感染性疾病血清学诊断技术指南（2025年版）

感染性疾病血清学诊断技术指南（2025年版）感染性疾病血清学诊断技术通过检测患者血清（或血浆）中病原体特异性抗体或抗原，为感染性疾病的诊断、病程评估及流行病学调查提供关键依据。本指南基于当前循证医学证据、技术发展及临床需求，系统规范血清学检测全流程，涵盖技术原理、检测方法、质量控制、结果解读及特殊场景处理等核心内容。一、技术原理与方法学分类血清学诊断的核心是抗原-抗体的特异性结合反应，其生物学基础包括抗体的类别（IgM、IgG、IgA等）、亲和力成熟及动态变化规律。根据检测目标，可分为抗体检测（IgM/IgG/IgA）和抗原检测两类；按技术平台，主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析（CLIA）、胶体金免疫层析（GICA）、免疫荧光试验（IFA）及凝集试验等。（一）抗体检测原理1.IgM抗体：感染早期（通常3-7天）产生，半衰期短（约5天），是急性或近期感染的重要指标，但需注意类风湿因子（RF）等干扰可能导致假阳性。2.IgG抗体：感染后7-14天产生，持续时间长（数月至数年），高滴度或双份血清（急性期与恢复期间隔10-14天）滴度4倍及以上升高可确认近期感染，低滴度提示既往感染或疫苗接种。3.IgA抗体：主要存在于黏膜局部（如呼吸道、消化道），血清中含量较低，常用于特定病原体（如轮状病毒、幽门螺杆菌）的黏膜免疫评估。（二）抗原检测原理直接检测病原体特异性抗原（如HBsAg、PCT、隐球菌荚膜抗原），反映病原体存在状态，适用于窗口期（抗体未产生时）或慢性感染（抗体水平低时）的辅助诊断。其灵敏度受抗原浓度、检测方法灵敏度及样本类型影响，需结合临床症状综合判断。（三）主要技术平台特点-ELISA：经典方法，可定量或半定量，操作需洗板、显色步骤，适合批量检测；缺点是耗时（2-4小时），易受操作误差影响。-CLIA：灵敏度高（可达pg/mL级）、线性范围宽、自动化程度高，适合定量检测（如HIV抗体、HBsAb），但设备及试剂成本较高。-GICA：快速（15-30分钟出结果）、操作简便、无需仪器，适用于基层或床旁检测（如流感病毒抗原、疟原虫抗原），但多为定性或半定量，灵敏度低于CLIA。-IFA：通过荧光标记抗体显示抗原位置，可观察病原体形态（如抗核抗体、军团菌抗体），但需荧光显微镜，结果判读依赖经验。-凝集试验：包括直接凝集（如肥达试验）、间接凝集（如梅毒RPR试验），操作简单、成本低，但易受非特异性凝集干扰。二、检测流程与质量控制（一）样本采集与处理1.样本类型：首选血清（无抗凝剂），避免溶血（血红蛋白＞500mg/L可干扰酶反应）、脂血（甘油三酯＞10mmol/L可致假阳性）及黄疸（胆红素＞100μmol/L可抑制显色）。血浆需使用EDTA或肝素抗凝（避免枸橼酸盐，可能影响钙依赖的抗原-抗体反应）。2.采集时间：抗体检测需根据病原体潜伏期确定：急性感染期（症状出现后3-7天）采急性期血，恢复期（2-4周后）采恢复期血；抗原检测应在症状出现后尽早采集（如流感抗原在症状出现48小时内阳性率最高）。3.保存与运输：血清/血浆采集后2小时内分离，4℃保存不超过72小时；需长期保存（＞72小时）应-20℃冻存（避免反复冻融，否则IgM易降解）。运输时需用冰袋维持2-8℃，避免剧烈震荡。（二）实验室操作规范1.试剂管理：选择经国家药品监督管理局（NMPA）批准或欧盟CE认证的试剂，核对有效期及批号，不同批号试剂不得混用。每批新试剂使用前需进行性能验证（灵敏度、特异度、重复性）。2.仪器校准：自动化设备（如化学发光仪）需定期（至少每6个月）进行校准，使用配套校准品；洗板机需检测加液量（误差≤5%）、洗板残留量（≤5μL/孔）。3.操作步骤：严格按说明书执行，注意孵育时间（误差±5%）、温度（37℃±1℃）及洗板次数（漏洗或过度洗板均可导致假阳性/假阴性）。手工操作时，加样量需使用移液器（精度≤2%），避免气泡影响结果。（三）质量控制体系1.室内质控（IQC）：每批次检测需加入高、中、低浓度质控品（覆盖临界值附近），质控品应与患者样本同步检测。质控规则采用Westgard多规则（如12s警告、13s失控、22s系统误差），失控时需立即查找原因（试剂失效、仪器故障、操作错误），重新检测并记录处理过程。2.室间质评（EQA）：每年至少参加2次国家级或省级室间质评，结果需符合“满意”标准（如靶值±20%）。未通过时需分析偏差原因（方法学差异、校准错误），并制定改进措施。3.