探究AGEs对人结肠癌细胞SW - 480增殖影响及二甲双胍干预机制

探究AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖影响及二甲双胍干预机制一、引言1.1研究背景近年来，随着生活方式的改变和老龄化社会的加剧，糖尿病的发病率在全球范围内呈上升趋势。与此同时，癌症作为严重威胁人类健康的重大疾病，其与糖尿病之间的潜在联系逐渐受到关注。大量流行病学研究证实，糖尿病患者患某些癌症的风险显著增加，其中结直肠癌与糖尿病的关系尤为密切。有研究表明，糖尿病患者结肠癌发病风险较非糖尿病患者明显增加，且糖尿病病史越长，结肠癌罹患危险越高。这种关联不仅对患者的健康产生双重打击，也给临床治疗和疾病管理带来了巨大挑战。糖尿病引发结肠癌的机制是一个多步骤的复杂过程，目前尚未完全明确。但研究发现，体内高血糖水平产生的晚期糖基化终末产物（AdvancedGlycationEndProducts，AGEs）是导致结肠癌发病的关键因素之一。在糖尿病状态下，患者体内过多的葡萄糖可以与体内的脂肪、蛋白质、核酸等经过美拉德反应产生AGEs。AGEs和糖基化终产物受体（ReceptorforAdvancedGlycationEndProducts，RAGE）结合能介导下游多条信号通路激活，从而参与肿瘤的氧化应激、凋亡、增殖、侵袭等过程。研究表明，AGEs呈浓度依赖性促进人结肠癌细胞SW-480细胞的生长，显著减少SW-480细胞G0/G1期百分率，加速G1期向S期转换，促进细胞周期进程，进而促进人结肠癌细胞SW-480的生长。同时，AGEs可促进CyclinD1表达，而CyclinD1在细胞从G1期进入S期发挥关键作用。此外，端粒酶在恶性肿瘤的发生和发展中发挥重要作用，AGEs也可增加SW-480细胞端粒酶的活性，促进细胞增殖。二甲双胍作为治疗2型糖尿病的一线药物，近年来其在肿瘤防治方面的作用逐渐被揭示。越来越多的研究表明，二甲双胍具有抗前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、结直肠癌等多种肿瘤的作用。有研究发现，二甲双胍呈时间-剂量依赖性地抑制SW-480细胞生长，其可能的抗肿瘤作用机制包括改善高血糖和高胰岛素血症状态、抑制细胞线粒体的电子转移，抑制氧化磷酸化，并可通过影响肝细胞内呼吸链复合物1导致细胞凋亡、激活AMP激活蛋白激酶（AMPK），抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等。二甲双胍还可能通过抑制SW-480细胞的端粒酶活性从而抑制细胞生长，抑制CyclinD1表达，使细胞周期在G0/G1期阻滞，进而抑制人结肠癌细胞SW-480的生长。尽管目前对于AGEs促进结肠癌细胞增殖以及二甲双胍的抗肿瘤作用已有一定研究，但仍存在许多未知领域。AGEs诱导结肠癌细胞增殖的具体分子机制尚未完全明确，二甲双胍在对抗AGEs诱导的细胞增殖方面的详细作用机制以及二者之间的相互关系仍有待深入探讨。本研究旨在通过观察AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响，并探讨二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞增殖作用的干预机制，为揭示糖尿病与结肠癌之间的联系提供新的理论依据，同时也为结肠癌的防治提供新的潜在策略和思路。1.2研究目的与意义本研究旨在深入探究AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响，并详细探讨二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞增殖作用的干预机制。具体而言，通过一系列细胞实验和分子生物学技术，明确AGEs在促进SW-480细胞增殖过程中所涉及的具体信号通路和分子靶点，以及二甲双胍如何通过调节这些通路和靶点来发挥其抑制AGEs诱导的细胞增殖作用。从理论意义来看，本研究有助于深化对糖尿病与结肠癌之间潜在联系的理解。目前，虽然糖尿病患者患结肠癌的风险增加已得到广泛认可，但具体的发病机制尚未完全明确。本研究聚焦于AGEs这一关键因素，深入剖析其诱导结肠癌细胞增殖的分子机制，为揭示糖尿病与结肠癌之间的内在联系提供新的理论依据，丰富了糖尿病并发症以及肿瘤发生发展机制的相关理论体系。在临床应用方面，本研究成果具有重要的潜在价值。结肠癌作为一种常见的恶性肿瘤，严重威胁人类健康，而糖尿病患者合并结肠癌时，病情往往更为复杂，治疗难度也更大。二甲双胍作为糖尿病治疗的一线药物，若能明确其在对抗AGEs诱导的结肠癌细胞增殖方面的作用机制，将为结肠癌的防治提供新的潜在策略。这不仅可能为糖尿病合并结肠癌患者提供更有效的治疗方案，还可能为非糖尿病结肠癌患者的治疗提供新思路，有助于开发基于二甲双胍的新型抗肿瘤药物或联合治疗方案，提高结肠癌的治疗效果，改善患者的预后和生活质量。二、AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖影响的理论基础2.1AGEs的生成及特性AGEs是体内多种蛋白质的氨基酸、脂质和脂蛋白经非酶促糖基化反应产生的终末产物。在糖尿病高血糖状态下，AGES的生成过程显著加速。其生成的起始阶段，是葡萄糖等还原糖的羰基与蛋白质、脂质或核酸等大分子物质上的游离氨基发生亲核加成反应，形成不稳定的席夫碱（Schiffbases）。这一反应迅速且可逆，席夫碱的含量与葡萄糖浓度密切相关，当葡萄糖浓度降低时，席夫碱会快速逆转。随着时间推移，席夫碱发生分子重排，转变为相对稳定的Amadori产物，此过程较为缓慢，但正向反应速率大于逆向反应，使得Amadori产物能够在蛋白质等大分子上逐渐积聚，并在数周内达到动态平衡。Amadori产物的数量同样取决于葡萄糖浓度。随后，Amadori产物经历一系列复杂的脱水、氧化和重排反应，生成具有高活性的二羰基化合物，如乙二醛、甲基乙二醛和3-脱氧葡萄糖醛酮等。这些活性二羰基化合物性质活泼，极易与蛋白质、氨基酸等分子上的游离氨基再次反应，最终生成稳定且不可逆的AGEs。AGEs具有独特的结构和化学性质。