北中大中医基础理论实验指导

中医基础学

实验指导

北京中医药大学中医基础系

二〇〇六年八月

目

录

实验一  动物实验基本操作技术实验二  麻黄汤对正常大鼠足跖汗液分泌的影响实验三  大鼠大肠推进模型的建立实验四  醋酸可的松小鼠“阳虚”模型抗寒抗疲劳实验实验五  三承气汤对小鼠小肠推进功能的影响实验六  学生自我设计实验

实验一

动物实验基本操作技术实验目的通过观看音像资料，掌握动物实验的基本操作技术，如实验动物的捉拿、麻醉、固定、取血、给药和处死方法。实验动物大鼠、小鼠。实验器材鼠笼、注射器、灌胃针、烧杯、剪刀、止血钳、玻璃毛细管。实验内容大鼠和小鼠的抓取、注射、灌胃及取血方法。实验步骤大鼠和小鼠的操作方法类似，故合并论述。1.

抓取：右手抓住鼠尾基部，将大鼠放在粗糙面上，右手戴手套，抓住整个身体并固定其头部以防咬伤。2.

腹腔注射：左手固定大鼠，腹部向上，头呈低位；右手持注射器，在大鼠下腹部白线稍右或左的位置，从下腹部朝头方向刺入皮肤，针头达皮下后，沿皮下推进3~5mm，使注射器针头与皮肤呈45°刺入腹腔。针头刺入腹腔后感觉阻力消失，保持针头不动的状态下，回抽针栓，见无回血或尿液，开始推注药液。一般注射量0.1~0.2ml/10g体重。3.

皮下注射：注射部位为大鼠背部或后肢外侧皮下，轻提注射部位皮肤，针头刺入皮下后推注药液。一般注射量不超过1ml/100g体重。4.

灌胃：右手提鼠尾，将大鼠放在粗糙面上，左手的拇指、中指分别放在大鼠的两腋下，食指放于颈部，固定，腹面朝上，右手持灌胃针管，将灌胃针放在门齿与臼齿间的缝隙，使灌胃针沿口腔部到达喉头，随大鼠吞咽送入食管。灌液量为1ml/100g体重。5.

断头取血：这是一种常用的简便取血法，适用于需要较大量的血液而又不需要保持动物生命的实验中。左手抓取动物，使其头部略向下倾，右手持剪刀剪掉其头部，立即将其颈部向下，提起动物并对准加有抗凝剂的容器，使鼠血滴入容器内。小鼠可采血0.8~1.0ml，大鼠可采血5~8ml。6.

摘眼球取血：此法既能采取较大量的血液，又可避免断头取血中因组织混入而导致溶血现象。将动物倒持，压迫眼球，使其突出充血后，用止血钳迅速摘除眼球，眼眶内很快即流出血液，将血液滴入加有抗凝剂的容器至不流为止。用毕动物即死亡，故只适用于一次性取血。一般可取得相当于动物体重4％~5%的血量。7.

眼眶后静脉丛取血：此法适用于需要中等量的血液而又要避免动物死亡的实验中。取内径为1.0~1.5mm的玻璃毛细管，临用前折断成1.0~1.5cm长的毛细管段，侵入1%的肝素溶液中，干燥备用。左手抓住大鼠两耳之间的颈背部皮肤以固定头部，轻轻向下压迫颈部两侧，引起头部静脉血液回流困难，使眼眶静脉丛充血，右手持毛细管，将其新折断段插入眼睑与眼球之间后再轻轻向眼底部方向移动，旋转毛细管以切开静脉丛，保持毛细管水平位，血液即流出，收入事先准备的容器中。取血后应立即拔出取血管，放松左手即可止血。小鼠、大鼠、豚鼠及家兔均可用此法取血。刺入深度小鼠为2~3mm，可采血0.2~0.3ml，大鼠为4~5mm，可采血0.4~0.6ml。实验中可根据需要，于数分钟后内在同一部位反复取血。8.

尾尖取血：此法适用于采取小量血样。取血前先沿鼠尾两侧由基部向尾尖部挤压，使尾尖部充血，然后剪去尾尖，血液即流出。9.

