DB36∕T 2203-2025 人胃肠癌类器官药物敏感性测试管理规范

ICS11.100.10

CCSC44DB36

江西省地方标准

DB36/T2203—2025

人胃肠癌类器官药物敏感性测试管理规范

Managementspecificationofhumangastrointestinaltumoroidsdrug

sensitivityscreening

2025-12-29发布2026-07-01实施

江西省市场监督管理局发布

DB36/T2203—2025

目  次

前言...............................................................................II

1范围................................................................................1

2规范性引用文件......................................................................1

3术语和定义..........................................................................1

4缩略语..............................................................................2

5伦理要求............................................................................3

6类器官要求..........................................................................3

7类器官管理要求......................................................................4

8类器官药敏测试......................................................................5

附录A（资料性附录）类器官存活率检测-钙黄绿素AM染色法.................................8

附录B（资料性附录）类器官组织病理检测-石蜡切片和冰冻切片法............................9

附录C（资料性附录）类器官基因变异检测................................................10

附录D（资料性附录）类器官STR鉴定....................................................11

附录E（资料性附录）成瘤性评价-人胃肠癌类器官皮下成瘤实验.............................12

参考文献.............................................................................13

I

DB36/T2203—2025

前  言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起

草。

本文件由江西省卫生健康委员会提出。

本文件由江西省卫生健康标准化技术委员会（JX/TC037）归口。

本文件起草单位：南昌大学、南昌大学第一附属医院、广州国家实验室、中国科学院动物研究所、

中国计量科学研究院、广州华医再生科技有限公司、南昌大学第二附属医院、南昌市第二人民医院、南

昌市第三人民医院、南昌大学附属康复医院、江西省肿瘤医院、宜春市人民医院、上饶市人民医院、赣

南医科大学第一附属医院。

本文件主要起草人：陈晔光、方芝、熊建萍、王亚龙、洪帆、谭榕辉、黄霞、邓军、李叶华、赵

冰、赵同标、傅博强、田军、刘安文、曹家庆、余勇、万德惠、王农荣、宋荣峰、陈金平、饶敏超、王

祥财。

II

DB36/T2203—2025

人胃肠癌类器官药物敏感性测试管理规范

1范围

本文件规定了人胃肠癌患者来源的肿瘤类器官伦理要求、类器官要求、类器官管理要求和类器官药

敏测试要求。

本文件适用于人胃肠癌患者来源的肿瘤类器官药敏测试的操作规范、流程管理和使用指引。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T37864生物样本库质量和能力通用要求