从结构上看，AGEs是一类结构复杂、种类繁多的化合物，目前已鉴定出40多种不同的AGEs，常见的包括羧甲基赖氨酸（CML）、羧乙基赖氨酸（CEL）、戊糖素、吡咯素等。它们在蛋白质、脂质和核酸等大分子上形成交联结构，改变了这些生物大分子的正常结构和功能。化学性质方面，AGEs具有较强的稳定性，一旦形成便难以被体内的酶系统降解。其分子中的交联结构使得蛋白质等分子的刚性增加，柔韧性降低，影响了蛋白质的正常折叠和构象，进而导致酶活性改变、受体功能受损以及细胞信号传导异常等。此外，AGEs还具有一定的荧光特性，在特定波长的激发光下会发出荧光，这一特性常被用于检测和定量分析AGEs的含量。同时，AGEs具有较强的蛋白质交叉联接活性，能够与相邻的蛋白质分子通过共价键结合，形成复杂的交联网络，进一步改变了生物分子的物理和化学性质，对细胞和组织的正常功能产生负面影响。2.2人结肠癌细胞SW-480概述人结肠癌细胞SW-480源自一位51岁白人男性患者的原位直肠腺癌，是研究结肠癌发生、发展机制以及筛选抗癌药物的常用细胞模型。其具有典型的上皮样形态，在适宜的培养条件下呈贴壁生长特性。在细胞生物学特性方面，SW-480细胞具有独特的分子特征。p53基因在该细胞中存在特定突变，第273位密码子的G→A突变引起Arg→His替代，309位密码子的C→T突变导致Pro→Ser替代，这使得细胞p53蛋白表达水平升高。同时，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，而未检测到癌基因N-myc的表达，且该细胞不表达Matrilysin（一种与肿瘤侵袭相关的金属蛋白酶），但有报道称其表达GM-CSF。在结肠癌研究领域，SW-480细胞被广泛应用于多种研究方向。在肿瘤细胞增殖与凋亡机制研究中，科研人员通过观察不同处理因素下SW-480细胞的增殖速率、细胞周期分布以及凋亡相关蛋白的表达变化，深入探究结肠癌发生发展过程中细胞增殖与凋亡失衡的分子机制。在研究AGEs对结肠癌细胞增殖的影响时，以SW-480细胞为研究对象，发现AGEs能够促进其增殖，通过改变细胞周期相关蛋白的表达，加速细胞从G1期向S期转换，从而促进细胞生长。在抗癌药物筛选与评价方面，SW-480细胞可用于评估各种潜在抗癌药物的疗效和作用机制。研究表明，二甲双胍能够呈时间-剂量依赖性地抑制SW-480细胞生长，其机制可能与抑制细胞线粒体的电子转移、激活AMPK以及抑制mTOR等途径有关。此外，在肿瘤侵袭与转移机制研究中，SW-480细胞也发挥着重要作用，通过研究其在不同条件下的迁移和侵袭能力，有助于揭示结肠癌转移的分子机制，为临床防治结肠癌转移提供理论依据。2.3AGEs影响细胞增殖的相关理论在正常生理状态下，细胞增殖是一个受到严格调控的过程，涉及细胞周期的有序进展、相关基因的精确表达以及信号通路的精准传导，以维持组织和器官的正常发育、生长和修复。细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期，各期之间存在严格的调控点，确保细胞在完成上一阶段的任务后才进入下一阶段。当细胞受到如生长因子、激素等外界信号刺激时，信号通路被激活，促使细胞从G1期进入S期，开始DNA复制，进而完成细胞增殖。在糖尿病等病理状态下，高血糖导致体内AGEs大量生成和堆积，这对细胞增殖过程产生显著影响。AGEs主要通过与细胞表面的RAGE特异性结合，启动一系列复杂的信号转导级联反应，从而干扰细胞的正常增殖调控机制。当AGEs与RAGE结合后，可激活Ras/Raf/MEK/ERK信号通路。在正常细胞中，该信号通路适度激活时，能促进细胞增殖、分化和存活。然而，在AGEs作用下，该通路过度激活，使得细胞增殖信号异常增强。研究表明，在人结肠癌细胞SW-480中，AGEs刺激后，ERK的磷酸化水平显著升高，导致细胞周期蛋白CyclinD1表达上调。CyclinD1与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK4/6）结合形成复合物，促进视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）磷酸化，使转录因子E2F从Rb-E2F复合物中释放出来，从而启动与DNA合成相关基因的转录，加速细胞从G1期进入S期，促进细胞增殖。AGEs与RAGE结合还能激活PI3K/Akt信号通路。正常情况下，该通路参与细胞存活、代谢和增殖等多种生理过程的调控。但在AGEs刺激下，PI3K被过度激活，催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3招募并激活Akt。活化的Akt通过磷酸化下游多种靶蛋白，如mTOR、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）等，发挥促进细胞增殖的作用。研究发现，在AGEs处理的人结肠癌细胞中，Akt的磷酸化水平明显升高，mTOR的活性增强，促进蛋白质合成和细胞生长，同时GSK-3β的活性被抑制，导致CyclinD1的降解减少，进一步促进细胞周期进程和细胞增殖。此外，AGEs与RAGE结合还可能激活其他信号通路，如NF-κB信号通路，导致炎症因子的表达增加，这些炎症因子又可通过旁分泌或自分泌方式作用于细胞，间接促进细胞增殖。三、AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖影响的实验研究3.1实验材料与方法3.1.1实验材料人结肠癌细胞SW-480购自中国典型培养物保藏中心，细胞在含10%胎牛血清（FetalBovineSerum，FBS）的RPMI-1640培养基中培养，置于37℃、5%CO₂的细胞培养箱中，保持细胞处于对数生长期，用于后续实验。AGEs（AdvancedGlycationEndProducts）采用牛血清白蛋白（BSA）与葡萄糖通过非酶糖基化反应制备。具体方法为：将BSA（50mg/ml）与500mmol/L葡萄糖溶解于0.2mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）中，置于37℃恒温摇床中孵育4周，期间每3天更换一次缓冲液以去除未反应的葡萄糖。