某药品微生物限度鉴定报告

某药品微生物限度鉴定报告一、检验样品信息本次检验样品为XX药业有限公司生产的XX口服片剂，样品批号为20251101，规格为0.5g/片，包装形式为铝塑泡罩包装，有效期至2027年10月。样品于2025年11月15日由委托方送检，检验目的为完成药品上市前的微生物限度符合性检查，确保产品符合《中国药典》2025年版相关要求。二、检验依据与标准本次微生物限度鉴定严格遵循《中国药典》2025年版四部通则1105“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”、通则1106“非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”及通则1107“非无菌药品微生物限度标准”。同时，参考XX药业有限公司提供的企业内控标准（Q/XX001-2025），对样品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数进行计数，并控制菌检查（大肠埃希菌、沙门菌）。三、检验材料与设备（一）培养基胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）：用于需氧菌总数计数，购自北京陆桥技术股份有限公司，批号20250901，经适用性检查合格。沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）：用于霉菌和酵母菌总数计数，购自青岛海博生物技术有限公司，批号20250815，经适用性检查合格。麦康凯琼脂培养基（MAC）：用于大肠埃希菌的选择性分离，购自广东环凯微生物科技有限公司，批号20250920，经适用性检查合格。三糖铁琼脂培养基（TSI）：用于沙门菌的生化鉴定，购自杭州微生物试剂有限公司，批号20250830，经适用性检查合格。（二）试剂与耗材磷酸盐缓冲液（PBS，0.1mol/L，pH7.2）：用于样品稀释液制备，自行配制并灭菌，经无菌检查合格。无菌生理盐水：购自山东威高药业股份有限公司，批号20250710，经无菌检查合格。革兰氏染色液：购自珠海贝索生物技术有限公司，批号20250605，有效期内使用。无菌吸管、无菌培养皿、无菌均质袋：均购自江苏康健医疗用品有限公司，经环氧乙烷灭菌处理，批号20250910。（三）仪器设备立式压力蒸汽灭菌器：型号LDZX-50KBS，上海申安医疗器械厂，经计量校准合格，校准证书编号20250801。生物安全柜：型号BSC-1300IIA2，苏州安泰空气技术有限公司，经定期检测合格，检测证书编号20250715。恒温培养箱：型号HH.B11.600，上海跃进医疗器械有限公司，温度校准范围30-35℃，偏差≤±0.5℃。霉菌培养箱：型号MJ-250，上海一恒科学仪器有限公司，温度校准范围20-25℃，湿度校准范围40-60%RH。菌落计数器：型号JLQ-S1，杭州大吉光电仪器有限公司，经计量校准合格，校准证书编号20250905。光学显微镜：型号CX33，奥林巴斯（中国）有限公司，用于微生物形态学观察。四、检验方法与过程（一）样品处理取供试品10片，去除包装后，置于无菌均质袋中，加入100mL无菌磷酸盐缓冲液（pH7.2），用均质器以8000-10000r/min均质处理5分钟，制成1:10的供试液。若供试液含较大颗粒，可进行适当振摇，或使用无菌纱布过滤后取续滤液进行检验。（二）微生物计数需氧菌总数计数：采用平皿法，取1:10供试液1mL，加入无菌平皿中，立即倾注约15mL温度不超过45℃的胰酪大豆胨琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平板，置于30-35℃培养箱中培养3天。同时，取1:10供试液1mL，加入9mL无菌磷酸盐缓冲液中，制成1:100的稀释液，重复上述操作，进行平行试验。另取1mL无菌磷酸盐缓冲液作为阴性对照，同法操作。霉菌和酵母菌总数计数：取1:10供试液1mL，加入无菌平皿中，倾注约15mL温度不超过45℃的沙氏葡萄糖琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平板，置于20-25℃培养箱中培养5天。同时，进行1:100稀释液的平行试验，并设置阴性对照。