WS213丙型肝炎诊断

WS293艾滋病和艾滋病病毒感染诊断

WS299乙型病毒性肝炎诊断标准

中华人民共和国药典（2025年版）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

类器官organoids

由干细胞或前体细胞体外培养形成的，包含组织器官特异性的多种细胞，能自我更新，具有特定器

官关键结构和功能特性的三维（3D）细胞培养物。

3.2

肿瘤类器官tumoroids

由患者的肿瘤组织或其他含肿瘤细胞的样本中提取的肿瘤细胞经体外培养而成的，可以在体外扩增

并重现原始肿瘤病理形态、遗传特征和治疗反应特征的类器官。

3.3

人胃癌类器官humangastriccancerorganoids

由病理诊断为胃癌患者的胃肿瘤细胞在基质胶中培养而成的具有胃癌特征的肿瘤类器官。

3.4

人肠癌类器官humanintestinalcancerorganoids

由病理诊断为肠癌患者的肠肿瘤细胞在基质胶中培养而成的具有肠癌特征的肿瘤类器官。

3.5

类器官传代organoidpassage

体外培养的类器官经过物理、化学或生物等处理方法，将原有类器官分成更小细胞簇甚至是单细胞，

重新接种到与原培养条件相同的新培养体系中进行体外培养的过程。

3.6

1

DB36/T2203—2025

类器官冻存organoidcryopreservation

类器官暂时脱离生长状态并保持其细胞组成、基因表达特征及功能特性的低温冷冻过程。

3.7

类器官复苏organoidthawing

37℃下冻存的类器官重新获得生长和代谢活力的过程。

3.8

类器官药物敏感性测试organoiddrugsensitivitytesting

将多种药物组合或单独的药物作用于类器官进行药效、毒性评估的过程，简称类器官药敏测试。

3.9

基因变异genevariation

基因组DNA序列在结构或组成上发生的改变，包括但不限于碱基替换、插入、缺失、拷贝数变异、

结构变异（如易位、倒位、融合）等，可发生于单个核苷酸位点、外显子、基因片段或染色体水平，并

可能影响基因功能或表达。

3.10

基因检测genetictesting

利用血液、体液、组织或细胞等生物样本，对核酸（DNA或RNA）及其相关遗传信息进行提取、测定

与分析，以识别序列变异、结构异常、拷贝数变化、甲基化变化或其他遗传/基因组特征的实验室技术。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ARID1A：富AT相互作用结构域1A（AT-RichInteractionDomain1A）

APC：腺瘤性息肉病相关基因（AdenomatousPolyposisColi）

ATP：腺苷三磷酸（AdenosineTriphosphate）

BRAF：B-Raf原癌基因（B-RafProto-Oncogene）

CA19-9：糖抗原19-9（CarbohydrateAntigen19-9）

CEA：癌胚抗原（CarcinoembryonicAntigen）

CDH1：钙黏蛋白1（Cadherin1）

CDX2：胰/结肠特异性转录因子（CaudalTypeHomeobox2）

CK7：上皮细胞角蛋白7（Cytokeratin7）

CK20：上皮细胞角蛋白20（Cytokeratin20）

CV：类器官的相对活力（CellViability）

DAB：二氨基联苯胺（Diaminobenzidine）

DMSO：二甲基亚砜（DimethylSulfoxide）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

ERBB2：人表皮生长因子受体2（Erb-B2ReceptorTyrosineKinase2）

HBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）

HCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）

HIV：人免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）

H&E：苏木精-伊红（HematoxylinandEosin）

Ki67：增殖相关核抗原（Ki67Antigen）

KRAS：Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物（KirstenRatSarcomaViralOncogeneHomolog）

MTA：材料转移协议（MaterialTransferAgreement）

2

DB36/T2203—2025

MUC6：黏蛋白6（Mucin6）

NRAS：神经母细胞瘤癌基因同源物（NeuroblastomaRASViralOncogeneHomolog）

NTRK1：神经营养酪氨酸激酶受体1（NeurotrophicReceptorTyrosineKinase1）

PBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSaline）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PIK3CA：磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚单位α（Phosphatidylinositol-4,5-Bisphosphate