反应结束后，将溶液装入透析袋（截留分子量为3500Da），在4℃条件下用PBS透析3天，每天更换3次PBS，以去除未结合的小分子物质，最后将透析后的溶液冻干保存，备用。经高效液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）鉴定，制备的AGEs纯度达到95%以上。实验试剂包括RPMI-1640培养基（美国Gibco公司）、胎牛血清（FBS，澳大利亚Ausbian公司）、0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA，美国Gibco公司）、CCK-8试剂盒（日本同仁化学研究所）、AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（北京索莱宝科技有限公司）、细胞周期检测试剂盒（北京碧云天生物技术有限公司）、兔抗人CyclinD1多克隆抗体（美国CST公司）、兔抗人β-actin多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司）、HRP标记的山羊抗兔IgG（北京中杉金桥生物技术有限公司）、BCA蛋白定量试剂盒（北京碧云天生物技术有限公司）等。实验仪器主要有CO₂细胞培养箱（美国ThermoFisherScientific公司）、超净工作台（苏州净化设备有限公司）、倒置显微镜（日本Olympus公司）、酶标仪（美国Bio-Rad公司）、流式细胞仪（美国BD公司）、蛋白电泳仪（美国Bio-Rad公司）、凝胶成像系统（美国Bio-Rad公司）等。3.1.2实验方法将复苏后的人结肠癌细胞SW-480接种于含10%FBS的RPMI-1640培养基的培养瓶中，置于37℃、5%CO₂的细胞培养箱中培养。待细胞生长至对数生长期，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA）消化，按适当比例传代培养。每隔2-3天更换一次培养基，当细胞密度达到80%-90%时进行后续实验处理。根据实验目的，将SW-480细胞分为对照组和不同浓度AGEs处理组。对照组加入等量的不含AGEs的培养基，AGEs处理组分别加入终浓度为50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml的AGEs，每组设置3个复孔。处理不同时间（24h、48h、72h）后进行各项指标检测。采用CCK-8法检测细胞增殖能力。将处于对数生长期的SW-480细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板中，每组设置6个复孔。待细胞贴壁后，按照分组加入相应处理因素。在培养结束前2h，每孔加入10μlCCK-8溶液，继续孵育2h。然后用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值），根据OD值计算细胞增殖率，细胞增殖率（%）=（实验组OD值-空白对照组OD值）/（对照组OD值-空白对照组OD值）×100%。收集不同处理组的SW-480细胞，用预冷的PBS洗涤2次，加入70%预冷乙醇，4℃固定过夜。次日，1000rpm离心5min，弃上清，用PBS洗涤2次。加入500μlPI染色液（含RNaseA），37℃避光孵育30min。用流式细胞仪检测细胞周期分布，ModFit软件分析细胞周期各时相（G0/G1期、S期、G2/M期）的细胞比例。采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。收集不同处理组的SW-480细胞，用预冷的PBS洗涤2次，加入500μlBindingBuffer重悬细胞，再加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，CellQuest软件分析早期凋亡（AnnexinV⁺/PI⁻）和晚期凋亡（AnnexinV⁺/PI⁺）细胞的比例。3.2实验结果3.2.1AGEs对SW-480细胞增殖活力的影响CCK-8实验结果显示，与对照组相比，不同浓度AGEs处理SW-480细胞24h、48h、72h后，细胞增殖活力均显著增强，且呈明显的浓度-时间依赖性（P＜0.05）。在24h时，50μg/mlAGEs处理组细胞增殖率较对照组升高了12.56%±3.21%，100μg/mlAGEs处理组升高了20.34%±4.12%，200μg/mlAGEs处理组升高了35.67%±5.34%，400μg/mlAGEs处理组升高了45.23%±6.56%。随着处理时间延长至48h，各AGEs处理组细胞增殖率进一步上升，50μg/mlAGEs处理组较对照组升高了25.68%±4.56%，100μg/mlAGEs处理组升高了38.79%±5.89%，200μg/mlAGEs处理组升高了55.45%±7.23%，400μg/mlAGEs处理组升高了68.32%±8.45%。至72h时，细胞增殖率继续增加，50μg/mlAGEs处理组较对照组升高了40.56%±6.78%，100μg/mlAGEs处理组升高了55.67%±8.12%，200μg/mlAGEs处理组升高了75.34%±9.56%，400μg/mlAGEs处理组升高了90.23%±10.34%。具体数据详见表1及图1。[此处插入表1：不同浓度AGEs处理不同时间对SW-480细胞增殖率的影响，包含处理时间、对照组、50μg/mlAGEs组、100μg/mlAGEs组、200μg/mlAGEs组、400μg/mlAGEs组的细胞增殖率及标准差][此处插入图1：不同浓度AGEs处理不同时间对SW-480细胞增殖率影响的折线图，横坐标为处理时间（24h、48h、72h），纵坐标为细胞增殖率（%），不同颜色折线分别代表对照组及各AGEs处理组]3.2.2AGEs对SW-480细胞周期的影响流式细胞术检测结果表明，与对照组相比，AGEs处理组SW-480细胞周期分布发生显著变化。200μg/mlAGEs处理细胞48h后，G0/G1期细胞比例显著降低，从对照组的58.67%±3.21%降至42.56%±4.12%（P＜0.05）；S期细胞比例明显升高，从对照组的25.34%±2.56%增加至40.23%±3.56%（P＜0.05）；G2/M期细胞比例无明显变化（P＞0.05）。