《血清4型禽腺病毒病诊断技术》征求意见稿

ICS11.220

B41

团体标准

T/JAASS×-××××

血清4型禽腺病毒病诊断技术

Diagnostictechniquesforthediseaseofserotype4fowladenovirus

2020－××－××发布2020－××－××实施

江苏省农学会发布

T/JAASS×-2020

前  言

本文件按照GB/T1.1-2020给出的规则起草。

本文件由扬州大学提出。

本文件由江苏省农学会归口。

本文件起草单位：扬州大学，中国农业科学院上海兽医研究所。

本文件主要起草人：叶建强，陈鸿军，秦爱建，谢松桦，谢泉，王伟康，吕璐，邵红霞，万志

敏，李拓凡。

IV

T/JAASS×-2020

引  言

依据血清交叉中和试验，禽腺病毒（Fowladenovirus,FAdV）目前可分为12个血清型，即

FAdV-1~FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9~FAdV-11。临床上，FAdV感染主要引起鸡的包涵

体肝炎，肝炎-心包积液综合症及肌胃糜烂等症状。自2015年以来，国内大部分家禽密集养殖地区

均爆发由高致病性血清4型禽腺病毒（FAdV-4）感染引起的肝炎-心包积液综合症。鸡群临床感染

FAdV-4的死淘率可达30-80%。FAdV-4不仅可以水平传播，还可以通过鸡胚进行垂直传播。与禽

白血病病毒、鸡传染性贫血病毒、传染性法氏囊病毒及马立克氏病病毒等免疫抑制病毒混合感染可

显著增加FAdV-4感染鸡群的发病率和死亡率。值得注意的是，当前除了在国内爆发，FAdV-4在

印度、加拿大、匈牙利、日本、韩国及波兰等国家也陆续流行，正给国内外养鸡业造成不可估量的

经济损失。虽然国内外已有一些FAdV-4检测方法的研究报道，但是目前尚无FAdV-4的标准化病

原分离及其特异性抗原、抗体诊断技术国家标准、行业标准、地方标准或团体标准。因此，制定了

《血清4型禽腺病毒病诊断技术》标准。本标准包括FAdV-4感染鸡群临床诊断、病毒分离方法、

PCR检测方法、间接免疫荧光检测病原方法和ELISA抗体检测方法，适用于FAdV-4的诊断预警

及免疫防控。

V

T/JAASS×-2020

血清4型禽腺病毒病诊断技术

1范围

本标准规定了血清4型禽腺病毒病诊断技术的要求。

本标准规定的临床症状和病理变化适用于血清4型禽腺病毒病的初步诊断；聚合酶链式反应（PCR）

检测方法适用血清4型禽腺病毒的核酸鉴定；病毒分离技术适用于血清4型禽腺病毒的分离培养；间接免

疫荧光（IFA）检测方法适用于血清4型禽腺病毒的病原鉴定；间接ELISA抗体检测方法适用于血清4型

禽腺病毒自然感染鸡群血清学诊断及免疫鸡群抗体水平监测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

NY/T541-2016兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范。

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FAdV-4血清4型禽腺病毒（Fowladenovirusserotype4）

PCR聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PBS磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