3-KinaseCatalyticSubunitAlpha）

RHOA：RAS同源蛋白A（RasHomologFamilyMemberA）

RNF43：环指蛋白43（RingFingerProtein43）

SMAD4：SMAD家族成员4（SMADFamilyMember4）

STR：短串联重复序列（ShortTandemRepeat）

TP53：肿瘤抑制蛋白p53（TumorProteinp53）

5伦理要求

5.1人胃癌和人肠癌类器官的伦理审查要求依照国家卫生健康行政部门、教育部门、科技部门、国家

中医药管理部门发布的《涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法》（2023年版）进行审查。

5.2应与类器官原组织供者签署书面的合法有效的知情同意通知书，包括但不限于：合适条件下潜在

研究及治疗的应用、研究成果潜在的商业应用及其他问题所适用的内容。应对类器官原组织供者个人信

息进行隐私保护。

5.3人胃癌和肠癌组织的采集、人胃癌和肠癌类器官的生产、以及利用人胃癌和肠癌类器官开展科学

研究、产品开发、临床药敏测试等相关活动均需经过伦理审查委员会审查通过,并应参照《人源类器官

研究伦理指引》中的有关条款执行。

5.4开展胃癌、肠癌类器官研究的人员应具备相应专业能力，并应接受科技伦理、数据保护、生物安

全等培训；机构应具备相应设施、资源管理、数据安全保障措施，符合《人源类器官研究伦理指引》规

定。

5.5对于类器官相关的生物样本、衍生资源、数据集及其共享、国际合作等，应依据国家法律法规、

科技伦理政策及《人源类器官研究伦理指引》的要求进行管理与报告。

6类器官要求

6.1形态学特征

人胃肠癌类器官在光学显微镜下应边缘清晰、透亮，其形态学特征可呈现出松散型、囊泡型、致密

型或混合型等多种形态特征，部分肠癌类器官可呈现出出芽的形态学特征。可按照附录A检测类器官的

形态学特征。

6.2组织病理学特征

6.2.1类器官中的细胞应与原肿瘤组织中肿瘤细胞的异型性特征保持一致，如核深染、异常核分裂象、

核质比失调等。

6.2.2应对类器官进行相关标志物检测，检测结果应与原肿瘤组织结果基本一致，一致性不低于50%。

人胃癌类器官检测的标志物包括但不限于CDX2、CEA、CA19-9和Ki67，人肠癌类器官检测的标志物包

括但不限于CDX2、CK20、CK7和Ki67。

6.2.3可按照附录B检测类器官的组织病理学特征。

3

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6.3基因遗传特征

6.3.1应对类器官进行基因变异检测，检测结果应与同一区域的原肿瘤组织的基因变异结果过滤SNP

后一致性大于80%，应注意不同肿瘤区域肿瘤组织的突变特征存在空间异质性差异。人胃癌类器官和人

肠癌类器官的肿瘤相关热点基因检测包括但不限于TP53、KRAS、NRAS、ERBB2、BRAF、NTRK1、ARID1A、

MUC6、RHOA、RNF43、APC、SMAD4、CDH1和PIK3CA。

6.3.2可按照附录C检测类器官的基因变异。

6.3.3体外培养的类器官，进行STR检测及分型鉴定，应与供体STR一致。

6.3.4可按照附录D对类器官的STR进行鉴定。

6.4体外生长特征

6.4.1初次体外培养成的人胃肠癌类器官应能在体外维持培养2个月或类器官传代3代以上，且数量

应保持稳定。

6.4.2类器官传代后应能重新生长成新的类器官。新生长的类器官与传代前的类器官在形态学特征、