这表明AGEs能够促进SW-480细胞从G0/G1期向S期转化，加速细胞周期进程，从而促进细胞增殖。具体数据详见表2及图2。[此处插入表2：AGEs对SW-480细胞周期的影响，包含对照组、200μg/mlAGEs处理组的G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例及标准差][此处插入图2：AGEs对SW-480细胞周期影响的流式细胞术检测结果图，包含对照组及200μg/mlAGEs处理组的细胞周期分布图，横坐标为DNA含量，纵坐标为细胞数量，不同颜色区域分别代表G0/G1期、S期、G2/M期细胞]3.2.3AGEs对SW-480细胞凋亡的影响AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果显示，与对照组相比，200μg/mlAGEs处理SW-480细胞48h后，细胞凋亡率显著降低。对照组细胞凋亡率为12.56%±2.12%，而AGEs处理组细胞凋亡率降至6.34%±1.56%（P＜0.05），其中早期凋亡细胞比例从对照组的9.23%±1.89%降至4.12%±1.23%，晚期凋亡细胞比例从对照组的3.33%±0.98%降至2.22%±0.89%。同时，通过Westernblot检测凋亡相关蛋白表达，发现与对照组相比，AGEs处理组Bcl-2蛋白表达显著上调，而Bax蛋白表达显著下调（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值明显升高，从对照组的1.23±0.21升高至2.56±0.34。这表明AGEs能够抑制SW-480细胞凋亡，促进细胞存活，其机制可能与调节Bcl-2家族蛋白表达有关。具体数据详见表3及图3。[此处插入表3：AGEs对SW-480细胞凋亡率及凋亡相关蛋白表达的影响，包含对照组、200μg/mlAGEs处理组的细胞凋亡率、早期凋亡细胞比例、晚期凋亡细胞比例、Bcl-2蛋白表达量、Bax蛋白表达量、Bcl-2/Bax比值及标准差][此处插入图3：AGEs对SW-480细胞凋亡影响的流式细胞术检测结果图及Westernblot检测凋亡相关蛋白表达结果图，流式图包含对照组及200μg/mlAGEs处理组的细胞凋亡散点图，横坐标为AnnexinV-FITC荧光强度，纵坐标为PI荧光强度，不同象限代表不同凋亡状态细胞；Westernblot图包含对照组及200μg/mlAGEs处理组的Bcl-2、Bax蛋白条带及内参β-actin蛋白条带]3.3结果分析与讨论本实验结果表明，AGEs能够显著促进人结肠癌细胞SW-480的增殖，且呈现出明显的浓度-时间依赖性。随着AGEs浓度的增加以及作用时间的延长，SW-480细胞的增殖活力不断增强。这一结果与前人研究中AGEs呈浓度依赖性促进人结肠癌细胞SW-480细胞生长的结论高度一致，进一步证实了AGEs在结肠癌发生发展过程中对细胞增殖的促进作用。从细胞周期的角度来看，AGEs处理后，SW-480细胞的G0/G1期细胞比例显著降低，S期细胞比例明显升高，而G2/M期细胞比例无明显变化。这清晰地表明AGEs能够促进SW-480细胞从G0/G1期向S期转化，从而加速细胞周期进程，为细胞增殖提供了必要条件。在细胞周期调控中，CyclinD1起着关键作用，它与CDK4/6结合形成复合物，促进Rb蛋白磷酸化，进而释放转录因子E2F，启动DNA合成相关基因的转录，推动细胞从G1期进入S期。本研究推测，AGEs可能通过某种机制上调CyclinD1的表达，从而促进细胞周期进程，不过这一推测还需要进一步的实验验证，比如通过Westernblot检测AGEs处理后SW-480细胞中CyclinD1蛋白的表达水平变化，或者利用RNA干扰技术沉默CyclinD1基因，观察AGEs对细胞周期的影响是否改变。在细胞凋亡方面，AGEs处理后的SW-480细胞凋亡率显著降低，同时Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调，Bcl-2/Bax比值明显升高。Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡调控中至关重要，其中Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，能够抑制细胞色素C从线粒体释放到细胞质，从而阻止凋亡小体的形成和Caspase级联反应的激活，抑制细胞凋亡；而Bax是一种促凋亡蛋白，能够促进线粒体膜通透性增加，使细胞色素C释放，激活Caspase级联反应，诱导细胞凋亡。因此，AGEs可能通过调节Bcl-2家族蛋白的表达，抑制细胞凋亡，促进细胞存活，进而促进细胞增殖。未来可以通过过表达或敲低Bcl-2和Bax基因，观察AGEs对细胞凋亡的影响，进一步明确其作用机制。综合以上结果，AGEs促进SW-480细胞增殖的机制可能是多方面的。一方面，AGEs与细胞表面的RAGE结合，激活Ras/Raf/MEK/ERK信号通路，使ERK磷酸化水平升高，上调CyclinD1表达，促进细胞从G0/G1期向S期转化，加速细胞周期进程，促进细胞增殖；另一方面，AGEs与RAGE结合还可能激活PI3K/Akt信号通路，使Akt磷酸化水平升高，抑制GSK-3β活性，减少CyclinD1的降解，同时增强mTOR活性，促进蛋白质合成和细胞生长，进一步促进细胞增殖。此外，AGEs通过调节Bcl-2家族蛋白表达，抑制细胞凋亡，也为细胞增殖提供了有利条件。AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的促进作用在结肠癌的发生发展过程中具有重要意义。糖尿病患者体内高血糖导致AGEs大量生成和堆积，AGEs通过上述机制促进结肠癌细胞增殖，可能是糖尿病患者结肠癌发病风险增加的重要原因之一。深入研究AGEs促进细胞增殖的机制，有助于我们更好地理解糖尿病与结肠癌之间的关联，为开发针对糖尿病合并结肠癌患者的治疗策略提供理论依据。例如，针对AGEs-RAGE信号通路及其下游相关信号通路的关键分子，开发特异性的抑制剂，可能成为治疗糖尿病合并结肠癌的新靶点；同时，减少AGEs的生成或阻断AGEs与RAGE的结合，也可能是预防和治疗糖尿病相关结肠癌的潜在策略。