2026年分子生物学检验培训试题及答案

2026年分子生物学检验培训试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.核酸提取过程中，用于沉淀DNA的常用试剂是：A.75%乙醇B.苯酚/氯仿C.蛋白酶KD.异硫氰酸胍答案：A解析：75%乙醇用于DNA沉淀（低浓度乙醇可降低DNA溶解度）；苯酚/氯仿用于去除蛋白质；蛋白酶K降解蛋白质；异硫氰酸胍是RNA提取中常用的变性剂。2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenⅠ的作用是：A.特异性结合目标基因B.嵌入双链DNA发出荧光C.标记探针D.激活Taq酶活性答案：B解析：SYBRGreenⅠ是非特异性荧光染料，可嵌入所有双链DNA（包括引物二聚体），通过荧光强度反映扩增产物量；特异性结合目标基因需探针（如TaqMan探针）。3.下列哪项不是基因测序质量控制的关键指标？A.测序深度B.碱基错误率C.样本OD260/OD280比值D.覆盖均匀度答案：C解析：OD260/OD280比值是核酸纯度指标（合格范围1.82.0），属于测序前样本质量控制；测序深度、错误率、覆盖均匀度是测序数据本身的质量指标。4.Southernblot的主要检测对象是：A.蛋白质B.DNAC.RNAD.小分子代谢物答案：B解析：Southernblot用于DNA的检测（DNA电泳→转膜→探针杂交）；Northernblot检测RNA，Westernblot检测蛋白质。5.下一代测序（NGS）中，“双端测序”指的是：A.同时检测正向和反向互补链B.对同一DNA片段两端进行测序C.同时使用两种测序平台D.检测DNA和RNA两种核酸答案：B解析：双端测序（Pairedendsequencing）是对DNA片段的5'端和3'端分别测序，获得两段序列，可提高拼接准确性。二、简答题（每题10分，共40分）1.简述PCR反应体系的基本组成及各组分的作用。答案：PCR反应体系包括：①模板DNA（待扩增的目标序列）；②引物（一对特异性寡核苷酸，决定扩增区域）；③dNTP（脱氧核苷酸，合成DNA的原料）；④TaqDNA聚合酶（催化dNTP沿模板延伸）；⑤缓冲液（维持反应pH及Mg²+浓度，Mg²+是Taq酶的激活剂）；⑥去离子水（稀释和平衡体系）。2.请比较qPCR绝对定量与相对定量的区别及应用场景。答案：绝对定量通过标准曲线计算目标基因的精确拷贝数（需已知浓度的标准品），适用于病毒载量检测（如HIV、HBV）；相对定量以参考基因（如GAPDH）为内参，计算目标基因相对于内参的表达倍数（2^ΔΔCt法），适用于基因表达差异分析（如肿瘤标志物mRNA水平比较）。3.基因芯片技术的主要步骤包括哪些？答案：①芯片制备（将探针（cDNA或寡核苷酸）固定于固相载体）；②样本处理（提取RNA→反转录为cDNA→荧光标记）；③杂交（标记样本与芯片探针杂交，未结合的样本洗脱）；④信号检测（激光扫描读取荧光信号）；⑤数据分析（通过软件分析信号强度，反映基因表达量或突变情况）。4.简述NGS在肿瘤分子检测中的应用及优势。答案：应用包括：①驱动基因突变检测（如EGFR、ALK）指导靶向治疗；②肿瘤突变负荷（TMB）评估免疫治疗疗效；③微小残留病灶（MRD）监测复发。优势：①高通量（一次检测数百个基因）；②高灵敏度（可检测丰度<1%的低频突变）；③多维度分析（同时检测点突变、插入缺失、融合基因等）。三、案例分析题（每题20分，共40分）1.某实验室接收一份疑似结核患者的痰液样本，需通过分子生物学方法检测结核分枝杆菌（MTB）。请设计实验流程，并说明关键质量控制步骤。答案：实验流程：①样本前处理：痰液用NaOH消化（裂解细胞，灭活细菌）→离心收集沉淀；②核酸提取：使用磁珠法或柱提法提取MTBDNA（需设阴性对照，避免交叉污染）；③qPCR扩增：选择MTB特异性靶基因（如IS6110），设计引物探针→配置反应体系（含内标，监测抑制物）；④结果判读：Ct值<38且熔解曲线单一峰为阳性，无扩增或Ct≥40为阴性，Ct3840需重复检测。质量控制：①样本处理区、扩增区、产物分析区严格分区；②使用防气溶胶吸头；③每批实验设阳性对照（已知MTBDNA）、阴性对照（无模板水）、内标对照（监测提取和扩增抑制）；④定期校准仪器（如荧光定量PCR仪）。2.患者女性，58岁，肺腺癌晚期，需检测EGFR基因19外显子缺失突变以指导靶向治疗。实验室采用ARMSPCR（扩增阻滞突变系统）检测，结果显示突变型Ct=28，野生型Ct=30。请解释检测原理，并判断结果意义。答案：ARMSPCR原理：利用突变特异性引物（3'端匹配突变碱基）和野生型引物，Taq酶延伸需引物3'端与模板完全匹配，突变型引物仅在存在突变时扩增，野生型引物仅在存在野生型时扩增。