组织病理学特征和遗传特征上均应基本保持一致。

6.5存活率

6.5.1类器官复苏后存活率应不低于50%，且应进行至少三次独立实验验证存活率的一致性。

6.5.2可按照附录A检测类器官的存活率。

6.6微生物

6.6.1支原体、细菌、真菌、HIV、HBV、HCV及其他外源病毒因子等应为阴性。

6.6.2支原体按照《中华人民共和国药典》（2025年版）中“3301支原体检查法”检测。

6.6.3细菌及真菌按照《中华人民共和国药典》（2025年版）中“1101无菌检查法”检测。

6.6.4HIV按照WS293核酸法检测。

6.6.5HBV按照WS299核酸法检测。

6.6.6HCV按照WS213核酸法检验。

6.6.7外源病毒因子按照《中华人民共和国药典》（2025年版）中“3302外源病毒因子检查法”检测。

6.7成瘤性评价

6.7.1当人胃肠癌类器官通过体内异种移植的方式接种于免疫缺陷小鼠后，应能形成肿瘤，而癌旁、

正常组织来源的类器官应无法形成肿瘤。肿瘤与原始类器官来源组织的组织学特征及结构应相同。

6.7.2可按照附录E检测类器官的成瘤性。

7类器官管理要求

7.1标识

7.1.1应建立培养、验证、记录和维护等相关人胃肠癌类器官的规程。

7.1.2应建立人胃肠癌类器官的唯一标识。此唯一标识应包括类器官名称、类器官的来源、类器官在

机构中的编号、类器官获取或构建时间、供者相关的信息。

7.1.3应记录人胃肠癌类器官培养信息，包括但不限于培养时间、培养人员、培养方法、类器官名称

等。

7.2冻存

7.2.1应建立人胃肠癌类器官冻存规范，类器官规范应包括：冻存前准备、消化处理、冻存分装、记

录标识。

7.2.2类器官冻存过程应控制细胞密度（8×104个细胞/mL~1×105个细胞/mL）、冻存前的细胞活率（≥

90%）等，并选择使用适当的冻存保护剂，并对冻存过程进行记录，包括但不限于：类器官名称、批号、

代数、冻存日期、冻存人员、类器官数量等，并对冻存后的类器官复苏活力进行评估。

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DB36/T2203—2025

7.2.3应参照GB/T37864要求对人胃肠癌类器官进行储存。

7.2.4应对每批储存的人胃肠癌类器官相应的信息进行记录，记录内容包括但不限于类器官名称、批

号、储存日期、储存位置和存储数量。

7.3运输

7.3.1供应方应制定人胃肠癌类器官运输规程并实施。运输规程包括：运输前准备、包装要求、运输

过程控制、接收与检查。

7.3.2应参照GB/T37864要求进行运输，并根据人胃肠癌类器官的使用需求选择适当的运输方式和运

输条件。

7.3.3人胃肠癌类器官应以冻存状态或以生长状态的方式运输，根据规程控制运输条件包括但不限于：

温度、防污染措施、适当的包装等，并告知接收方相关信息。

7.3.4人胃肠癌类器官的运输应记录以下方面，包括但不限于：运输方式和条件、运输路线、联系方

式和收件人信息等。

7.3.5应在必要时检查运输中的包裹，并在可能的情况下添加新的冷冻源（如干冰和液氮）以保持适

宜的运输温度。

7.4使用说明

7.4.1应按照GB/T37864要求进行人胃肠癌类器官分发管理。

7.4.2使用前，应由人胃肠癌类器官接收方提交申请，并经供应方根据其正式程序进行审批。

7.4.3供应方与用户签署MTA或同等条款和条件文件。

7.4.4供应方应向用户提供相关信息包括但不限于：可追溯的批号、质量证明、培养方法、冻存方法、

冻存日期、建库日期、微生物检测数据、匿名化的类器官供者的知情同意书副本等。