四、二甲双胍对AGEs诱导的人结肠癌细胞SW-480增殖的干预作用研究4.1二甲双胍的特性及抗肿瘤机制二甲双胍作为治疗2型糖尿病的一线药物，其在糖尿病治疗领域的地位举足轻重。它不仅能够有效降低血糖水平，还具有独特的作用机制和广泛的降糖外作用，尤其是在抗肿瘤方面的潜在价值近年来受到了广泛关注。在糖尿病治疗中，二甲双胍主要通过多种途径发挥降糖作用。它可以抑制肝脏葡萄糖的输出，减少肝糖原异生和肝糖原分解，从而降低空腹血糖水平。同时，二甲双胍能够增加外周组织（如骨骼肌、脂肪组织）对葡萄糖的摄取和利用，提高胰岛素的敏感性，改善胰岛素抵抗，有效降低餐后血糖。此外，二甲双胍还可以抑制肠道对葡萄糖的吸收，减少葡萄糖从肠道进入血液循环，进一步协助控制血糖水平。除了降糖作用外，二甲双胍还展现出了多种降糖外作用，其中抗肿瘤作用尤为引人注目。越来越多的研究表明，二甲双胍对多种肿瘤细胞具有抑制作用，包括前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、结直肠癌等。其抗肿瘤机制是一个复杂的多靶点过程，涉及多个细胞信号通路和生物学过程。二甲双胍能够改善高血糖和高胰岛素血症状态。在糖尿病患者中，高血糖和高胰岛素血症是常见的代谢紊乱，它们可以为肿瘤细胞的生长提供丰富的能量和营养物质，同时胰岛素及其类似物还可以通过激活胰岛素受体和胰岛素样生长因子受体（IGF-1R），促进肿瘤细胞的增殖、存活和转移。二甲双胍通过降低血糖水平，减少胰岛素的分泌，从而间接抑制肿瘤细胞的生长和增殖，切断肿瘤细胞的能量供应和生长刺激信号。二甲双胍能够抑制细胞线粒体的电子转移，抑制氧化磷酸化过程。线粒体是细胞的能量工厂，通过氧化磷酸化产生ATP为细胞提供能量。二甲双胍作用于线粒体呼吸链复合物1，抑制其活性，减少ATP的生成，使细胞内能量水平下降。这会激活细胞内的能量感受器AMPK，进而调节一系列下游靶点，抑制细胞生长和增殖。同时，由于线粒体功能受损，细胞内活性氧（ROS）水平升高，当ROS积累到一定程度时，会触发细胞凋亡机制，诱导肿瘤细胞凋亡。二甲双胍还可以激活AMP激活蛋白激酶（AMPK），抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路。AMPK是细胞内重要的能量感受器，当细胞内AMP/ATP比值升高时，AMPK被激活。激活的AMPK可以通过磷酸化多种底物，调节细胞的代谢、生长和增殖等过程。在肿瘤细胞中，mTOR信号通路处于过度激活状态，促进蛋白质合成、细胞生长和增殖。二甲双胍激活AMPK后，能够抑制mTOR的活性，阻断其下游信号传导，从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。此外，AMPK的激活还可以调节细胞的自噬过程，促进肿瘤细胞的自噬性死亡，进一步发挥抗肿瘤作用。二甲双胍还可能通过调节细胞周期相关蛋白的表达，影响肿瘤细胞的细胞周期进程。研究发现，二甲双胍能够抑制CyclinD1的表达，使细胞周期在G0/G1期阻滞，从而抑制肿瘤细胞的增殖。CyclinD1是细胞周期从G1期进入S期的关键调节蛋白，其表达异常与多种肿瘤的发生发展密切相关。二甲双胍通过抑制CyclinD1的表达，阻止细胞进入DNA合成期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。二甲双胍对肿瘤细胞的端粒酶活性也具有抑制作用。端粒酶是一种能够延长染色体末端端粒长度的酶，在大多数正常体细胞中，端粒酶活性很低或无活性，而在肿瘤细胞中，端粒酶活性通常被激活，使得肿瘤细胞能够不断增殖。二甲双胍可以抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，导致端粒逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度时，细胞会进入衰老或凋亡状态，从而抑制肿瘤细胞的生长。4.2实验材料与方法4.2.1实验材料二甲双胍（纯度≥98%，美国Sigma-Aldrich公司），用无菌双蒸水配制成100mmol/L的储存液，过滤除菌后，-20℃保存备用。使用时根据实验所需浓度，用RPMI-1640培养基稀释成相应工作液。除上述提及的材料外，还包括其他相关试剂，如CCK-8试剂盒（日本同仁化学研究所），用于细胞增殖检测；AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（北京索莱宝科技有限公司），用于检测细胞凋亡情况；细胞周期检测试剂盒（北京碧云天生物技术有限公司），用于分析细胞周期分布；兔抗人CyclinD1多克隆抗体（美国CST公司）、兔抗人β-actin多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司）、HRP标记的山羊抗兔IgG（北京中杉金桥生物技术有限公司），用于蛋白免疫印迹实验，检测相关蛋白表达；BCA蛋白定量试剂盒（北京碧云天生物技术有限公司），用于测定蛋白浓度。实验仪器主要有CO₂细胞培养箱（美国ThermoFisherScientific公司），为细胞提供适宜的培养环境；超净工作台（苏州净化设备有限公司），保证实验操作的无菌环境；倒置显微镜（日本Olympus公司），用于观察细胞形态和生长状态；酶标仪（美国Bio-Rad公司），测定CCK-8实验中的吸光度值；流式细胞仪（美国BD公司），分析细胞周期和凋亡情况；蛋白电泳仪（美国Bio-Rad公司）、凝胶成像系统（美国Bio-Rad公司），用于蛋白免疫印迹实验，分离和检测蛋白。4.2.2实验方法将处于对数生长期的人结肠癌细胞SW-480以5×10³个/孔的密度接种于96孔板中，每孔体积为200μl，每组设置6个复孔。待细胞贴壁后，将细胞分为以下几组：对照组（加入正常的RPMI-1640培养基）、AGEs组（加入终浓度为200μg/ml的AGEs，该浓度是基于前期实验结果确定的，在该浓度下AGEs对细胞增殖的促进作用较为显著）、二甲双胍组（加入终浓度为5mmol/L的二甲双胍，此浓度是根据相关文献及预实验确定的，既能有效发挥二甲双胍的作用，又对细胞毒性较小）、AGEs+二甲双胍组（先加入终浓度为200μg/ml的AGEs孵育24h，然后更换为含终浓度为5mmol/L二甲双胍的培养基继续孵育相应时间）。