DB12∕T 986-2020 豆芽中 6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.020.20DB12Determinationofresiduesof6-benzylaminopurine,4-chlorphenoxyaceticsodium,2,4-Dandgibberellicacidinbeansproutbyliquidchromatography-tan天津市市场监督管理委员会发布IDB12/T986—2020本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：李娜、邵辉、林宏芳、刘磊、李辉、张玉婷、郭永泽、卢娜、绳慧珊、梁静。DB12/T986—20201豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素的测定液相色谱-串联质谱法本标准规定了豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素残留量的测定-液相色谱-串联质谱法的方法提要、试剂和材料、仪器和设备、试样制备与保存、测定步骤、灵敏度、准确度和精密度。本标准适用于豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素单个或混合物残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样经酸化乙腈提取，提取液浓缩、甲醇定容后，用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定，基质外标法定量。4试剂和材料4.1基本要求除另有说明外，所用试剂均为分析纯。所用水为GB/T6682规定的一级水。色谱纯4.56-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、2,4-滴和赤霉素标准品纯度≥98.0%。4.6标准溶液的配制DB12/T986—202024.6.1标准储备溶液（200mg/L准确称取各种标准品10mg（精确至0.1mg用甲醇溶解并定容至50mL，-18℃避光保存，有效期6个月。4.6.2混合标准溶液：分别吸取一定量各种农药标准储备液于50mL容量瓶，用甲醇稀释并定容至刻度，配制浓度为10mg/L的混合标准溶液，0~4℃避光保存，有效期1个月。4.6.3基质匹配标准工作溶液：用空白豆芽基质配制浓度分别为0.005、0.02、0.05、0.2、0.5、1.0mg/L的系列标准溶液，供液相色谱-串联质谱仪分析，现用现配。5仪器和设备5.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。5.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。5.3台式高速离心机：转速不低于4000r/min。5.4匀浆机。5.5涡旋混合器。5.6旋转蒸发仪。5.7纯水仪。6试样制备与保存样品用四分法缩分出适量，经匀浆机捣碎，分取两份试样，装入清洁容器内，密封并标记。一份作为检样，一份作为留样，于-18℃保存。7测定步骤7.1样品前处理准确称取捣碎的试样5.00g（精确至0.02g）于50mL聚丙烯离心管中，加入20mL乙腈，于旋涡混合器上涡旋2min，加入0.4mL甲酸，再涡旋2min，4000r/min离心5min，上清液转移至100mL梨形瓶中，于40℃条件下旋转蒸发至约2.5mL，转移至刻度试管中，用甲醇定容至5mL，过0.22μm有机滤膜，供液相色谱-串联质谱仪分析。7.2仪器测定7.2.1液相色谱参考条件如下：——色谱柱：AcquityTMBEHC18柱（2.1×50mm，1.7μm）；——流动相：A相：乙腈；B相：0.1%甲酸水；梯度洗脱条件见表1。——进样量：10μL；——柱温：30℃。表1梯度洗脱条件VV034DB12/T986—2020357.2.2质谱参考条件如下：——电离模式：电喷雾电离(ESI)——毛细管电压：3.0kV；——离子源温度：120℃;——脱溶剂气温度：400℃;——脱溶剂气流量：600L/hr；——锥孔反吹气流量：60L/hr；——检测方式：多反应监测（MRM）；质谱采集参数见表2。表24种化合物的中英文名称、保留时间和质谱检测条件7.3定性以表3中保留时间及定性离子定性，用液相色谱-串联质谱法确证应同时满足三个要求：待测样品的保留时间在外标标准品的保留时间的±2.5%之内；定性离子的信噪比大于3（S/N>3）；与外标标准品相比，样品的两个离子相对丰度在表3规定的许可范围内。空白添加样品中4种化合物的总离子流色谱图和特征离子的色谱图参见附录A。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差7.4结果计算以浓度为横坐标，以定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，采用外标法定量。采用单点或者多点校准。用色谱数据处理软件或按公式（1）计算试样中的目标物含量（mg/kg）。DB12/T986—20204ω——试样中目标物的含量，单位为毫克每千克（mg/kgρs——目标物标准工作溶液的浓度，单位为微克每升（mg/L）；A——试样测定液中目标物定量离子的峰面积；s——标准工作溶液中目标物定量离子的峰面积；V——试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样溶液所代表试样的量，单位为克（g）；8灵敏度豆芽中6-苄基腺嘌呤的定量限为0.005mg/kg，2,4-滴的定量限为0.02mg/kg，4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素的定量限为0.05mg/kg。9准确度和精密度9.1准确度9.1.1豆芽中6-苄基腺嘌呤在0.005mg/kg～0.5mg/kg添加水平上的回收率在70%～120%之间；9.1.2豆芽中2,4-滴在0.02mg/kg～0.5mg/kg添加水平上的回收率在70%～120%之间；9.1.3豆芽中4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素在0.05mg/kg～0.5mg/kg添加水平上的回收率在70%～120%之间。9.2精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。DB12/T986—20205（资料性附录）4种化合物的总离子流（TIC）色谱图和多反应监测（MRM）色谱图4种化合物的总离子流（TIC）色谱图见图A.1。2:MRMof2ChannelsES+95TIC(6-BA)952.74e7%-50.501.001.502.002.503.003.504.004.505.001:MRMof6ChannelsES-TIC7.49e495TIC7.49e4% -5Time0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00 图A.14种化合物的总离子流（TIC）色谱图4种化合物的多反应监测（MRM）色谱图见图A.2。6-50.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00-50.501.001.502.002.50226.2>91(6-BA)3.503.004.005.004.503.503.004.005.00八345.2>239(CHMS)2.00e4八-50.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00-51.80345.2>142.8(-5 0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.002.51184.8>140.5(4-Cl-BYYSN)h-50.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00----2.5八…--—---184.->126.5(4-Cl-B)-----50.501.00219>160.5(24-D)-50.501.001.502.002.503.