环境监测实验 课件 实验十七 多管发酵法测定水中粪大肠菌群

实验十七多管发酵法测定水中粪大肠菌群掌握水质微生物检测的关键方法指导老师：01实验简介02实验原理03实验准备04实验步骤05注意事项与思考题目录实验简介了解实验基本信息与目的实验背景与标准依据1粪大肠菌群是水体粪便污染指示微生物，其存在表明水体可能受病原微生物污染，威胁人体健康。粪大肠菌群重要性2该方法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。适用范围312管法检出限为3MPN/L，15管法检出限为20MPN/L。检出限4依据HJ347.2-2018《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法》标准进行实验。标准依据实验概述掌握多管发酵法的原理及操作流程，了解实验具体步骤和操作方法。掌握原理与流程01学会通过最大可能数（MPN）法计算粪大肠菌群浓度，掌握计算方法。学会MPN计算02熟悉水质微生物检测的质量控制要求，保障实验结果的准确性。熟悉质控要求03明确实验的学习目标实验目的实验原理理解实验的检测原理初发酵与复发酵的步骤将水样接种至含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37℃培养24h。初发酵初发酵阳性样品转接至EC培养基，44.5℃培养24h。复发酵发酵过程根据培养现象判断结果大肠菌群分解乳糖产酸使溴甲酚紫变黄，产气使倒置小管有气泡，此为初发酵阳性。初发酵阳性判断1高温抑制非耐热菌，仅粪大肠菌群存活并产气，此为复发酵阳性。复发酵阳性判断2结果判断通过阳性管数估算浓度1阳性管数查表根据阳性管组合查MPN表（HJ347.2-2018附录A），确定MPN值。2接种12份样品计算接种12份样品时，查MPN表可直接得到每升粪大肠菌群MPN值。3接种15份样品计算接种15份样品时，查15管法MPN表得MPN值，按公式换算样品浓度。MPN计算实验准备做好实验前的准备工作准备实验所需的仪器与试剂仪器设备包括恒温培养箱、高压灭菌锅、无菌操作台、试管架、移液器、杜氏小管等。1试剂与培养基有乳糖蛋白胨培养基、EC培养基、硫代硫酸钠溶液、乙二胺四乙酸二钠溶液等。2其他材料如无菌采样瓶、稀释水（生理盐水）、记号笔等。3仪器试剂规范采集水样保障实验采样量清洁水体采样量不低于400mL，其余水体采样量不低于100mL。1余氯重金属处理含余氯或重金属的水样，需添加硫代硫酸钠或EDTA消除干扰。2保存检测样品采集后冷藏保存，6h内进行检测，避免微生物变化影响结果。3样品采集实验步骤按照规范步骤完成实验合理稀释水样并接种培养1选择稀释梯度根据水样污染程度选择稀释梯度，如原液、10⁻¹、10⁻²等。2接种培养每个稀释度接种3～5管（每管10mL或1mL），加入乳糖蛋白胨培养基。稀释接种进行初发酵与复发酵培养1.初发酵培养37℃培养24h，观察产酸（黄色）和产气（小管气泡）情况。2.复发酵培养取初发酵阳性管液体，转接至EC培养基，44.5℃培养24h。发酵培养查表计算实验结果根据阳性管组合查MPN表，确定每100mL样品中粪大肠菌群MPN值。查MPN表结合稀释倍数和公式计算样品中粪大肠菌群数（MPN/L）。计算最终浓度结果计算注意事项与思考题关注实验细节，思考相关问题避免实验过程中的问题1避免交叉污染实验全程要注意避免交叉污染，保障实验结果的准确性。2控制温度复发酵需精确控制44.5℃，误差±0.2℃，确保实验条件准确。3添加硫代硫酸钠含氯水样需添加硫代硫酸钠（0.1mL/125mL水样），消除余氯干扰。4保存培养基培养基需避光、干燥保存或在4℃冰箱中保存，注意保存条件和期限。注意事项深入思考实验相关问题复发酵温度选择原因思考为什么选择44.5℃作为复发酵温度，了解温度选择的依据。1检出