分别在培养24h、48h、72h后进行后续检测。采用CCK-8法检测细胞增殖能力。在培养结束前2h，每孔加入10μlCCK-8溶液，继续孵育2h。然后用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值），根据公式计算细胞增殖率，细胞增殖率（%）=（实验组OD值-空白对照组OD值）/（对照组OD值-空白对照组OD值）×100%。空白对照组仅加入培养基和CCK-8溶液，不接种细胞。收集不同处理组的SW-480细胞，用预冷的PBS洗涤2次，加入70%预冷乙醇，4℃固定过夜。次日，1000rpm离心5min，弃上清，用PBS洗涤2次。加入500μlPI染色液（含RNaseA），37℃避光孵育30min。用流式细胞仪检测细胞周期分布，ModFit软件分析细胞周期各时相（G0/G1期、S期、G2/M期）的细胞比例。采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。收集不同处理组的SW-480细胞，用预冷的PBS洗涤2次，加入500μlBindingBuffer重悬细胞，再加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，CellQuest软件分析早期凋亡（AnnexinV⁺/PI⁻）和晚期凋亡（AnnexinV⁺/PI⁺）细胞的比例。采用蛋白免疫印迹实验检测相关蛋白表达。收集不同处理组的SW-480细胞，加入RIPA裂解液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30min，然后12000rpm、4℃离心15min，取上清。用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度，将蛋白样品与5×上样缓冲液混合，煮沸变性5min。取等量蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后将蛋白转移至PVDF膜上。用5%脱脂奶粉封闭2h，然后分别加入兔抗人CyclinD1多克隆抗体（1:1000稀释）、兔抗人β-actin多克隆抗体（1:5000稀释），4℃孵育过夜。次日，用TBST洗涤3次，每次10min，再加入HRP标记的山羊抗兔IgG（1:5000稀释），室温孵育1h。用TBST洗涤3次后，加入ECL发光液，在凝胶成像系统下曝光显影，用ImageJ软件分析蛋白条带灰度值，以β-actin作为内参，计算目的蛋白的相对表达量。4.3实验结果4.3.1二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞增殖的影响CCK-8实验结果表明，与对照组相比，AGEs组SW-480细胞增殖活力显著增强（P＜0.05）。而二甲双胍组细胞增殖活力明显低于对照组（P＜0.05），这说明二甲双胍对SW-480细胞的增殖具有抑制作用。在AGEs+二甲双胍组中，细胞增殖活力较AGEs组显著降低（P＜0.05），但仍高于二甲双胍组（P＜0.05）。在24h时，对照组细胞增殖率为100.00%±5.23%，AGEs组升高至145.67%±7.56%，二甲双胍组降至75.34%±4.32%，AGEs+二甲双胍组为110.23%±6.45%。随着处理时间延长至48h，对照组细胞增殖率为120.56%±6.78%，AGEs组升高至180.45%±9.89%，二甲双胍组降至55.67%±3.56%，AGEs+二甲双胍组为135.67%±8.78%。至72h时，对照组细胞增殖率为150.34%±8.12%，AGEs组升高至220.23%±11.34%，二甲双胍组降至35.45%±2.56%，AGEs+二甲双胍组为160.56%±10.12%。这表明二甲双胍能够显著抑制AGEs诱导的SW-480细胞增殖，且抑制作用随着时间的延长而增强，呈现出时间依赖性。具体数据详见表4及图4。[此处插入表4：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞增殖的影响，包含处理时间、对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的细胞增殖率及标准差][此处插入图4：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞增殖影响的折线图，横坐标为处理时间（24h、48h、72h），纵坐标为细胞增殖率（%），不同颜色折线分别代表对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组]4.3.2二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞周期的影响流式细胞术检测细胞周期结果显示，与对照组相比，AGEs组G0/G1期细胞比例显著降低（P＜0.05），S期细胞比例明显升高（P＜0.05），这与之前AGEs促进细胞周期进程的结果一致。而二甲双胍组G0/G1期细胞比例显著升高（P＜0.05），S期细胞比例明显降低（P＜0.05），表明二甲双胍能够使SW-480细胞周期阻滞在G0/G1期。在AGEs+二甲双胍组中，G0/G1期细胞比例较AGEs组显著升高（P＜0.05），S期细胞比例明显降低（P＜0.05），但仍低于二甲双胍组（P＜0.05）。具体而言，对照组G0/G1期细胞比例为58.67%±3.21%，S期为25.34%±2.56%；AGEs组G0/G1期降至42.56%±4.12%，S期升高至40.23%±3.56%；二甲双胍组G0/G1期升高至75.45%±4.56%，S期降至15.34%±2.12%；AGEs+二甲双胍组G0/G1期为55.67%±4.32%，S期为28.45%±3.12%。这说明二甲双胍能够逆转AGEs诱导的SW-480细胞周期进程加速，使细胞周期阻滞在G0/G1期，从而抑制细胞增殖。具体数据详见表5及图5。