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DB22DB22/T1608—2012牛病毒性腹泻/粘膜病病毒荧光RT-PCR检测方法Methodofthereal-timeRT-PCRforthedetectionofBovineviraldiarrhea/mucosaldisease2012-12-01发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布I1GB/T6682分析实验室用水规荧光RT-PCR：荧光逆转录聚合酶链反应（RealTimeFluorescentQuantitativeReverseTranscriptionPolymeraseChain采用TaqMan方法，比对牛病毒性腹泻/粘膜病病毒基因组5'端非编码区最保守的核苷酸序列，设计PCR反应进入退火阶段时，引物和探针同时与目的基因片段结合，此时探针上R基团发出的荧光信号被Q基因所吸收，仪器检测不到荧光信号；而反应进行到延伸阶段时，Taq酶的5'探针降解。这样探针上的R基团游离出来，所发出的荧光不再为Q所吸收而被检测仪所接收。随着PCR反除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水；所有试剂均用无RNA25.1.11引物：根据病毒性腹泻/粘膜病病毒（BVDV）国际标准株基因序列针（FAM）5'-CCATCCAACGAACTCAC3℃)的乙醇漂洗。干燥后加入50μLDEPC水，溶解RNA，轻轻混匀，2000r/min离心5s。冰上保存45A.1

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