人员培训：检测人员需经岗位培训（理论+实操），考核合格后方可独立操作。每年度复训，重点强化新方法（如多重荧光免疫层析）、新病原体（如新型冠状病毒变异株）检测要点。三、结果解读与临床应用（一）抗体检测结果判读1.IgM阳性：需结合临床症状与病程。如患者发热3天且流感IgM阳性，支持急性流感诊断；但类风湿关节炎患者RF阳性时，可能因RF与IgG-Fc段结合导致IgM假阳性，需用RF吸附试验（如加入鼠IgG封闭RF）或换用捕获法ELISA（仅检测病原体特异性IgM）。2.IgG阳性：单份血清IgG阳性提示既往感染或疫苗接种（如麻疹IgG阳性）；双份血清IgG滴度4倍及以上升高（如EB病毒VCA-IgG从1:100升至1:400）可确诊近期感染。需注意部分病原体（如结核分枝杆菌）IgG持续时间长，不能区分现症与既往感染。3.IgM阴性+IgG阴性：可能为窗口期（如HIV感染后2-4周）、免疫功能低下（如肿瘤患者）或非该病原体感染，建议2周后复查。4.IgM阳性+IgG阳性：提示感染活动期（如急性乙肝大三阳患者HBc-IgM与HBc-IgG均阳性），或感染恢复期（IgM未完全消退）。（二）抗原检测结果判读1.阳性结果：直接提示病原体存在，但需注意抗原变异（如流感病毒HA抗原变异可能导致检测试剂漏检）及抗原水平（如隐球菌抗原滴度＞1:8提示活动性感染，＜1:4可能为假阳性）。2.阴性结果：不能完全排除感染，可能因抗原浓度低于检测下限（如早期尿路感染患者尿中细菌抗原未达检测阈值）、样本采集不当（如痰标本未取深部痰液）或病原体被清除（如抗生素治疗后）。（三）常见病原体血清学检测策略1.病毒感染-流感病毒：急性期（症状≤48小时）检测抗原（GICA或CLIA），阳性率＞80%；超过48小时建议检测IgM（ELISA），同时检测IgG（恢复期4倍升高确诊）。-新型冠状病毒（SARS-CoV-2）：急性期（1-7天）检测N抗原（CLIA灵敏度＞90%），7天后检测S蛋白IgM/IgG（CLIA定量可评估疫苗接种后抗体水平）。需注意奥密克戎变异株S蛋白突变可能影响部分抗体检测试剂的特异性。-EB病毒：VCA-IgM阳性提示急性感染，EA-IgA阳性与鼻咽癌相关，EBNA-IgG阳性提示感染已进入潜伏期。2.细菌感染-链球菌感染：抗链球菌溶血素O（ASO）滴度＞500IU/mL提示近期A组链球菌感染（如风湿热），需结合C反应蛋白（CRP）、咽拭子培养综合判断。-结核分枝杆菌：结核菌素试验（PPD）阳性提示感染过结核或接种过卡介苗，γ-干扰素释放试验（IGRA）检测TB-SPOT.TB（抗原ESAT-6/CFP-10）特异性更高（＞95%），可区分卡介苗接种与结核感染。3.寄生虫感染-疟原虫：快速检测（GICA）疟原虫乳酸脱氢酶（pLDH）或醛缩酶（pAldolase）抗原，适用于基层；IgG阳性提示既往感染（流行区居民可能持续阳性），IgM阳性提示近期感染（灵敏度＞90%）。-弓形虫：IgM阳性+IgG阴性提示急性感染（需排除假阳性），IgM阳性+IgG阳性需检测IgG亲和力（低亲和力提示感染＜16周，高亲和力提示感染＞16周）。四、特殊人群与场景的处理（一）免疫功能低下患者HIV感染者、肿瘤化疗患者等因B细胞功能缺陷，抗体产生延迟或缺失（如HIV患者感染HBV后HBsAb可能不产生）。此类人群应优先选择抗原检测（如CMVpp65抗原血症检测）或核酸检测（如HBVDNA），血清学抗体检测仅作为辅助。（二）孕妇与新生儿1.TORCH筛查：孕妇妊娠早期（8-12周）检测弓形虫（TO）、风疹病毒（R）、巨细胞病毒（C）、单纯疱疹病毒（H）的IgM/IgG。IgM阳性需进一步确认（如IgG亲和力检测），避免因RF或自身抗体导致假阳性；IgG阴性孕妇需提示避免接触传染源（如猫粪、风疹患者）。2.新生儿感染：新生儿血清中IgM（不能通过胎盘）阳性提示宫内感染（如先天性梅毒IgM阳性）；IgG阳性需区分母体传递（半衰期约30天，出生6个月后消失）与自身感染（持续升高）。（三）急诊与床旁检测（POCT）急诊场景需快速报告（如怀疑脓毒症时检测PCT），应选择GICA或快速CLIA（30分钟内出结果）。需注意POCT试剂的灵敏度（如流感POCT灵敏度约60-70%），阴性结果需结合临床或核酸检测确认。五、注意事项与未来方向1.方法学局限性：血清学检测存在窗口期（如HIV抗体窗口期约3周）、交叉反应（如军团菌与变形杆菌OX19有共同抗原）及干扰因素（如高丙种球蛋白血症），需与核酸检测、影像学等联合应用。2.标准化建设：推动不同检测系统（如CLIA与E