3.2.2基因工程的基本操作程序第二课时课件高二下学期生物人教版选择性必修3

3.2.2基因工程的基本操作程序第三章

基因工程教学目标1.简述构建基因表达载体的意义2.说出基因表达载体的结构组成及各个元件的作用3.辨析启动子和起始密码子、终止子和终止密码子4.阐明基因表达载体的构建过程1.基因表达载体包括哪些成分？构建载体的目的是？2.什么是是启动子和终止子？3.构建表达载体的过程是？（1.2）4.将目的基因导入受体细胞的方法有哪些？（植物动物微生物）细胞5.什么是

转化？农杆菌特点？转化法的过程是？6.目的基因检测与鉴定的方法有哪些？课本80----82021.基因表达载体构建的目的：①让目的基因在受体细胞中

，并且可以遗传给下一代。②同时使目的基因能够

和

。稳定存在表达发挥作用呆得住能表达：转录、翻译1.构建载体的目的是？基因表达载体包括哪些成分？

不能，游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因。为什么不能将目的基因直接导入受体细胞？021.基因表达载体包括哪些成分？位置：位于基因的上游；作用：RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动转录；位置：位于基因的下游；作用：终止转录；便于重组DNA分子的筛选；能够完成自主复制；ABCDE标记基因，复制原点，启动子，终止子，目的基因，限制酶的切割位点等目的基因的插入位点02

:

:终止子启动子标记基因目的基因能够完成自主复制；1.基因表达载体包括哪些成分？各部分的作用

:主要是指编码特定蛋白质的基因；位置：位于基因的上游；作用：RNA聚合酶识别并结合的位点，驱动转录；位置：位于基因的下游；作用：终止转录；

:便于重组DNA分子的筛选；启动子终止子①启动子：本质：一段有特殊序列结构的________位置：位于基因的

；作用：

酶识别并结合的部位，能驱动基因转录出mRNA；②终止子：本质：一段有特殊序列结构的______；位置：位于基因的

；作用：

；上游RNA聚合下游终止转录2.什么是启动子和终止子？DNA片段；DNA片段目的基因插入位点是随意的吗？应注意什么？提示：

随意的；目的基因的表达需要

与

的调控，所以目的基因应插入到启动子和终止子

的部位。不是启动子终止子之间02①切

用一定的

切割载体(质粒)，使它出现

个切口。用

限制酶或能产生

末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。②连

利用

将含目的基因的DNA片段拼接到载体的切口处，这样就形成了

（即：

）。限制酶同种相同DNA连接酶一一个重组DNA分子基因表达载体3..构建表达载体的过程是？（1.2）为什么一般用不同酶进行切割防止质粒、目的基因会发生自身环化连接或发生反向连接提示：

；弊端：①

；

②

；

限制酶的选择原则相同的黏性末端，可以相互连接！只使用EcoRⅠ分别切割质粒和外源DNA，能否构建基因表达载体？能质粒、目的基因会发生自身环化连接质粒与目的基因会发生反向连接课外延伸重难点：限制酶的选择原则

①切取含目的基因DNA片段时:

；②切割质粒时:至少保留一个完整的

,便于筛选；

除此之外还需保留

、

、

。③确保目的基因和载体上有

黏性末端(补充说明：平末端也可以，但连接平末端效率低）。能切下目的基因且不破坏目的基因相同标记基因复制原点启动子终止子BD常用方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞Ga2+处理法（感受态细胞法）农杆菌转化法花粉管通道法显微注射法4.将目的基因导入受体细胞的方法有哪些？将目的基因导入受体细胞·植物细胞1.花粉管通道法：(我国科学家独创)①方法一：用微量注射器将含目的基因的

DNA溶液直接注入

中。②方法二：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，

将DNA溶液滴加在花柱切面上，

使目的基因借助

进入胚囊。子房花粉管通道受体细胞：受精卵5.什么是

转化？农杆菌特点？转化法的过程是？指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内表达

和维持稳定的过程。转化：

农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞内，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。农杆菌的特点：5.农杆菌转化法的过程是？①②③④⑤两次拼接①第一次拼接：将

拼接到

上；②第二次拼接：将

拼接到

上。将目的基因导入受体细胞·植物细胞农杆菌转化法中进行了两次拼接，有什么区别？思考目的基因Ti质粒的T－DNA被插入目的基因的T－DNA受体细胞染色体的DNA两次导入①第一次导入：将

导入到

上；②第二次导入（非人工操作）：将

导入到

上。将目的基因导入受体细胞·植物细胞农杆菌转化法中进行了两次导入，有什么区别？思考含目的基因的重组Ti质粒农杆菌含目的基因的T－DNA受体细胞将目的基因导入受体细胞·植物细胞2.农杆菌转化法：①方法一：可以将新鲜的从叶片上取下的圆形小片

，然后

，并

；②方法二：可以将

直接浸没在

中一段时间，然后培养植株并获得

，再进行

、

等；受体细胞：与农杆菌共培养筛选转化细胞再生成植株体细胞花序含有农杆菌的溶液种子筛选鉴定受体细胞：受精卵将目的基因导入受体细胞·动物细胞3.显微注射法：显微注射受精卵受体细胞：受精卵构建基因表达载体并提纯利用

将基因表达载体注入动物的

中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物将目的基因导入受体细胞·微生物细胞Ga2+处理法（感受态细胞法）：Ca2+的作用是什么？思考增加细菌细胞壁的通透性。感受态细胞有什么特点？思考细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。Ca2+感受态细胞吸收课堂小结植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法受体细胞转化过程项目种类花粉管通道法或农杆菌转化法显微注射法Ca2