心脏取血：将动物仰卧固定在固定板上，左手食指在左侧第3－4肋间摸到心搏处，右手持注射器，于心尖搏动最明显处刺入心室，血液由于心脏跳动的力量而自动进入注射器。也可从上腹部刺入，穿过横膈膜刺入心室取血。此法要求操作者动作迅速、轻巧，针刺部位准确，抽吸时要缓慢而稳定，否则较大的真空会使心脏塌陷，或因暴力作用造成动物取血后死亡。如第一次没刺准，应抽出针头重刺。实验二

麻黄汤对正常大鼠足跖汗液分泌的影响

实验目的观测服用麻黄汤后汗液分泌的变化，初步了解汗法的实验运用及其发汗机理。实验动物大鼠，32只。实验器材灌胃针、大鼠固定器、放大镜。药品试剂麻黄汤水煎液（每30ml药液中含麻黄9g、桂枝6g、杏仁9g、甘草3g）；蒸馏水、无水乙醇、和田－高垣氏试剂。实验原理麻黄汤是发汗解表的代表方剂。本实验根据大鼠足跖部肉垫，上有汗腺分布，其汗液分泌的多少可利用碘与淀粉遇汗液即可产生紫色反应的机理，观测服用麻黄汤后汗液分泌的变化，从一个侧面了解汗法的实验运用及其发汗机理。实验步骤1.

取体重相近的成年大鼠，用棉签蘸取无水乙醇轻轻将足跖部污物擦洗干净，称重、编号、随机分为麻黄汤组和对照组。2.

分别灌服麻黄汤水煎液1ml/100g体重和蒸馏水（等体积）。3.

给药后将大鼠分别置入大鼠固定器内，仰卧固定，暴露双后肢（为避免后肢缩回固定器内，可用胶布条轻轻地将其双后肢固定在固定器上）。4.

给药30分钟时将各组大鼠足跖部原有的和由于固定时挣扎所致的汗液用干棉签轻轻拭干，于大鼠足跖部皮肤涂上和田－高垣氏试剂A液。5.

待充分干燥后，再薄薄涂上B液，然后肉眼或用放大镜仔细观察深紫色着色点（即汗点）出现的时间、颜色和数量，待汗点出现后，继续观察20分钟，每5～10分钟记录一次。6.

实验结束后将数据进行统计学处理，即可比较各组间的差异。注意事项1.

本实验宜在恒温条件下进行，室温控制在26±1℃。2.

实验前最好将大鼠进行鼠筒训练，固定大鼠的操作应轻柔，尽量避免因挣扎而汗出。3.

观察汗点出现的时间，在一次实验中应一致。4.

大鼠足跖部汗腺主要分布在足跖肉垫上，足跖关节也有分布，足掌心则缺乏。5.

为加强药效，在给药1小时后可加强一次。6.

本实验也可用小鼠进行。附：1.

和田－高垣氏试剂的配制方法：A液：取碘2g溶于100ml无水乙醇即成。B液：取可溶性淀粉50g、蓖麻油100ml，两者均匀混合而成。2.

大鼠临床等效量的计算60kg体重的人麻黄汤的使用量是麻黄9g、桂枝6g、杏仁9g、甘草3g=A把溶液溶在30ml水当中，人每千克体重的使用量容积是0.5ml/kg，大鼠是人用药量的20倍计算，则大鼠1ml/100g。第一种：可以按人和动物间体表面积折算的等效剂量比值来算，70KG的人与200g的大白鼠的这一比值是0.018，所以只需用人的给药剂量乘以0.018，在除以200，即可得大白鼠每克体重的给药量，再乘以大鼠的体重，即可得每只大鼠的给药量。或者也可以按照人与各种动物之间的用药剂量比值换算，人（60kg)与大鼠(200g)的这一值为0.16，人的剂量乘以这一值，再除以200，即可得大鼠每克体重的给药量。第二种：人与动物对同一药物的耐受性是相差很大的。一般说来，动物的耐受性要比人大，也就是单位体重的用药理动物比人要大。可按下列比例换算：人用药量为1，小白鼠、大白鼠为25-50，兔、豚鼠为15-20，狗、猫为5-10。此外，可以采用人与动物的体表面积计算法来换算，方法可参考楼上的。

实验三

大鼠大肠推进模型的建立

实验目的掌握大鼠肠道插管方法及打结、缝合技术。实验动物大鼠。实验器材大鼠固定板、棉签、注射器、塑料导管（内径1mm）、直剪、弯剪、组织镊、止血钳、持针器、缝合针、缝合线。实验试剂麻醉剂、碘酒、酒精。实验步骤1.

