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文档简介

实验二细菌革兰氏染色实验目的a.复习细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点b.掌握革兰氏染色法、芽孢染色法的步骤和关键点c.学习无菌操作技术

实验原理a.革兰氏染色实验原理b.芽孢染色实验原理实验材料显微镜，擦镜纸，载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯;革兰氏染液、孔雀绿染液；香柏油,自来水,95%酒精;苏云金杆菌（Bacillusthuringiensis）,大肠杆菌（Escherichiacoli）,四联球菌（Micrococcustetragenus）LB培养基革兰氏染色实验步骤1.涂片左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中去菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜;从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取适量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中;2.干燥在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行).

3.热固定用镊子夹住涂片一端,

在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.4.染色初染

在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗;吸干,媒染

滴加1-2滴革氏碘液媒染1min,轻轻水洗,吸干。脱色滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。复染滴加蕃红染液复染2min,轻轻滴加水洗;镜检吸干载玻片背面及标本周围水渍，镜检;5.镜检结果绘图并表明革兰氏染色结果

注意标本中细菌的形态,

大小,排列,和颜色.革兰氏阳性菌为紫色;革兰氏阴性菌为红色;金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果芽孢染色法（Schaeffer与Fulton氏染色法）

（1）涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。（2）晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2—3次。（3）染色：①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持5min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。②水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。③复染：用蕃红液染色5min。（4）水洗、晾干或吸干。（5）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞、伴孢晶体和菌体的形态以及芽孢的着生位置。结果：芽胞呈绿色，菌体和伴孢晶体为红色。2、伴孢晶体（parasporalcrystal）

少数芽孢杆菌，例如苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体——δ内毒素，称为伴孢晶体。伴孢晶体对200多种昆虫尤其是鳞翅目的幼虫有毒杀作用，因而可将这类产伴孢晶体的细菌制成有利于环境保护的生物农药——细菌杀虫剂。特点：不溶于水，对蛋白酶类不敏感；容易溶于碱性溶剂。作业记录并描绘革兰氏染色、芽孢染色结果,注

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