微生物实验操作基本要求专家讲座

微生物试验操作基本要求无菌操作第1页无菌指在环境中一切有生命活动微生物营养细胞及其芽孢或孢子都不存在状态。无菌操作在微生物分离、接种、培养操作过程中预防培养物被其它微生物污染操作技术称为无菌操作技术。无菌操作创造无菌培养环境预防在操作过程中其它微生物侵入第2页

无菌环境

一无菌器具、培养基

二无菌操作技术

三基本规则

四一、无菌操作技术第3页

无菌环境一1、无菌室2、超净工作台3、生物安全柜4、火焰周围第4页1、无菌室

无菌环境一标准无菌室要求：房间设置（外面有缓冲室）、空气过滤、墙面、墙角、微生物操作相关设备、紫外灯等。第5页

无菌环境一如条件有限，可在微生物试验室内专辟一个小房间作为无菌室。能够用板材和玻璃建造，面积4-5平方米即可。板材和玻璃隔出无菌室第6页

无菌环境一2、超净工作台超净工作台是一个提供局部无尘无菌工作环境垂直单向流型空气净化设备。超净工作台第7页3、生物安全柜

无菌环境一生物安全柜外形与超净台类似，也提供局部无尘无菌工作环境。但它设置了风槽，气流不会吹向使用者，能够有效保护使用者。第8页一

无菌环境4、火焰周围通常使用酒精灯、煤气灯，其火焰周围是无菌区域（直径10cm左右）。首先，利用高温杀死细菌，而后利用酒精燃烧时向上形成单向气流形成一个无菌区域。火焰周围是无菌区域第9页无菌器具、培养基

二1、玻璃、金属等器具干热灭菌法2、玻璃、金属、含水物品高压蒸汽灭菌法3、金属、玻璃器具火焰灭菌法4、液体或水溶性物质过滤除菌法第10页1、玻璃、金属等器具--干热灭菌法设备：电烘箱用途：用于玻璃器皿、金属器具等耐热物品烤干和灭菌。条件：160-165℃，灭菌1-2小时。

第11页2、玻璃、金属、含水物品等--高压蒸汽灭菌法设备：高压蒸汽灭菌锅用途：培养基、生理盐水、废弃物、采样器、纱布、衣物灭菌。条件：121℃水蒸气20~30分钟

培养基普通使用高压蒸汽灭菌法第12页3、一些金属、玻璃器具--火焰灭菌法即在火焰外焰上灼烧进行灭菌。用途：接种环、接种针；涂布器；试管管口、锥形瓶瓶口等灭菌。第13页4、液体或水溶性物质--过滤除菌法器具：细菌过滤器用途：不耐高温液体、水溶性物质除菌。细菌过滤器第14页无菌操作技术

三我们经过一定技术来确保目标微生物、培养基不被环境微生物污染，这些技术就是无菌操作技术。包含手部清洁消毒，用接种针、接种环、吸量管、涂布棒等工具进行各种操作等等。第15页1、手部清洁消毒洗手：手部有可见灰尘时、饭前、便后，用水和肥皂洗手；Handrub（揉手）：手部较清洁时，75%乙醇或者醇基消毒剂揉手。第16页动作：手掌-手背-指缝-手指-拇指-指尖-手腕第17页2、培养皿操作培养皿开合：单手打开和盖上皿盖，包含持皿法和皿加法两种。此操作用于制作培养基平板、接种等。持皿法第18页皿加法第19页3、接种环操作包含灼烧接种环、接种、划线等。第20页灼烧接种环先斜放外焰灼烧接种环，然后垂直放置后继续灼烧，再斜烧金属杆。现在红外接种环灭菌器使用也比较广泛。第21页用接种环进行接种第22页用接种环进行划线第23页4、涂布棒操作灼烧灭菌：能够沾酒精然后灼烧，灼烧范围要包含其杆部。第24页涂布：将菌液滴在培养基表面中央。右手拿涂布棒将菌液沿一条直线往返推进，然后沿一垂直线来回推进，平板边缘处可改变方向再涂几次。第25页5、试管操作单试管操作（注意左右手使用）第26页双试管操作5、试管操作无菌操作视频第27页操作前准备1

必须明确物品无菌区和非无菌区。工作人员需先戴帽子、口罩及洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。操作中2

夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。

进行无菌操作时，凡未经消毒手、臂，均不可直接接触无菌物品或超出无菌区取物。无菌物品管理3

无菌物品必须保留在无菌包或灭菌容器内，不可暴露在空气中过久。无菌物品和非无菌物应分开放置。无菌包一经打开即不能视为绝对无菌，应尽早使用。凡已取出无菌物品虽未使用也不可再放回无菌容器内。无菌操作标准第28页二、微生物试验室要求（1）试验室内要经常保持清洁卫生。（2）试验室应井然有序，不得存放试验室外及个人物品、仪器等。（3）测试用过废弃物要倒在固定箱筒内，并及时处理。（4）试验室应含有优良采光条件和照明设备。（5）试验室工作台面应保持水平和无渗漏，墙壁和地面应该光滑和轻易清洗。（6）试验室布局要合理，普通应有准备间和无菌室。第29页三、微生物试验安全要求（一）普通要求（1）进入试验室工作时，衣、帽、鞋必须穿戴整齐。（2）在进行高压、干燥、消毒等工作时，不得私自离开现场，认真观察温度、时间。蒸馏易挥发、易燃液体时，不准直接加热，应置水浴锅上进行。（3）禁止用口直接吸收药品和菌液，按无菌操作进行，如发生菌液溅出容器外时，应马上用有效消毒剂进行彻底消毒，安全处理后方可离开现场。（4）工作完成，两手用肥皂洗净，必要时可用新洁尔灭、过氧乙酸泡手，然后用水冲洗。工作服要经常清洗，保持整齐，必要时高压消毒。（5）试验完成及时清理现场和试验用具，对染菌物品进行消毒灭菌处理。（6）试验结束后认真检验水、电和正在使用得仪器设备，关好门窗，方可离去。第30页三、微生物试验安全要求（二）消防安全要求（1）注意预防供电线路老化造成漏电着火。（2）注意设备原因造成失火。设备超出正常使用寿命；设备出现故障未及时发觉和维修。——需过夜而无人看管恒温培养箱和干燥鼓风箱等。仪器操作不妥，温度设置过高，引发失火。——恒温干燥鼓风箱（3）预防未关电源引发失火。（4）预防操作不慎，使火源接触易燃物质，引发着火。（5）防止出现爆炸事故。——灭菌锅第31页三、微生物试验安全要求（三）药品使用安全擦拭显微镜镜头二甲苯——易挥发——吸入过多影响健康；芽孢染色孔雀石绿——致癌；惯用于显微镜镜头香柏油——剧毒；浓硫酸、苯酚等——腐蚀试验仪器，伤害皮肤，眼睛等。第32页三、微