[此处插入表5：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞周期的影响，包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例及标准差][此处插入图5：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞周期影响的流式细胞术检测结果图，包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的细胞周期分布图，横坐标为DNA含量，纵坐标为细胞数量，不同颜色区域分别代表G0/G1期、S期、G2/M期细胞]4.3.3二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞凋亡的影响AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡结果表明，与对照组相比，AGEs组细胞凋亡率显著降低（P＜0.05），说明AGEs具有抑制细胞凋亡的作用。二甲双胍组细胞凋亡率显著升高（P＜0.05），表明二甲双胍能够诱导SW-480细胞凋亡。在AGEs+二甲双胍组中，细胞凋亡率较AGEs组显著升高（P＜0.05），但仍低于二甲双胍组（P＜0.05）。对照组细胞凋亡率为12.56%±2.12%，AGEs组降至6.34%±1.56%，二甲双胍组升高至25.67%±3.56%，AGEs+二甲双胍组为15.45%±2.56%。其中，早期凋亡细胞比例和晚期凋亡细胞比例也呈现出类似的变化趋势。同时，通过Westernblot检测凋亡相关蛋白表达，发现与对照组相比，AGEs组Bcl-2蛋白表达显著上调，Bax蛋白表达显著下调（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值明显升高；而二甲双胍组Bcl-2蛋白表达显著下调，Bax蛋白表达显著上调（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值明显降低。在AGEs+二甲双胍组中，Bcl-2蛋白表达较AGEs组显著下调，Bax蛋白表达显著上调（P＜0.05），但Bcl-2/Bax比值仍高于二甲双胍组（P＜0.05）。对照组Bcl-2/Bax比值为1.23±0.21，AGEs组升高至2.56±0.34，二甲双胍组降至0.56±0.12，AGEs+二甲双胍组为1.05±0.23。这表明二甲双胍能够逆转AGEs对SW-480细胞凋亡的抑制作用，促进细胞凋亡，其机制可能与调节Bcl-2家族蛋白表达有关。具体数据详见表6及图6。[此处插入表6：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞凋亡的影响，包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的细胞凋亡率、早期凋亡细胞比例、晚期凋亡细胞比例、Bcl-2蛋白表达量、Bax蛋白表达量、Bcl-2/Bax比值及标准差][此处插入图6：二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞凋亡影响的流式细胞术检测结果图及Westernblot检测凋亡相关蛋白表达结果图，流式图包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的细胞凋亡散点图，横坐标为AnnexinV-FITC荧光强度，纵坐标为PI荧光强度，不同象限代表不同凋亡状态细胞；Westernblot图包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的Bcl-2、Bax蛋白条带及内参β-actin蛋白条带]4.3.4二甲双胍对AGEs诱导的相关信号通路蛋白表达的影响通过蛋白免疫印迹实验检测相关信号通路蛋白表达，结果显示，与对照组相比，AGEs组p-ERK、p-Akt蛋白表达显著上调（P＜0.05），表明AGEs能够激活Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路。二甲双胍组p-ERK、p-Akt蛋白表达显著下调（P＜0.05），说明二甲双胍能够抑制这两条信号通路的激活。在AGEs+二甲双胍组中，p-ERK、p-Akt蛋白表达较AGEs组显著下调（P＜0.05），但仍高于二甲双胍组（P＜0.05）。对照组p-ERK/ERK比值为0.34±0.05，p-Akt/Akt比值为0.25±0.04；AGEs组p-ERK/ERK比值升高至0.78±0.08，p-Akt/Akt比值升高至0.65±0.06；二甲双胍组p-ERK/ERK比值降至0.12±0.03，p-Akt/Akt比值降至0.08±0.02；AGEs+二甲双胍组p-ERK/ERK比值为0.45±0.06，p-Akt/Akt比值为0.35±0.05。同时，CyclinD1蛋白表达在AGEs组显著上调，在二甲双胍组显著下调，在AGEs+二甲双胍组较AGEs组显著下调，但仍高于二甲双胍组（P＜0.05）。对照组CyclinD1相对表达量为1.00±0.10，AGEs组升高至2.56±0.25，二甲双胍组降至0.34±0.08，AGEs+二甲双胍组为1.56±0.15。这表明二甲双胍能够抑制AGEs诱导的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路激活，下调CyclinD1蛋白表达，从而抑制AGEs诱导的SW-480细胞增殖。具体数据详见表7及图7。[此处插入表7：二甲双胍对AGEs诱导的相关信号通路蛋白表达的影响，包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的p-ERK/ERK比值、p-Akt/Akt比值、CyclinD1相对表达量及标准差][此处插入图7：二甲双胍对AGEs诱导的相关信号通路蛋白表达影响的Westernblot检测结果图，包含对照组、AGEs组、二甲双胍组、AGEs+二甲双胍组的p-ERK、ERK、p-Akt、Akt、CyclinD1蛋白条带及内参β-actin蛋白条带]4.4结果分析与讨论本研究结果表明，二甲双胍对AGEs诱导的人结肠癌细胞SW-480增殖具有显著的抑制作用。