能力。方法：1.热诱导抗原修复（HIER）：高压锅、水浴、微波，用citratepH6.0或EDTApH8.0；2.酶消化法：胰蛋白酶、蛋白酶K，37℃10–20min，适用于细胞表面抗原。六、案例分析题（每题10分，共20分）61.病例：乳腺穿刺标本，免疫组化标记ER，阴性对照出现弥漫核阳。问题：（1）分析可能原因；（2）提出验证与纠正方案。答案：（1）原因：a.内源性生物素含量高，乳腺组织富含生物素，ABC系统非特异结合；b.阻断剂失效或省略；c.一抗浓度过高；d.二抗交叉反应。（2）方案：a.换用聚合物法检测系统，避免生物素；b.增设avidin/biotin阻断步骤；c.重新棋盘滴定一抗浓度；d.更换不同批次二抗；e.用乳腺已知ER阴性组织作阴性对照，确认系统干净。62.病例：胃镜活检，HE切片细胞核呈“空泡状”，染色浅，核膜不清。问题：（1）指出最可能的固定问题；（2）给出改进措施。答案：（1）固定不足或延迟固定，导致细胞自溶，核染色质降解，出现空泡。（2）措施：a.活检后立即投入足量10%中性缓冲福尔马林，体积≥组织20倍；b.固定时间≥6h，≤24h；c.若无法及时固定，可用喷雾固定或湿盐水纱布包裹，4℃转运，1h内投入固定液；d.对可疑标本，重新取材并记录固定时间，确保标准化。七、计算题（每题10分，共20分）63.已知显微镜使用λ=550nm绿光，物镜NA=1.30，求其理论分辨率；若换用NA=1.40物镜，分辨率提高百分比多少？答案：==提高百分比=×64.组织处理机设定：脱水100%乙醇每缸200mL，每次处理乳腺组织30块，平均每块0.5g，含水70%，密度1g/mL。求每缸乙醇理论最大使用次数，使终浓度≥95%。忽略挥发。答案：每块排水量：0.530块总水：30设可用x次，则每次带入水10.5mL，x次后总水10.5x，总体积200+10.5x要求：≥解得：200故理论最大1次，实际应每批次更换新液，确保浓度。八、论述题（每题15分，共30分）65.结合工作经验，论述病理技师如何在免疫组化全流程中实施质量控制，确保结果可重复、可追踪、可量化。答案：1.前处理标准化：固定液统一10%中性缓冲福尔马林，固定时间记录；脱水程序验证，每周检测乙醇浓度≥95%；包埋石蜡熔点56–58℃，定期过滤。2.试剂质控：一抗接收后分装−20℃，避免反复冻融；工作液2–8℃保存≤1个月；每批次试剂用阳性/阴性对照组织，结果存档；聚合物试剂盒批号记录，过期废弃。3.操作SOP：切片厚度3–4μm，捞片水温45℃；烤片60℃45min；抗原修复参数固定：高压锅120℃2min，自然冷却；一抗孵育室温1h或4℃过夜，湿度盒水平放置；DAB显色时间用秒表记录，阳性信号呈棕黄即终止。4.室内质控图：每月统计阳性率、背景率，绘制Levey-Jennings图，±2SD警告，±3SD停发报