PBST吐温磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSalinewithTween）

DNA脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

LMH细胞鸡肝癌细胞（Leghornmalehepatocellularcells）

ELISA酶联免疫吸附试验（Enzymelinkedimmunosorbentassay）

TMB四甲基联苯胺（3,3',5,5'-tetramethyl-benzidine）

TCID50半数细胞感染量（Mediantissuecultureinfectivedose）

CPE细胞病变效应（Cytopathiceffect）

4临床诊断

4.1流行病学

1

T/JAASS×-2020

感染一般发生于3~6周龄肉鸡及10~20周龄蛋鸡，但各种日龄鸡只均可感染FAdV-4。FAdV-4强毒自

然感染潜伏期为1~2天，感染后3~5天出现死亡率高峰；死亡率一般为20%~80%，有时甚至达到100%。

4.2临床症状

突发高死亡率，家禽临床症状表现：精神沉郁、食欲不振、嗜睡、拉黄绿色稀粪、黄疸。

4.3剖检病变

心包积液：心包囊出现无色或黄绿色积液。

肝炎：肝脏肿大、质脆、边缘钝圆、出血，有大理石状花斑，并有明显坏死灶。

肾炎：肾脏肿胀、有些出血点。

4.4临床诊断

当禽出现4.2及4.3（判定标准图例参见附录B.1）部分或全部情形时，可判定为FAdV-4感染疑似病

例。确诊需要实验室诊断。

5PCR诊断

5.1器材

5.1.1PCR扩增仪

5.1.2组织研磨仪

5.1.3台式低温高速离心机

5.1.4核酸电泳仪

5.1.5核酸电泳槽

5.1.6电泳凝胶成像仪

5.1.7冰箱：4℃、-20℃、-80℃

5.1.80.2~2μL、2~20μL、20~200μL和200~1000μL移液器

5.2试剂

5.2.1商品化DNA提取试剂盒

5.2.2商品化PCR试剂盒

5.2.3商品化核酸染料及DNAMarker

5.2.4引物FAdV-4F和FAdV-4R（附录D.1）

5.2.5灭菌去离子水

5.2.6PBS缓冲液（附录A.1）

5.2.7组织研磨液（附录A.2）

2

T/JAASS×-2020

5.2.81×TAE缓冲液（附录A.6）

5.2.91%琼脂糖凝胶（附录A.7）

5.3操作方法

5.3.1样品准备

空白对照样品：高压处理过的去离子水。

阴性对照样品：其他禽源病毒基因组。

阳性对照样品：SD15毒株基因组（参见附录C），或其他背景清楚的FAdV-4毒株基因组。

待检样品：取待检样品1.0g，加入1mL组织研磨液充分研磨，制成混悬液后于37℃水浴锅反应30min；

在4℃条件下以12000rpm离心20min后，取上清，以0.22μm滤器过滤，转移至1.5mL离心管，即为肝组

织研磨上清液。采用商品化的DNA提取试剂盒，按说明书完成核酸DNA提取。

5.3.2PCR反应

按照商品化PCR试剂盒说明书要求，在反应体系加入各成分中，混匀。反应程序为95℃预变性5min；

95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min，反应结束后置4℃冰箱保存

备用。

5.3.3PCR产物凝胶电泳

配置1.0%琼脂糖凝胶（含核酸染料），带加样孔的一端放置在电泳槽的阴极，倒入1xTAE缓冲液浸

泡过胶面，依次点样（DNAMarker、阳性对照样品、阴性对照样品、空白对照样品、待检样品）中进

行电泳，恒压120V，电泳约40min，在电泳凝胶成像仪中观察、拍照、记录结果。

5.4结果判定

5.4.1试验成立的判定

空白对照或阴性对照样品无扩增条带，阳性对照样品出现约280bp的条带，则试验成立（判定标准

图例参见附录D.3）。

5.4.2试验结果的判定

在试验成立的前提下，待检样品无条带（参见附录D.3），则判定待检样品为FAdV-4核酸阴性；在

试验成立的前提下，待检样品出现约280bp的条带（参见附录D.3），则判定待检样品为FAdV-4核酸阳

性；必要时，将目的条带进行胶回收后克隆测序，待测样品的测序结果和参考序列（参见附录D.4）进

行核苷酸同源性比较，同源性在95.0%以上判为阳性。

6病毒分离

6.1器材

6.1.1倒置显微镜

6.1.20.2~2μL、2~20μL、20~200μL和200~1000μL移液器

3

T/JAASS×-2020

6.1.3细胞培养箱

6.1.4台式低温高速离心机