（三）控制菌检查大肠埃希菌检查：取1:10供试液10mL，接种至100mL胰酪大豆胨液体培养基中，置于30-35℃培养18-24小时。取上述培养物1mL，接种至10mL麦康凯液体培养基中，42-44℃培养24-48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30-35℃培养18-24小时。观察平板上是否出现红色或紫红色、周围有浑浊带的菌落。挑取疑似菌落进行革兰氏染色镜检及生化试验（如靛基质试验、甲基红试验等）。沙门菌检查：取1:10供试液10mL，接种至100mL营养肉汤培养基中，30-35℃培养18-24小时。取上述培养物0.1mL，接种至10mL四硫磺酸盐亮绿增菌液中，35-37℃培养18-24小时；同时取培养物1mL，接种至10mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液中，35-37℃培养18-24小时。分别取两种增菌液划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板（XLD）和沙门菌、志贺菌琼脂平板（SS）上，35-37℃培养18-24小时。观察平板上是否出现疑似沙门菌的菌落（XLD平板上为黑色中心或全黑色的菌落，SS平板上为无色或淡黄色、半透明的菌落）。挑取疑似菌落接种至三糖铁琼脂培养基和赖氨酸脱羧酶培养基中，35-37℃培养18-24小时，观察生化反应结果。五、检验结果与分析（一）微生物计数结果需氧菌总数：1:10稀释度的两个平板菌落数分别为23cfu和27cfu，1:100稀释度的两个平板菌落数均小于1cfu。根据《中国药典》规定，需氧菌总数以平均菌落数乘以稀释倍数计算，结果为(23+27)/2×10=250cfu/片。阴性对照平板无菌落生长，表明试验过程无污染。霉菌和酵母菌总数：1:10稀释度的两个平板菌落数分别为0cfu和1cfu，1:100稀释度的两个平板均无菌落生长。计算得霉菌和酵母菌总数为(0+1)/2×10=5cfu/片。阴性对照平板无菌落生长，试验有效。（二）控制菌检查结果大肠埃希菌：麦康凯琼脂平板上未出现红色或紫红色、周围有浑浊带的菌落。挑取平板上的其他菌落进行革兰氏染色镜检，均为革兰氏阳性球菌，生化试验结果不符合大肠埃希菌特征。因此，判定样品中未检出大肠埃希菌。沙门菌：XLD平板和SS平板上均未出现疑似沙门菌的菌落。三糖铁琼脂培养基和赖氨酸脱羧酶培养基接种后，未出现沙门菌典型的生化反应（如斜面变红、底层变黄，硫化氢阳性等）。因此，判定样品中未检出沙门菌。（三）结果判定根据《中国药典》2025年版通则1107“非无菌药品微生物限度标准”，口服片剂的需氧菌总数限度为≤10³cfu/g（或cfu/片），霉菌和酵母菌总数限度为≤10²cfu/g（或cfu/片），且不得检出大肠埃希菌、沙门菌。本次检验结果显示，需氧菌总数为250cfu/片，霉菌和酵母菌总数为5cfu/片，均符合限度要求；控制菌检查未检出大肠埃希菌和沙门菌，符合标准规定。同时，与企业内控标准（需氧菌总数≤500cfu/片，霉菌和酵母菌总数≤50cfu/片）对比，结果也在合格范围内。六、异常情况与处理在需氧菌总数培养过程中，发现1号平板边缘有1个疑似污染的菌落。经观察，该菌落形态与其他菌落明显不同，且阴性对照平板无菌落生长，初步判断为操作过程中可能引入的污染。为确保结果准确性，重新制备供试液并进行平行试验，重复检验后，新的平板菌落数分别为22cfu和26cfu，与首次检验结果无显著差异。因此，最终结果以两次检验的平均值为准，排除污染菌落的影响。七、检验结论本次送检的XX口服片剂（批号20251101），经微生物限度鉴定，需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数符合《中国药典》2025年版及企业内控标准要求；控制菌检查未检出大肠埃希菌和沙门菌。综合判定，该样品的微生物限度符合规定。八、注意事项与建议建议企业在生产过程中，进一步加强原辅料的微生物控制，尤其是中药材原料的前处理环节，严格执行清洗、灭菌操作规程，降低初始微生物负荷。生产车间的环境监控需持续加强，定期对空气、设备表面、操作人员手部进行微生物监测，确保生产环境符合药品生产质量管理规范（GMP）要求。成品储存过程中，应严格控制仓库的温湿度条件（温度10-30℃，湿度45-75%RH），避免因储存