8类器官药敏测试

8.1药物板

8.1.1应建立人胃肠癌类器官药物板的管理规范，包括但不限于：药物配制时间、药物配制人员、取

用记录和药物板维护等相关类器官药物筛选的规程。

8.1.2应建立人胃肠癌类器官药物板的详细标识，此标识表包括但不限于药物名称、药物位置、药物

浓度范围、药物体积、配制日期、有效期记录、配制人员等。

8.1.3应结合药物种类、药物溶剂、药物的有效储存条件等选择合适的药物储存条件，存储条件控制

内容包括但不限于：存储温度、防污染措施、封膜处理等，并记录相应储存条件下药物的有效期、储存

日期、储存位置等信息。且应对每批储存的药物板进行记录，记录内容包括但不限于：药物板名称、药

物数目、药物批号等。

8.1.4供应方应制定人胃肠癌类器官药物板的运输规程并实施。根据药物板的使用需求选择适当的运

输方式和运输条件，必要时检查运输中的包裹，并在可能的情况下添加新的冷冻源以保持适宜的运输温

度。且应记录药物板运输记录，包括但不限于：运输方式和条件、运输路线、联系方式和收件人信息等。

8.2类器官

用于临床药敏测试的人胃肠癌类器官应符合第6章的技术要求，且类器官代数应不超过20。

8.3操作流程

8.3.1仪器和设备准备

应提前准备好微孔板（通量至少达384）、移液工作站/自动分液器（精度应控制在微升及以上）、

自动微量加样器（精度应控制在纳升及以上）、化学发光细胞活性分析系统（通量至少达384，且能检

测化学发光）等仪器设备。

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8.3.2试剂准备

应提前准备好基质胶、人胃肠癌类器官培养基、药物板、ATP活性检测试剂、星形孢菌素、蛋白酶

抑制剂Mg132。

8.3.3检测步骤

8.3.3.1收集数目合适且生长状态良好的人胃肠癌类器官，用PBS洗去基质胶后，离心收集类器官。

8.3.3.2采用机械或酶解法消化人胃肠癌类器官成单细胞，用预混5%~100%基质胶的人胃肠癌类器官

培养基重悬细胞或用基质胶预先包被板底后铺入单细胞悬液。使用自动分液器将单细胞混液按合适数目

进行铺板，孔间细胞密度要求一致。

8.3.3.3根据药物的有效抑制浓度范围合理设计药物工作剂量梯度，并预设好药物板上各药物的位置

及浓度分布孔位。按药物说明书选择合适溶剂溶解药物配成合适的储液浓度，将储液药物依次稀释到相

应的工作剂量浓度并移至对应的药物板空位，且应注意设置溶剂对照，避免溶剂本身的细胞毒性混淆。

8.3.4药物处理

8.3.4.1提前设置好药物处理分组，阴性对照组、药物处理组和阳性对照组。

8.3.4.2提前预设好人胃肠癌类器官单细胞板上药物处理的组别、浓度和加样位置。

8.3.4.3在药物处理前后观察且记录类器官的生长特征，用微量加样器将药物板上对应的药液按相应

浓度移至上述细胞板位置。

8.3.5细胞活性检测

8.3.5.1应按ATP化学发光检测试剂盒说明书对细胞活性进行检测。可采用刃天青等荧光活力分析探

针作为ATP法的补充性检测策略。

8.3.5.2使用化学发光细胞活性检测仪对加入细胞活性ATP检测试剂的细胞进行检测，得到各实验药

物组细胞化学发光数值并分析上述各组的CV。

8.3.6结果分析与判读

8.3.6.1药物溶剂和空白组为阴性对照组，药物处理组为各浓度梯度的药物，蛋白酶抑制剂Mg132（有

效浓度为4M~10M）或星形孢菌素（有效浓度为0.2M~2M）处理组为阳性对照组。阴性对照组细胞

活性应最强。

8.3.6.2类器官细胞活性按照公式（1）进行计算。