6.1.56孔细胞培养板

6.1.637℃恒温箱

6.1.7冰箱：-80℃

6.2细胞

6.2.1LMH细胞

6.3试剂

6.3.10.25%胰酶

6.3.2PBS缓冲液（附录A.1）

6.3.3细胞培养液（附录A.3）

6.3.4细胞维持液（附录A.4）

6.4操作方法

6.4.1细胞准备

感染前一天将生长状态良好的LMH细胞以PBS洗涤一次，弃去PBS，以0.25%胰酶消化为单个细胞

后加入适量的细胞培养液，以吸头吹散细胞，并按2mL/孔培养于6孔板，置于37℃、5%CO2细胞培养

箱培养过夜，待细胞长至70%时（12-16h）开始进行感染。

6.4.2样品准备

待检样品：按5.3.1处理的PCR阳性肝组织混悬液上清，以细胞维持液稀释10、20倍待用。

阴性对照：细胞维持液。

6.4.3样品接种和培养

弃细胞培养液，以PBS洗一遍。

取1mL6.4.2所述样品均匀铺满细胞，每个样品做2个重复孔，每块板子设置2个以上阴性对照孔，

吸附2h后，以PBS洗一遍，弃去PBS，加入2mL细胞维持液。

培养3-5天后，观察细胞是否出现CPE。

6.5结果判定

6.5.1试验成立的判定

阴性对照样品保持正常细胞形态，则试验成立。

6.5.2试验结果的判定

4

T/JAASS×-2020

每日在倒置显微镜下观察细胞培养是否出现CPE。如出现CPE，即LMH细胞形态变圆、皱缩、脱落

等典型病变，可判定病毒分离成功；如未出现CPE，将细胞培养物冻融3次，离心取上清接种LMH进行

盲传，直至出现CPE。

将出现CPE的细胞培养物于-80℃反复冻融3次，离心收集细胞培养物上清，即分离得到的病毒。分

离得到的病毒需进一步通过PCR诊断（5）或间接免疫荧光鉴定（7）是否为FAdV-4。

7间接免疫荧光鉴定

7.1器材

7.1.1荧光显微镜

7.1.20.2~2μL、2~20μL、20~200μL和200~1000μL移液器

7.1.3细胞培养箱

7.1.496孔细胞培养板

7.1.537℃恒温箱

7.2细胞

7.2.1LMH细胞

7.3试剂

7.3.10.25%胰酶

7.3.2PBS缓冲液（附录A.1）

7.3.3细胞维持液（附录A.4）

7.3.4细胞固定液（附录A.5）

7.3.5FAdV-4特异性单克隆抗体1D7（附录E.1）

7.3.6商品化的FITC标记的羊抗鼠IgG

7.4操作方法

7.4.1样品准备

待检样品：5.3.1中PCR阳性样品（肝组织研磨液上清）或6.5.2中细胞分离得到的病毒样品（细胞培

养物上清）感染的LMH细胞。样品的接种与培养，见6.4.3。

阴性对照样品：未感染的LMH细胞。

阳性对照样品：毒株SD15，或其他背景清楚的FAdV-4毒株感染的LMH细胞。

7.4.2间接免疫荧光试验

7.4.2.1弃去细胞培养液，室温下以固定液固定细胞5min，每孔50μL。

7.4.2.2弃去固定液，室温下自然吹干2h，以PBS洗涤一次。

5

T/JAASS×-2020

7.4.2.3加入以PBS按1:1000稀释的FAdV-4特异性单克隆抗体1D7，每孔50μL，于37℃恒温箱孵

育45min，以PBS洗涤3次。

7.4.2.4加入以PBS按1:200稀释的商品化的FITC-羊抗鼠IgG，每孔50μL，于37℃恒温箱孵育45min，

以PBS洗涤3次。

7.4.2.5每孔加入50μLPBS，在荧光显微镜下观察荧光。

7.5结果判定

7.5.1试验成立的判定

阴性对照样品无特异性荧光信号，阳性对照样品出现特异性荧光信号，则试验成立（判定标准图例

见附录E.2）。

7.5.2试验结果的判定

在试验成立的前提下，待检样品无特异性荧光，则判定待检样品为FAdV-4阴性。

在试验成立的前提下，待检样品出现特异性荧光信号，则判定待检样品为FAdV-4阳性。

8血清抗体检测

8.1器材

8.1.1酶标仪

8.1.237℃恒温箱

8.1.3冰箱：-20℃

8.2试剂

8.2.1商品化TMB单组份显色液

8.2.2血清4型禽腺病毒抗体ELISA检测试剂盒使用溶液（附录F）

8.2.3血清4型禽腺病毒抗体ELISA检测试剂盒抗原包被板及阴性、阳性对照血清（附录G）

8.3操作方法

8.3.1样品准备

新鲜采集血液，置于37℃放置30min，在4℃条件下10000rpm/min离心5min，取上层血清，转入1.5

mL离心管，于-20℃保存备用。

8.3.2ELISA试验

8.3.2.1样品准备：阴性及阳性对照血清（附录G.2、G.3），待检样品血清均以样品稀释液（附录F.4）

