复方樟脑膏处方改进与质量标准研究

复方樟脑膏处方改进与质量标准研究目录中文摘要..........................................................................................5英文摘要..........................................................................................61仪器与试药.................................................................................81.1仪器...........................................................................................81.2试药...........................................................................................82处方和制备..................................................................................82.1处方...........................................................................................82.2制备方法..........................…......................................................82.3稳定试验..........................…......................................................82.3.1高温试验.................................................................................82.3.2高湿试验...............................………….......................82.3.3耐寒试验................................................….............................82.3.4离心法验..................................................…...........................8质量标准................................................….................................93.1定性鉴别.......................................................…...........................93.1.1樟脑的鉴别................................................…...........................93.1.2薄荷脑的鉴别............................................…...........................113.2定量鉴别.......................................................…...........................133.2.1系统适应性试验........................………………................…..……...133.2.2线性关系考察...............................…………..............153.2.3精密度试验...............................………...............…...153.2.4稳定性试验...............................……...............……...153.2.5重复性试验...............................…...............………...153.2.6加样回收率试验..........................…............………...153.2.7样品测定...............................…………........…………...........……...164讨论......................................................…...........………...165结论...............................…................................………...17参考文献..........................................................................................19致谢................................................................................................20中文摘要目的：通过考察影响复方樟脑膏稳定性因素，改进了复方樟脑软膏处方、配制工艺，同时建立其质量标准。方法：采用高温试验、高湿试验、耐寒试验、离心试验观察制剂的稳定性，同时选用薄层色谱法定性鉴别乳膏中的樟脑、薄荷脑，对6种薄层色谱定性鉴别方法做出评价，使用高效液相色谱法定量测定乳膏中的曲安奈德。结果：经稳定性实验观察制成的复方樟脑膏制剂无油水分离、分层。乳膏中的樟脑、薄荷脑TLC斑点清晰，Rf值适中，阴性无干扰。曲安奈德在0.23～1.15µg之间表现出良好的线性关系（r=0.9999），其平均回收率为100.43%，RSD=0.16%(n=9)。结论：经过对原处方的改进，药物质量稳定，疗效确切，取得了显著效果。用薄层色谱法、HPLC对该乳膏进行质量控制，方法准确、可行、专属性强。