CV=（CV药物-CV空白/CV对照-CV空白）×100%......................（1）

式中：

CV—类器官细胞相对活力；

CV药物—药物处理组类器官细胞活力；

CV对照—阴性对照组类器官细胞活力；

CV空白—板孔空白组类器官细胞活力，用于消除背景噪音影响。

8.3.6.3每孔信号值需扣除空白对照孔（无细胞、只含培养基及试剂）的平均值，以消除背景信号干

扰。如果孔间信号的相对标准偏差>15%，则该孔数据需重复检测或剔除，异常值可通过Grubbs检验或

箱线图方法判定并剔除。

8.3.7计算与分析

按上式计算各药物浓度剂量下的细胞活力，保证至少三次独立实验，结合药物浓度，绘制剂量反应

曲线，得出IC50。

8.3.8结果判读

类器官药物反应结果与临床疗效的一致性参考意义结合临床实际应用情况判读。

8.4流程管理

8.4.1应记录人胃肠癌类器官药物筛选信息，包括但不限于类器官名称、类器官代数、类器官的数目、

测试药物名称、测试药物数目、药物筛选人员等。

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DB36/T2203—2025

8.4.2应建立人胃肠癌类器官药敏测试实验规范，应按照《肿瘤类器官诊治平台的质控标准中国专家

共识（2022年版）》和《类器官药物敏感性测试指导肿瘤精准治疗临床应用专家共识（2022年版）》

（以下简称“共识”）要求进行药敏测试，包括但不限于：患者知情同意授权、入组患者人群、药物

测试选择、药物测试结果判读、患者个性化治疗方案选择等。

8.4.3应按照共识要求记录人胃肠癌类器官药敏实验，记录内容包括但不限于：人胃肠癌组织原代处

理图片、类器官培养成功图片、类器官的数目/直径变化、用药前后类器官的形态学变化、药效剂量变

化曲线、细胞活力量化结果统计等。

8.4.4应按照共识要求在具有测试资质的医疗机构或第三方检测单位进行药敏实验，测试结束后应对

实验结果出具测试报告，报告内容包括但不限于肿瘤生长抑制率、半数抑制浓度、二分类法或三分类法

区分出药物抑制效果等。

8.4.5由于胃肠癌的复杂性，应按照共识要求在临床诊疗过程中进行多学科讨论，依据患者具体病情、

病理结果及患者原始癌组织的基因测试结果综合判断胃癌或肠癌类器官药敏报告，为患者制定安全、潜

在获益的单药或联合用药策略。

7

DB36/T2203—2025

附录A

（资料性附录）

类器官存活率检测-钙黄绿素AM染色法

A.1仪器和设备

倒置荧光显微镜、光学显微镜、细胞培养箱。

A.2试剂

A.2.1DMSO。

A.2.2PBS（pH为7.4）。

A.2.3储存液的配制（钙黄绿素AM溶液）：用细胞级别DMSO制备2mmol/L的钙黄绿AM素溶液。

A.2.4除特别说明外，所用试剂均为分析纯，检测用水均为去离子水。

A.3检测步骤

A.3.1类器官总数量计数

体外三维培养类器官，可使用光学显微镜观察，光学显微镜的倍数参照类器官的直径大小选择，可

使用40或是100的光学显微镜记录类器官的形态特征和状态，通过肉眼观察来确定类器官是否存活。

A.3.2活类器官数量计数

实验时，取出已经配置好的钙黄绿素AM储存液，加入钙黄绿素AM溶液到培养基中至终浓度为0.2

mol/L。随后在37℃条件下孵育60min。到达时间后，用PBS缓慢清洗掉带有钙黄绿素AM的培养基，

加入新鲜培养基。用490nm激发波长，515nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察类器官并断层扫描

