动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体Animalcellfusiontechniquewithmonoclonalantibodies动物细胞工程ONE1动物细胞融合技术WHENCOBWEBSRUTHLESSLYSEIZED1.概念：2.原理：使两个或多个动物细胞形成一个细胞的技术。⊙形成的具有原来

的

细胞，称为

。细胞融合的实质是核融合。3.

诱导融合的方法：细胞膜的流动性动物细胞融合技术单核两个或多个细胞遗传信息杂交细胞物理方法：电融合法化学方法：聚乙二醇（PEG）法生物方法：灭活病毒诱导法灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，并不破坏它们的抗原结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。4.意义：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。5.应用：（1）成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。（2）用于制造单克隆抗体。小结：动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理步骤诱导方法结果意义细胞膜的流动性和植物细胞的全能性细胞膜的流动性酶解法去掉细胞壁后，诱导原生质体融合，形成杂种体细胞，再经过植物组织培养形成杂种植株分散成单个细胞后诱导细胞融合，形成杂交细胞物理方法、化学方法物理方法、化学方法、灭活病毒形成杂种植株形成杂种细胞，以生产细胞产品克服远缘杂交不亲和障碍一

动物细胞融合技术易错提醒1．与植物原生质体融合相比，动物细胞融合特有的诱导因素有聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒（）2．灭活的含义是用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构（）3．二倍体动物细胞融合后的杂交细胞仍然是二倍体细胞（）TWO2单克隆抗体及其应用1.传统抗体的获得（1）方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。（2）缺陷：制备的抗体产量低、纯度低以及特异性差。单克隆抗体是由单一杂交瘤细胞增殖产生的高度专一的抗体。2.单克隆抗体的制备（1）制备原理①B淋巴细胞的特点：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，B淋巴细胞在体外不能无限增殖。②骨髓瘤细胞的特点：在体外能大量增殖，但不能产生抗体。③杂交瘤细胞的特点：B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合得到的杂交瘤细胞，既能迅速大量增殖，又能产生专一的抗体。（2）制备过程用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。培养骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合多种杂交细胞杂交瘤细胞(既能迅速大量增殖，又能产生抗体)用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。⊙细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。⊙B淋巴细胞中含有两条DNA合成途径，但一般不分裂，且不能在体外长期存活，因此不会影响杂交瘤细胞的生长。骨髓瘤细胞只能通过D途径合成DNA。⊙利用HAT选择培养基（含氨基蝶呤）对杂交瘤细胞进行筛选。抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能与特定抗原结合）体外培养注射到小鼠腹腔内将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。单克隆抗体从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。⊙在小鼠腹腔内培养与在体外培养相比，优点是不需要特定的培养基，不需要严格控制环境条件。（3）优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备。应用①作为诊断试剂：它在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥着重要作用；具有准确、高效、简易、快速的优点。②用于治疗疾病和运载药物：单独使用时可直接用于癌症和其他疾病的治疗；抗体-药物偶联物（ADC）通过将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。⊙组成：ADC＝抗体＋药物（如细胞毒素）＋接头。⊙原理：单克隆抗体与肿瘤细胞表面的特定抗原专一性结合，使药物定向作用于肿瘤细胞。⊙优点：用药量小、疗效高、毒副作用小。单克隆抗体+接头+药物（如细胞毒素）=ADC项目第一次筛选第二次筛选（需要多次筛选）筛选原因方法筛选结果诱导融合后得到多种杂交细胞，还有未融合细胞等用特定的选择培养基进行筛选：未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长。筛选获得多种杂交瘤细胞选择培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞。用96孔板培养，在每个孔中尽量接种一个杂交瘤细胞的情况下进行克隆化培养和抗体检测，经过多次筛选得到足够数量的能分泌所需抗体的细胞。筛选出分泌所需抗体的杂交瘤细胞概述应用动物细胞融合技术过程结果意义原理融合方法原理应用单克隆抗体的制备免疫处理第一次筛选诱导融合第二次筛选大规模培养诊断试剂运载药物治疗疾病克隆化培养抗体检测体外培养小鼠腹腔FOUR4课后作业HOMEWORKAFTERCLASS1.下列有关动物细胞融合与植物体细胞杂交比较的叙述，错误的是(

)A.它们的原理都涉及细胞膜的流动性B.都可以用电融合法或PEG融合法诱导融合C.融合前都需用纤维素酶或果胶酶处理细胞D.前者主要是为了获得细胞产品，后者主要是为了获得杂种植株C2.科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述正确的是(

)A.利用该单克隆抗体可以诊断是否感