按1：400稀释待用。

6

T/JAASS×-2020

8.3.2.2取出ELISA抗原包被板（附录G.1），将阳性对照加入A1、A2孔，阴性对照加入A3、A4

孔，剩下的孔用于检测待检样品，37℃反应1小时；弃去孔中的溶液，每孔加入洗涤液（附录F.4）360

µL；洗涤3遍后，在吸水纸上拍干。

8.3.2.3加入1：50000稀释的HRP标记的兔抗鸡抗体，37℃反应1小时；弃去孔中的溶液，每孔加

入洗涤液360µL；洗涤3遍后，在吸水纸上拍干。

8.3.2.4每孔加入商品化TMB单组份显色液100µL，置37℃恒温箱避光孵育10min。

8.3.2.5每孔加入终止液（附录F.4）50µL，轻微震荡混合均匀后，用酶标仪于波长450nm下读取各

孔吸光值（OD450），读数应在加入终止液后10min内完成。

8.4结果判定

8.4.1试验成立的判定

当阴性对照平均OD450值<0.2，且阳性对照平均OD450值>1.0，判定实验成立。否则应进行重复试验。

8.4.2试验结果的判定

计算方法

样品OD450值－阴性对照平均OD450值

S/P=

阳性对照平均OD450值－阴性对照平均OD450值

在试验成立的前提下，待检血清样本的S/P≥0.1时，为FAdV-4抗体阳性。

在试验成立的前提下，待检血清样本的S/P<0.1时，为FAdV-4抗体阴性。

9综合判定

根据临床症状、病理变化和病毒分离结果可以对血清4型禽腺病毒病做出初步诊断的基础上，结合

PCR和间接免疫荧光二种检测方法任选其一，检测结果为阳性，即可诊断为血清4型禽腺病毒病。

血清4型禽腺病毒ELISA抗体检测方法，检测结果为阳性，即可确定鸡群感染过血清4型禽腺病毒，

或接种过相应的疫苗。

7

T/JAASS×-2020

附录A

（规范性）

溶液配制

A.1磷酸盐缓冲液（PBS）（0.01mol/L，pH7.4）的配制

氯化钠（NaCl）8.00g

磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）1.42g

磷酸二氢钾（KH2PO4）0.27g

氯化钾（KCl）0.20g

加蒸馏水至1L，混匀，调pH至7.4，高压消毒灭菌121℃30min，分装。

A.2组织研磨液的配制

PBS90mL

青霉素-链霉素溶液（1万单位/mL）10mL

混匀，保存于4℃。

A.3细胞培养液的配制

DMEM/F12培养基89mL

胎牛血清（FBS）10mL

青霉素-链霉素溶液（1万单位/mL）1mL

混匀，保存于4℃。

A.4细胞维持液的配制

DMEM/F12培养基97mL

胎牛血清（FBS）2mL

青霉素-链霉素溶液（1万单位/mL）1mL

混匀，保存于4℃。

A.5细胞固定液的配制

分析纯丙酮60mL

分析纯无水乙醇40mL

混匀，保存于-20℃

A.650×TAE缓冲液的配制

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T/JAASS×-2020

Tris242.0g

Na2EDTA•2H2O37.2g

醋酸57.1mL

加蒸馏水至1L，混匀，室温保存。使用时，以蒸馏水稀释成1×TAE缓冲液。

A.71%琼脂糖凝胶的配制

琼脂糖1g

1×TAE缓冲液定容至100mL

置微波炉中加热至完全融化，待冷至50℃～60℃时，加核酸染料5μL，摇匀后倒入制胶板中，待

完全凝固后取下加样梳，备用。

9

T/JAASS×-2020

附录B

（资料性）

血清4型禽腺病毒感染鸡群临床解剖症状

AB

注：A.FAdV-4感染鸡出现肝炎-心包积液综合症B.未感染FAdV-4的正常鸡解剖

图B.1FAdV-4感染鸡群典型临床解剖症状判定标准图例

10

T/JAASS×-2020

附录C

（资料性）

阳性对照病毒

C.1阳性对照病毒来源

FAdV-4阳性对照毒株SD15为扬州大学禽类预防医学教育部重点实验室分离鉴定及提供，可用LMH

细胞接种病毒72h后，-80℃反复冻融3次收集细胞培养上清离心所得，分装后-80℃保存。

11

T/JAASS×-2020

附录D

（资料性）

PCR检测引物及判定标准

D.1血清4型禽腺病毒PCR检测引物

参考GenBank中ON1毒株fiber-2基因（登录号：GU188428）的275bp~554bp设计特异性引物，扩

增目的片段为280bp，见表D.1。

表D.1FAdV-4检测引物

引物名称5’–3’的序列产物大小

FAdV-4F5’–TCAACGCCCAAGGTCAACTG–3’