拍照。活类器官在荧光显微镜下显示为绿色且边缘清晰。对直径≥20m的活类器官计数。

A.4类器官存活率计算

符合6.1类器官形态要求，对直径≥20μm的类器官计数。类器官存活率按照公式（A.1）进行计

算。

X=（N活/N总）×100%.................................（A.1）

式中：

X—类器官存活率；

N活—活类器官数量；

N总—总类器官数量。

A.5计算与分析

按照A.3步骤再重复两次，计算三次活类器官比率结果的平均值，记为类器官平均存活率。

A.6精密度

在重复性条件下获得的三次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 

8

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附录B

（资料性附录）

类器官组织病理检测-石蜡切片和冰冻切片法

B.1仪器和设备

石蜡包埋仪、石蜡切片机、组织摊片机、冰冻切片机、-80℃冰箱、荧光显微镜、光学显微镜。

B.2试剂

B.2.1石蜡切片制备试剂：按照相应要求配制石蜡包埋需要试剂，包括固定液、乙醇脱水液、石蜡、脱

蜡液、复水液、乙醇、二甲苯、中性树脂。

B.2.2H&E染色试剂：苏木精、伊红。

B.2.3冰冻切片样本制备试剂：按照相应要求配制冰冻切片样本需要试剂，包括固定液、蔗糖脱水液、

OCT、TritonX-100溶液、抗荧光淬灭剂。

B.2.4除特别说明外，所用试剂均为分析纯，检测用水均为去离子水。

B.3检测步骤

B.3.1样品准备和固定

取体外培养的类器官，用移液器吸出类器官和基质胶混合物，转移至15mL离心管内，离心弃上清，

用4%多聚甲醛固定类器官15min~30min。

B.3.2类器官石蜡切片制作

按照石蜡切片制作方法对类器官样品进行固定，脱水，透明后浸入石蜡中，用石蜡包埋仪器进行包

埋。用石蜡切片机切成标准厚度，制成石蜡切片。

B.3.3类器官冰冻切片制作

按照冰冻切片制作方法对类器官样品进行固定，脱水后，用预冷的OCT包埋类器官，并用冰冻切片

机切成标准厚度，制成冰冻切片。

B.3.4H&E染色

将类器官石蜡切片进行脱蜡，复水，用苏木精染色，分化后冲水。接着用伊红染色，乙醇脱水，二

甲苯透明，中性树脂封片。

B.3.5免疫荧光染色

将类器官冰冻切片直接进行用PBS清洗，抗原修复后，加入0.1%TritonX-100透膜，加封闭液进行

封闭。加一抗孵育，PBS清洗。加对应荧光二抗，PBS清洗。用DAPI复染细胞核，加抗荧光淬灭剂封片。

完整的类器官可以直接在孔板中按上述流程进行操作染色，石蜡切片需进行脱蜡、复水后再按上述流程

操作。

B.3.6免疫组化染色

将类器官石蜡切片进行脱蜡，复水，抗原修复，加封闭液进行封闭。加一抗孵育，PBS清洗。加对

应二抗，PBS清洗。用DAB进行显色，加水终止显色反应。苏木精衬染，盐酸透明后冲水。乙醇脱水，

二甲苯透明，中性树脂封片。

B.4结果分析

得到的检测结果由具有病理诊断资质的人员分析和判定，并与原肿瘤组织组织病理检测结果具有一

致性。

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DB36/T2203—2025

附录C

（资料性附录）

类器官基因变异检测

C.1仪器和设备

离心机、-80℃冰箱、超微量分光光度计。

C.2试剂

按相应要求准备的细胞DNA抽提试剂盒。

C.3样品保存

样品制备好后，于-80℃以下保存。

C.4检测步骤

C.4.1样品制备

将类器官在基质胶中培养至稳定生长状态，用移液器吹打基质胶，至基质胶破碎后，混合液收集于

离心管中，离心收集类器官，弃上清。

C.4.2DNA提取

按细胞DNA抽提试剂盒说明书对类器官基因组DNA进行提取，提取后的DNA使用超微量分光光度计

进行浓度和质量检测。

C.4.3测序

将类器官DNA样本和原肿瘤组织送至具有临床基因检测资质的机构进行一代测序或二代测序检测，

或采用ARMS法、ddPCR法等对基因位点进行检测。

C.5结果分析

分析基因变异位点，比较类器官测序和原肿瘤组织测序结果的一致性。

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附录D

（资料性附录）

类器官STR鉴定

D.1仪器和设备

离心机、PCR仪、毛细管电泳仪、微量紫外分光光度计、-80℃冰箱。

D.2试剂

细胞DNA抽提试剂盒、STR细胞鉴定试剂盒。

D.3样品保存

样品制备好后，于-80℃以下保存。

D.4检测步骤

D.4.1样品制备

将类器官在基质胶中培养至稳定生长状态，用移液器吹打基质胶，至基质胶破碎后，混合液收集于

离心管中，离心收集类器官，弃上清。

D.4.2DNA提取

D.4.2.1按细胞DNA抽提试剂盒说明书对类器官和原肿瘤组织基因组DNA进行提取；

D.4.2.2紫外分光光度计检测提取后的DNA的吸光度A260/A280的比值在1.8~2.0之间；

D.4.2.3DNA样本要求：DNA体积≥20L，浓度≥50ng/L。

D.4.3PCR扩增

D.4.3.1按照标准PCR扩增方法对STR位点进行扩增，也可以按照经过质检合格的商业化试剂盒说明书

进行。

D.4.3.2设置阴性对照组、样本检测组和阳性对照组。阴性对照组采用无菌水为模板进行PCR扩增，样

本检测组以类器官和原肿瘤组织样本提取的DNA为模板进行PCR扩增，阳性对照组采用DNA模板进行扩

增。

D.4.3.3采用琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物、阴性对照组和阳性对照组。阴性对照组无目的条带，