实验前准备：大鼠于实验前12小时禁食不禁水。2.

麻醉及固定：大鼠按0.3ml/100g体重腹腔注射水合氯醛；麻醉后将大鼠固定在固定板上。3.

消毒及备皮：在大鼠腹部用碘酒和酒精消毒，涂抹时应沿同一方向进行；用弯剪剪去大鼠腹中部的被毛，剪毛时要把剪刀贴近皮肤。4.

游离肠组织：在腹中部铺上手术布，沿腹中线做5~6cm长的切口，先剪开皮肤层，再剪开肌肉层，暴露出腹腔组织器官，将大鼠肠道游离出，置于手术布上。5.

插入并固定导管：找到大鼠的回盲部（回盲部包括盲肠和回盲瓣，是回盲瓣及其两侧延伸出的半月状皱襞以下的部分，呈盲囊状），从回盲部用剪刀切开一个相当于塑料导管外径的小口，将塑料导管插入2cm左右，然后用缝合针在塑料导管的近心端和远心端各穿一条线并结扎，将塑料导管固定在肠道上；另一端通过肌肉皮肤从背部引出，以备给药。6.

缝合：彻底止血并清除腹腔内的凝血块，逐层缝合腹部切口，然后将大鼠放回笼内，术后禁食而不禁水。实验四

醋酸可的松小鼠“阳虚”模型抗寒抗疲劳实验实验目的学习用醋酸可的松制作“阳虚”模型的方法，并观察其耐疲劳情况。实验动物雄性小白鼠，64只，体重25～30克，分成正常组和造模组。实验器材游泳池，一次性注射器（1ml）、针头（5.5号）药品试剂醋酸氢化可的松（醋酸氢化可的松以生理盐水稀释成浓度时1mg／0.1ml，每次注射前摇匀）实验内容制作醋酸可的松

“阳虚”的模型；观察阳虚小鼠耐寒耐疲劳情况。实验步骤1.

造模

造模组每日每只小鼠臀部注射醋酸氢化可的松1mg，共注射8天，正常组每日每只小鼠注射生理盐水0.1ml，共8天。观察小鼠在注射醋酸皮质素后的体征表现

造模小鼠在注射后可逐渐出现委靡不振、竖毛、拱背少动，反应迟钝等现象。冰水实验

将两组小鼠同时放入4℃冰水中，计算其在冰水中游泳疲劳死亡的时间。

实验五

三承气汤对小鼠小肠推进功能的影响

实验目的了解不同药物对整体动物肠蠕动的影响，并比较三承气汤泻下作用的强弱。实验动物昆明种小白鼠，48只，18～20g。实验器材手术剪，眼科镊，灌胃器，长尺，炭末。实验试剂药品100％大承气汤煎液：大黄12g（后下），芒硝9g(烊化)，枳实12g，厚朴15g。上药先煎枳实、厚朴，再入大黄，煎液冲溶芒硝。100％小承气汤煎液：大黄12g，枳实9g，厚朴16g。三药同煎煮。100％调胃承气汤煎液：大黄12g，芒硝12g，炙甘草6g。先煎大黄、甘草，煎液冲溶芒硝。

实验步骤取空腹12h小白鼠，随机分成四组。分别按0.2ml/10g体重灌服含有10％炭末的以下药物。甲组：大承气汤煎液乙组：小承气汤煎液丙组：调胃承气汤煎液丁组：生理盐水给药后20分钟，处死动物，打开腹腔，轻轻取出肠管，剪去附着在肠管上的系膜和脂肪，剪取上端自幽门，下端至回盲部的肠管，拉成直线，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至炭粉前锋的长度作为“炭末移动距离”。计算每只小白鼠炭末移动百分率，比较四组结果的差异