280bp

FAdV-4R5’–ATCTCGAGGTCGATACCACT–3’

D.2引物的稀释

开盖前，将新合成的引物进行短暂离心（12000rmp/min，30s）；以灭菌去离子水溶解，充分混

匀，配置成浓度为100µmol/L的储存液，-20℃保存；使用时，将储存液用DEPC处理的灭菌去离子水进

行10倍稀释，配置成浓度为10µmol/L的引物，-20℃保存。

D.3PCR检测判定标准图例

PCR检测结果电泳图如D.3所示。

注：M：DNAMarker

1：阳性对照（FAdV-4）

2：阴性对照（其他禽源病毒）

3：空白对照

4：待检样品（FAdV-4阳性）

5：待检样品（FAdV-4阴性）

图D.3PCR检测FAdV-4的判定标准图

12

T/JAASS×-2020

D.4PCR扩增片段参考序列

fiber-2基因的275bp~554bp参考序列：

TCAACGCCCAAGGTCAACTGGCGGTGGCCGTTGACCCCGAAGGGGCCCTGGACATCACCCC

CGATGGACTGGACGTCAAGGTCGACGGAGTAACCGTGATGGTCAACGATGACTGGGAACTGGCC

GTAAAAGTCGACCCGTCCGGCGGATTGGATTCCACCGCGGGTGGACTCGGGGTCAGCGTGGACG

ACACCTTGCTCGTGGATCAGGGAGAACTGGGCGTACACCTCAACCAACAAGGACCCATCACTGC

CGATAGCAGTGGTATCGACCTCGAGAT

13

T/JAASS×-2020

附录E

（资料性）

间接免疫荧光鉴定用单克隆抗体及判定标准

E.1单克隆抗体的来源

鼠源单抗1D7，由扬州大学禽类预防医学教育部重点实验室制备、保存及提供。该单克隆抗体仅与

感染FAdV-4病毒的LMH细胞反应，而与所检测的其它血清型禽腺病毒FAdV（包括血清FAdV-1，

FAdV-5，FAdV-6，FAdV-8a，FAdV-8b以及FAdV-10）以及所检测的其它禽源病毒均不反应。

E.2间接免疫荧光鉴定判定标准图例

见图E.2。

注：A.FAdV-4标准阴性样品B.FAdV-4标准阳性样品

图E.2FAdV-4间接免疫荧光鉴定判定标准图例

14

T/JAASS×-2020

附录F

（规范性）

血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒使用溶液的配制

F.1包被缓冲液

碳酸钠（Na2CO3）1.59g

碳酸氢钠（NaHCO3）2.93g

加去离子水至1L

混匀，调pH至9.4，4℃放置1个月有效。

F.2封闭液

脱脂乳5g

加蒸馏水水混匀使其充分溶解，定容至100mL

F.3样品稀释及洗涤液[含0.05%（体积分数）吐温-20的0.01mol/LPBS溶液]

吐温-20500µL

PBS1L

混匀，室温保存。

F.4终止液

分析纯浓硫酸11.1mL

去离子水88.9mL

混匀，室温保存。

15

T/JAASS×-2020

附录G

（规范性）

血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒抗原包被板及阴性、阳性对照血清的制备

G.1血清4型禽腺病毒抗体检测试剂盒抗原包被板的制备

抗原包被板系为包被有纯化的血清4型禽腺病毒Fiber-2原核表达蛋白的酶标板。用抗原包被缓冲液

（附录F.1）将纯化Fiber-2原核表达蛋白稀释成1µg/mL，包被96孔酶标板，每孔100µL，置于4℃冰箱

12h，以洗涤液（附录F.3）洗涤1次，用封闭液（附录F.2）于37℃恒温箱封闭2h，以洗液洗涤一次后，

在吸水纸上甩干，充分干燥后即得抗原包被板，置于4℃冰箱备用。

G.2阴性对照血清的制备

用SPF鸡胚孵化，并在隔离器中饲养至4周龄的鸡，分离血清，-20℃以下保存。

G.3阳性对照血清的制备

3

用血清4型禽腺病毒SD15株按10TCID50/只的剂量感染2周龄的SPF鸡，感染后2周采血，分离血清，

-20℃以下保存。

16

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S

S

江苏省农学会团体标准

血清4型禽腺病毒病诊断技术

2020年××月第一版2020年××月第一次印刷

版权专有不得翻印

T/JAASS×-2020

目次

前言........................................................................................................................................................................V