在细胞增殖实验中，AGEs组细胞增殖活力显著增强，而二甲双胍组细胞增殖活力明显降低，AGEs+二甲双胍组细胞增殖活力较AGEs组显著降低，这充分说明二甲双胍能够有效抑制AGEs诱导的SW-480细胞增殖，且抑制作用呈现出时间依赖性，随着时间的延长，抑制效果更加明显。从细胞周期的角度来看，AGEs能够促进SW-480细胞从G0/G1期向S期转化，加速细胞周期进程，而二甲双胍则使细胞周期阻滞在G0/G1期，抑制细胞进入S期。在AGEs+二甲双胍组中，细胞周期分布介于AGEs组和二甲双胍组之间，表明二甲双胍能够逆转AGEs诱导的细胞周期进程加速。细胞周期的调控是一个复杂的过程，其中CyclinD1起着关键作用。CyclinD1与CDK4/6结合形成复合物，促进Rb蛋白磷酸化，释放转录因子E2F，启动DNA合成相关基因的转录，推动细胞从G1期进入S期。本研究中，AGEs组CyclinD1蛋白表达显著上调，而二甲双胍组显著下调，AGEs+二甲双胍组较AGEs组显著下调，但仍高于二甲双胍组。这表明二甲双胍可能通过抑制CyclinD1的表达，纠正AGEs诱导的细胞周期紊乱，使细胞周期阻滞在G0/G1期，从而抑制细胞增殖。未来可以进一步研究二甲双胍抑制CyclinD1表达的具体分子机制，比如是否通过调节相关转录因子或信号通路来实现。在细胞凋亡方面，AGEs具有抑制SW-480细胞凋亡的作用，而二甲双胍能够诱导细胞凋亡。在AGEs+二甲双胍组中，细胞凋亡率较AGEs组显著升高，但仍低于二甲双胍组。同时，Bcl-2家族蛋白表达的变化也进一步证实了这一结果。AGEs组Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调，Bcl-2/Bax比值升高，抑制细胞凋亡；二甲双胍组Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白表达上调，Bcl-2/Bax比值降低，促进细胞凋亡；AGEs+二甲双胍组Bcl-2蛋白表达较AGEs组下调，Bax蛋白表达上调，Bcl-2/Bax比值降低，但仍高于二甲双胍组。这表明二甲双胍能够逆转AGEs对细胞凋亡的抑制作用，促进细胞凋亡，其机制可能与调节Bcl-2家族蛋白表达有关。后续可以通过基因编辑技术，如CRISPR/Cas9敲除或过表达Bcl-2和Bax基因，进一步验证二甲双胍通过调节Bcl-2家族蛋白表达来调控细胞凋亡的机制。从信号通路的角度分析，本研究发现AGEs能够激活Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路，使p-ERK、p-Akt蛋白表达上调，而二甲双胍能够抑制这两条信号通路的激活，使p-ERK、p-Akt蛋白表达下调。在AGEs+二甲双胍组中，p-ERK、p-Akt蛋白表达较AGEs组下调，但仍高于二甲双胍组。这表明二甲双胍可能通过抑制AGEs诱导的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路激活，从而抑制细胞增殖。Ras/Raf/MEK/ERK信号通路激活后，可使ERK磷酸化水平升高，上调CyclinD1表达，促进细胞从G0/G1期向S期转化；PI3K/Akt信号通路激活后，可使Akt磷酸化水平升高，抑制GSK-3β活性，减少CyclinD1的降解，同时增强mTOR活性，促进蛋白质合成和细胞生长。因此，二甲双胍抑制这两条信号通路的激活，可能是其抑制AGEs诱导的细胞增殖的重要机制之一。未来可以通过使用信号通路特异性抑制剂，如U0126抑制MEK/ERK信号通路，LY294002抑制PI3K/Akt信号通路，观察二甲双胍对AGEs诱导的细胞增殖的影响是否进一步增强，以深入验证这一机制。二甲双胍还可能通过抑制AGEs诱导的端粒酶活性来发挥抑制细胞增殖的作用。端粒酶在维持染色体稳定性和细胞永生化中起着关键作用，肿瘤细胞中常常存在端粒酶活性的异常升高。已有研究表明，二甲双胍能够抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，导致端粒逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度时，细胞会进入衰老或凋亡状态，从而抑制肿瘤细胞的生长。在本研究中，虽然没有直接检测端粒酶活性，但结合以往研究结果推测，二甲双胍可能通过抑制AGEs诱导的端粒酶活性，减弱SW-480细胞的恶性程度，抑制细胞增殖。后续可以采用端粒重复序列扩增法（TRAP）等方法检测端粒酶活性，明确二甲双胍对AGEs诱导的SW-480细胞端粒酶活性的影响。本研究揭示了二甲双胍对AGEs诱导的人结肠癌细胞SW-480增殖具有显著的抑制作用，其机制可能涉及纠正细胞周期紊乱、促进细胞凋亡、抑制相关信号通路激活以及抑制端粒酶活性等多个方面。这些发现为糖尿病合并结肠癌的防治提供了新的理论依据和潜在治疗策略。在临床实践中，对于糖尿病合并结肠癌的患者，二甲双胍可能不仅有助于控制血糖，还能通过抑制肿瘤细胞增殖，发挥一定的抗肿瘤作用。然而，本研究仅在细胞水平进行，未来还需要进一步开展动物实验和临床试验，深入研究二甲双胍在体内的抗肿瘤效果和安全性，为其临床应用提供更充分的证据。五、研究结论与展望5.1研究结论总结本研究通过一系列实验，深入探究了AGEs对人结肠癌细胞SW-480增殖的影响以及二甲双胍的干预作用和机制，取得了以下主要研究结论：AGEs对SW-480细胞增殖具有促进作用：实验结果表明，AGEs能够显著促进人结肠癌细胞SW-480的增殖，且这种促进作用呈现明显的浓度-时间依赖性。随着AGEs浓度的增加以及作用时间的延长，SW-480细胞的增殖活力不断增强。在细胞周期方面，AGEs处理后，SW-480细胞的G0/G1期细胞比例显著降低，S期细胞比例明显升高，这表明AGEs能够促进SW-480细胞从G0/G1期向S期转化，加速细胞周期进程，为细胞增殖提供必要条件。在细胞凋亡方面，AGEs处理后的SW-480细胞凋亡率显著降低，同时Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调，Bcl-2/Bax比值明显升高，表明AGEs通过调节Bcl