《生物制药工艺》课件-项目二：基因工程与菌种构建

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基因操作技术，又称基因工程、基因拼接技术和DNA重组技术，是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。供体受体载体基因工程制药产品实例——重组人生长激素湖北生物科技职业学院重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38基因工程菌的构建基因工程菌的发酵培养重组产物分离纯化重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38基因工程制药的四个基本技术湖北生物科技职业学院引入外源基因拼接外源基因调控基因表达培养基因工程菌基因工程制药的四个必要条件受体细胞载体工具酶目的基因湖北生物科技职业学院基因工程制药的四个必要条件目的基因湖北生物科技职业学院1、直接分离法2、基因文库分离法3、PCR分离法4、化学合成法比较各种方法获得目的基因的优缺点基因工程制药的四个必要条件载体湖北生物科技职业学院1、质粒载体2、噬菌体载体3、酵母/细菌人工染色体4、真核细胞克隆载体总结各种载体的特点基因工程制药的四个必要条件工具酶湖北生物科技职业学院1、限制性核酸内切酶2、DNA连接酶3、TaqDNA聚合酶4、RNA聚合酶总结各种工具酶的特点基因工程制药的四个必要条件受体细胞湖北生物科技职业学院1、大肠杆菌细胞2、枯草芽孢杆菌细胞3、酵母细胞4、哺乳动物细胞总结各种受体细胞的特点基因工程药物的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38基因工程药物分类湖北生物科技职业学院基因工程菌发酵培养技术《生物制药工艺》基因工程制药产品实例——重组人生长激素湖北生物科技职业学院重组人生长激素的生产流程湖北生物科技职业学院目的基因的获得构建DNA重组体筛选、鉴定和分析转化细胞构建基因工程菌培养基因工程菌表达产物的提取、分离和纯化产品的检验、包装等31323334353637DNA重组体转化进入受体细胞38基因工程菌的构建基因工程菌的发酵培养重组产物分离纯化基因工程菌的发酵培养湖北生物科技职业学院

将带有人的生长激素基因的基因工程菌放到大型的发酵罐里，给它提供合适的条件和营养物质，进行人工培养，就可以大量繁殖，生产出大量的人生长激素。典型的发酵过程湖北生物科技职业学院分泌型重组人生长激素工程菌发酵工艺参数要点5ml液体LB(含氨苄青霉素100g/ml-70℃甘油冻存菌种37℃200r/min振荡培养10~12h100ml液体LB(含氨苄青霉素100g/ml)4L液体LB(含氨苄青霉素100g/ml)参数类型参数pH7.00±0.10温度37℃溶解氧>20%发酵时间16~18h补料葡萄糖、微量元素OD600重组人生长激素表