基因测序工程师考试试卷及答案

基因测序工程师考试试卷及答案第一部分填空题（共10题，每题1分）1.Sanger测序中终止DNA链延伸的物质是______。2.Illumina二代测序的核心技术是______。3.负责DNA链合成的酶是______。4.PacBio三代测序的主要特点是______读长。5.DNA四种碱基除A、T、C外还有______。6.NGS文库构建中需连接的已知序列是______。7.Sanger测序用不同______标记碱基。8.中国自主测序仪品牌举例：______。9.CRISPR可用于______测序的靶向捕获。10.RNA-seq针对的是细胞______。填空题答案：1.双脱氧核苷酸（ddNTP）2.边合成边测序（SBS）3.DNA聚合酶4.长（超长）5.G（鸟嘌呤）6.接头（adaptor）7.荧光染料8.华大智造（BGI）9.靶向10.转录组（RNA）第二部分单项选择题（共10题，每题2分）1.Sanger测序属于第几代？A.一代B.二代C.三代D.四代2.Illumina测序载体是？A.磁珠B.芯片（flowcell）C.纳米孔D.微球3.无需PCR的测序技术是？A.SangerB.IlluminaC.PacBioD.均需4.Q30代表错误率约为？A.1e-1B.1e-2C.1e-3D.1e-55.RNA-seq第一步需反转录为？A.cDNAB.DNAC.RNAD.蛋白质6.检测DNA甲基化的方法是？A.WGSB.MSPC.RNA-seqD.芯片7.单细胞测序核心优势是？A.测大量细胞B.细胞异质性C.成本最低D.读长最长8.FASTQ第三行符号是？A.@B.+C.D.$9.三代测序平台是？A.NovaSeqB.IonTorrentC.SequelD.MGISEQ10.测序“覆盖度”指？A.读长B.碱基测序次数C.通量D.错误率单项选择题答案：1.A2.B3.C4.D5.A6.B7.B8.B9.C10.B第三部分多项选择题（共10题，每题2分，多选少选不得分）1.二代测序平台包括？A.NovaSeqB.SequelC.IonTorrentD.MGISEQE.Nanopore2.Sanger测序步骤有？A.模板制备B.PCRC.测序反应D.毛细管电泳E.荧光检测3.NGS文库构建关键步骤？A.片段化B.末端修复C.加A尾D.接接头E.PCR扩增4.测序QC指标有？A.Q20比例B.Q30比例C.读长D.覆盖度E.碱基组成5.单细胞测序应用领域？A.肿瘤异质性B.胚胎发育C.神经科学D.免疫组库E.药物靶点6.DNA甲基化检测方法？A.WGBSB.MSPC.甲基化芯片D.RNA-seqE.ChIP-seq7.肿瘤测序应用？A.驱动基因B.耐药监测C.液体活检D.预后E.靶向指导8.RNA-seq分析步骤？A.QCB.基因组比对C.表达定量D.差异分析E.功能富集9.PacBio优势？A.超长读长B.无PCR偏好C.直接测甲基化D.高准确率E.低成本10.Illumina测序步骤？A.文库制备B.簇生成C.边合成边测序D.图像采集E.碱基识别多项选择题答案：1.ACD2.ACDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCDE6.ABC7.ABCDE8.ABCDE9.ABC10.ABCDE第四部分判断题（共10题，每题2分，√/×）1.Sanger测序为一代，读长<1kb。2.Illumina是三代测序，读长>10kb。3.Q20表示错误率1×10^-2。4.NGS文库构建必须经PCR。5.PacBio读长可达Mb级别。6.RNA-seq无需反转录为cDNA。7.CRISPR可用于靶向测序捕获。8.FASTQ第四行是碱基质量值。9.基因测序只能测DNA，不能测RNA。10.单细胞测序可分析细胞转录组异质性。判断题答案：1.√2.×3.√4.×5.√6.×7.√8.×9.×10.√第五部分简答题（共4题，每题5分）1.简述Sanger测序原理。答案：基于双脱氧核苷酸（ddNTP）终止链延伸。DNA聚合酶以单链模板合成互补链，掺入ddNTP（缺3’-OH）时链终止。反应含模板、引物、dNTP、荧光标记ddNTP，经毛细管电泳分离不同长度片段，检测末端荧光信号读取序列。2.一代（Sanger）与二代（Illumina）测序差异？答案：①读长：Sanger500-1000bp，Illumina150-300bp；②通量：Sanger低（数十样本/次），Illumina高（数十亿读段/次）；③成本：Sanger单样本高，Illumina规模化低；④应用：Sanger适合验证，Illumina适合大规模测序；⑤原理：Sanger终止法，Illumina边合成边测序。3.NGS文库构建基本流程？答案：①片段化：超声/酶切DNA为目标长度；②末端修复：补平粘性末端为平端；③加A尾：平端3’加A；④接接头：连接已知序列接头；⑤PCR扩增：富集带接头片段；⑥质检：电泳、定量检测浓度和片段大小。4.测序数据QC主要内容？答案：①原始数据：Q20/Q30比例、读长分布、碱基组成；②过滤：去除低质量、含N、接头序列；③比对后：比对率、覆盖度、PCR重复率；④特异性QC：如甲基化测序bisulfite转化率、RNA-seqrRNA去除效率。第六部分讨论题（共2题，每题5分）1.NGS在肿瘤液体活检中的应用及挑战？答案：应用：①ctDNA检测：分析突变、拷贝数，辅助早期诊断、耐药监测；②CTCs检测：分析细胞表型，指导治疗；③外泌体RNA/DNA：发现标志物。挑战：①ctDNA丰度低（<1%），需高灵敏度；②正常DNA干扰，富集难度大；③片段化影响分析；④样本处理无标准化，重复性差；⑤成本高，基层普及难。2.单细胞测序优势及技术瓶颈？答案：优势：①解析细胞异质性（如肿瘤干细胞、免疫