引言........................................................................................................................................................................V

1范围...................................................................................................................................................................1

2规范性引用文件...............................................................................................................................................1

3缩略语...............................................................................................................................................................1

4临床诊断...........................................................................................................................................................1

4.1流行病学................................................................................................................................................1

4.2临床症状................................................................................................................................................2

4.3剖检病变................................................................................................................................................2

4.4临床诊断................................................................................................................................................2

5PCR诊断...........................................................................................................................................................2

5.1器材........................................................................................................................................................2

5.2试剂........................................................................................................................................................2

5.3操作方法................................................................................................................................................3

5.4结果判定................................................................................................................................................3

6病毒分离...........................................................................................................................................................3

6.1器材........................................................................................................................................................3

6.2细胞........................................................................................................................................................4

6.3试剂........................................................................................................................................................4

6.4操作方法................................................................................................................................................4

6.5结果判定................................................................................................................................................4

7间接免疫荧光鉴定...........................................................................................................................................5

7.1器材........................................................................................................................................................5

7.2细胞........................................................................................................................................................5

7.3试剂........................................................................................................................................................5

I

T/JAASS×-2020

7.4操作方法................................................................................................................................................5

7.5结果判定................................................................................................................................................6

8血清抗体检测...................................................................................................................................................6

8.1器材........................................................................................................................................................6

8.2试剂........................................................................................................................................................6

8.3操作方法................................................................................................................................................6

8.4结果判定................................................................................................................................................7

9综合判定...........................................................................................................................................................7

附录A（规范性）溶液配制...............................................................................................................................8

A.1磷酸盐缓冲液的配制...........................................................................................................................8

A.2组织研磨液的配制...............................................................................................................................8

A.3细胞培养液的配制...............................................................................................................................8

A.4细胞维持液的配制...............................................................................................................................8

A.5细胞固定液的配制...............................................................................................................................8

A.650×TAE缓冲液的配制........................................................................................................................8

A.71%琼脂糖凝胶的配制..........................................................................................................................9

附录B（资料性）血清4型禽腺病毒感染鸡群临床解剖症状.....................................................................10

B.1FAdV-4感染鸡群典型临床解剖症状判定标准图例.......................................................................10

附录C（资料性）阳性对照病毒.....................................................................................................................11

C.1阳性对照病毒来源.............................................................................................................................11

附录D（资料性）PCR检测引物及判定标准................................................................................................12

D.1血清4型禽腺病毒PCR检测引物...................................................................................................12

D.2引物的稀释.........................................................................................................................................12

D.3PCR检测判定标准图例....................................................................................................................12

D.4PCR扩增片段参考序列....................................................................................................................13

附录E（资料性）间接免疫荧光鉴定用单克隆抗体及判定标准.................................................................14

E.1单克隆抗体的来源.............................................................................................................................14

E.2间接免疫荧光鉴定判定标准图例.....................................................................................................14

附录F（规范性）血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒使用溶液的配制........................................15

II

T/JAASS×-2020

F.1包被缓冲液..........................................................................................................................................15

F.2封闭液..................................................................................................................................................15

F.3样品稀释及洗涤液..............................................................................................................................15

F.4终止液..................................................................................................................................................15

附录G（规范性）血清4型禽腺病毒抗体检测ELISA试剂盒抗原包被板及阴性、阳性对照血清的制备

...............................................................................................................................................................................16

G.1血清4型禽腺病毒抗体检测试剂盒抗原包被板的制备................................................................16

G.2阴性对照血清的制备.........................................................................................................................16

G.3阳性对照血清的制备.........................................................................................................................16

III

T/JAASS×-2020

血清4型禽腺病毒病诊断技术

1范围

本标准规定了血清4型禽腺病毒病诊断技术的要求。

本标准规定的临床症状和病理变化适用于血清4型禽腺病毒病的初步诊断；聚合酶链式反应（PCR）

检测方法适用血清4型禽腺病毒的核酸鉴定；病毒分离技术适用于血清4型禽腺病毒的分离培养；间接免

疫荧光（IFA）检测方法适用于血清4型禽腺病毒的病