阳性对照组有清晰的目的条带。

D.4.4STR基因分型检测

使用毛细管电泳基因分析仪对PCR扩增产物进行检测，并得到STR遗传图谱数据。阳性对照组有清

晰的目的峰形。应检测至少15个STR基因位点，且类器官STR图谱与原肿瘤组织STR图谱在≥80%的

STR位点上应保持一致。

D.5结果分析

D.5.1当STR位点的等位基因含有相同重复次数时，图谱仅出现1个等位基因峰；当含有不同重复次数

时，图谱会出现2个等位基因峰。且当阴性对照组无等位基因峰出现，阳性对照组检测结果与其标准基

因分型数据一致时视为有效检测。

D.5.2在检测有效的前提下，若受检样本STR位点出现2个以上的等位基因峰，经过重复实验排除引物

结合区突变等干扰因素后，判定受检样本存在交叉污染。

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附录E

(资料性附录)

成瘤性评价-人胃肠癌类器官皮下成瘤实验

E.1仪器和设备

接种针、游标卡尺、体重秤、4℃冰箱。

E.2试剂

基质胶。

E.3实验动物

NSG（NODscidgamma）或NCG（NODCRISPRPrkdcIl2rgamma）免疫缺陷小鼠，4周~6周鼠龄。

E.4检测步骤

E.4.1样本制备

收集生长状态良好且数量合适的人胃肠癌类器官，并通过50%基质胶进行重悬，置于4℃备用。

E.4.2皮下移植

用接种针将人胃肠癌类器官注射到周龄为4周~6周的免疫缺陷小鼠皮下，每个类器官样本需要保

证至少两个生物学重复，并在注射后每7days观察、记录并测量小鼠皮下肿瘤的生长情况。

E.4.3皮下肿瘤收集

对皮下肿瘤进行收集，记录并拍照。

E.5结果分析

E.5.1皮下肿瘤大小计算

E.5.1.1皮下肿瘤体积计算

皮下肿瘤体积按照公式（E.1）进行计算。

V=1/2×L×W2..................................（E.1）

式中：

V—肿瘤体积，单位为cm3；

L—肿瘤最长径，肿块最长两点的距离；

W—肿瘤最短径，肿块最短两点的距离。

E.5.1.2计算与分析

计算多次肿瘤大小结果的平均值，记为肿块的大小。

E.5.2皮下肿瘤组织病理学检测

按照附录B检测。

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参 考 文 献

[1]科技教育司,国家卫生健康委员会科技教育司.涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法[Z].

2023.

[2]科学技术部等四部门.科技伦理审查办法（试行）[Z].国科发监〔2023〕167号,2023.

[3]国家科技伦理委员会生命科学伦理分委员会.人源类器官研究伦理指引[S].北京:科学技术部,

2025.

[4]国家市场监督管理总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用

要求[S].北京:中国标准出版社,2019.

[5]国家市场监督管理总局,中国国家标准化管理委员会.GB/T42466-2023生物样本库多能干细胞管理

技术规范[S].北京:中国标准出版社,2023.

[6]中国细胞生物学学会.T/CSCB0001-2020干细胞通用要求[S].北京,2020.

[7]中国细胞生物学学会.T/CSCB0005-2022人肠道类器官[S].北京,2022.

[8]中国细胞生物学学会.T/CSCB0006-2022人肠癌类器官[S].北京,2022.

[9]中国细胞生物学学会.T/CSCB0022-2024人胃癌类器官[S].北京,2024.

[10]中国细胞生物学学会.T/CSCB0023-2024人胃类器官[S].北京,2024.

[11]中国细胞生物学学会.T/CSCB0009-2022人干细胞研究伦理审查技术规范[S].北京,2022.

[12]中国临床肿瘤学会指南工作委员会.中国