关键词：复方樟脑膏；处方改进；稳定性；定性鉴别；含量测定ABSTRACTStudyonPrescriptionImprovementandQualityStandardofCompoundCamphorOintmentRenJie，LiuGuang-bin，ZhaoLi-ping，ZhangYuan(JiugangHospital，JiayuguanGansu735100)Abstract：Objective：Byinvestigatethatfactorsaffectthestabilityofcompoundcamphorpaste,Theprescriptionandpreparationtechnologyofcompoundcamphorointmentwereimprovedanditsqualitystandardwasestablished.Methods：Thestabilityofthepreparationwasobservedbyhightemperaturetest,highhumiditytest,coldresistancetestandcentrifugaltest,Atthesametime,CamphorandmentholincreamwereidentifiedbyTLC,evaluatingtheresultsof6kindsofTLCandtriamcinoloneincreamwasdeterminedbyHPLC.Results：Thecompoundcamphorpastepreparationmadebystabilityexperimentobservationhasnooil-waterseparationandstratification.TheTLCspotsofcamphorandmentholcreamareclear.Triamcinoloneacetonideshowedagoodlinearrelationshipbetween0.23～1.15µg(r=0.9999),theaveragerecoveryratewas100.43%,RSD=0.16%(n=9).Conclusion：Thequalityofthisprescriptionisstable,theclinicaleffectisexact,andremarkableeffecthasbeenachieved.ThequalityofthecreamwascontrolledbyTLCandHPLC,Themethodisaccurate,feasibleandspecific.keywords：compoundcamphorointment；Prescriptionimprovement；Stability；Qualitativeidentification；Contentdetermination复方樟脑膏处方改进与质量标准研究任洁刘光斌赵丽萍张媛（酒钢医院，甘肃嘉峪关735100）复方樟脑软膏收载于《中国人民解放军药品制剂规范》[1],具有消毒收敛，促进局部血液循环，用于冻疮，手足皲裂等功效，主要用于冻疮、神经性皮炎、虫咬性皮炎、瘙痒性皮肤病、痔疮，还可预防和治疗蚊虫叮咬、带状疱疹引起的疼痛等。本软膏为皮肤科常用的一个老处方，各地医院储备量丰富，使用广泛且不受地域影响，药品价格低疗效好，但因剂型问题油腻不易涂布，使用时易污染衣物，造成患者使用体感不佳。为此，在老处方基础上进行改进，重新调整水相、油相比例，制成外观洁白、均匀、细腻、质量稳定的O/W型乳膏剂，在主药基础上添加醋酸曲安奈德、达克罗宁和薄荷脑，保证原有疗效的同时增加止痒、止痛、防溃烂和改善局部血液循环的作用，加速患处伤口愈合。醋酸曲安奈德可抗炎抗真菌感染，微量加入避免激素使用过量对人体造成损伤；达克罗宁作为外部使用的神经阻滞剂，对患处起到类似麻醉剂的止痒止痛作用；加入薄荷脑可在患者使用时带来冰凉触感，在止痒同时避免患者抓挠患处造成二次伤害或感染。解决老处方难涂布患者接受度低的同时增加疗效，优化使用效果提升竞争力，提高患者满意度。在同类软膏制剂中，处方内薄荷脑、樟脑均为易挥发物质，通常使用气相色谱法进行定性定量检测，但气相色谱仪价格昂贵，基层医院难以做到普及，而易挥发物质采用高效液相色谱法进行测定容易受到外界环境以及溶剂影响，造成峰位偏差影响结果。薄层色谱法由于价格适宜、结果准确在基层使用更为广泛，相应使用的展开剂及其比例也较为多样，笔者通过对比常用的乙酸乙酯、甲苯、正己烷，评价不同展开剂及其比例对樟脑类挥发物质结果测定提供参考，方便临床工作的进行。而针对自制药复方樟脑软膏，由于原料使用、地区环境、制剂方法不同医院差异较大，对主药进行含量测定时不同文献的测定方法重现性不高，对于本院提高自制药质量标准仅具参考意义，通过实验测定醋酸曲安奈德的最适流动相及波长，提供数据完善并规范本院自制药质量标准。1仪器与试药1.1仪器YP30002电子分析天平（上海上天）；LC-2010AHT高效液相色谱仪（日本岛津）；硅胶G薄层板（青岛海洋）；SLD-1薄层显色喷雾泵（天津思利达）。1.2试药醋酸曲安奈德（批号：100055-200302）；复方樟脑膏（酒钢医院自制，批号：20191106、20191218、20200113）；乙醚和磷酸均为分析纯；色谱纯甲醇；超纯水。2处方和制备2.1处方薄荷脑6g；醋酸曲安奈德0.5g；维生素E；盐酸达克罗宁10g；硅油；樟脑10g；液体石蜡；蜂蜡；十六醇；十二烷基硫酸钠；尼泊金乙酯；硬脂酸；单硬脂酸甘油酯；甘油；超纯水适量，共制成1000g。2.2制备方法精密称取处方量的油相、水相，分别用干净的容器加热，使两相温度均在约70℃，保持相同温度时将油相缓慢加入水相中，加入同时保持持续的顺时针或逆时针方向搅拌，最后加入曲安奈德、达克罗宁、薄荷脑、樟脑，搅拌至凝，既得。2.3稳定性试验2.3.1高温试验[2]取本品于60℃下放置5天后观察，有油水分层现象；另取本品于40℃下放置10天后观察，无油水分离、分层现象。2.3.2高湿试验[2]取本品10g置称量瓶开口于25℃恒湿密闭容器中，相对湿度为90%±5%环境中静置，在第5天、第10天时进行观察，均无油水分离现象，称重吸湿增重<5%。2.3.3耐寒试验取本品-15℃静置24h后观察，无油水分离、分层现象，乳膏性状稳定。2.3.4离心法试验取10g样品置于离心机内，转速2500r/min，离心半小时后取出观察，未见油水分层。3.质量标准3.1定性鉴别对照品溶液的制备取10mg樟脑原料药于容量瓶中，加2mL无水乙醇溶解制成樟脑对照品；另取10mg薄荷脑对照品于容量瓶，加5mL乙酸乙酯溶解制成薄荷脑对照品。供试品溶液的制备取5g样品于容量瓶中，用30mL无水乙醇溶解，封口膜密封瓶口处，于80°C水浴加热15min，摇晃使其溶解并放至室温，冰浴45min，双层滤纸过滤白色结块，取续滤液作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备同供试品制备方法，制成不含樟脑、薄荷脑的两种阴性对照品。3.1.1樟脑的鉴别3.1.1.1樟脑的鉴别方法一取15µl樟脑对照品溶液、10µl供试品溶液以及10µl不含樟脑的阴性对照品溶液，取相同间隔于隔硅胶G薄层板上点板，以乙酸乙酯：甲苯（1：9，V：V）为展开剂，展开剂混合后预饱和20min，均匀喷显色剂10%磷钼酸乙醇溶液，在空气流动小处，于110°C干燥并观察，至出现清晰斑点。结果樟脑标准品溶液和供试品溶液在同位置显相同淡黄色斑点，阴性对照无此斑点。薄层图见图1。 123456 图1樟脑薄层图谱Fig.1TLCfigureofCamphor注：1,2.樟脑对照品；3,4.供试品；5,6.阴性对照Notes：1,2.Camphorcontrol；3,4.Testproduct；5,6.Negativecontrol3.1.1.2樟脑的鉴别方法二取10µl樟脑对照品溶液、10µl供试品溶液以及10µl不含樟脑的阴性对照品溶液，取相同间隔于隔硅胶G薄层板上点板，以乙酸乙酯：正己烷（3：17，V：V）为展开剂[3]，展开剂混合后预饱和20min，均匀喷显色剂10%磷钼酸乙醇溶液溶液，在空气流动小处，于110°C干燥并观察，至出现清晰斑点。结果樟脑标准品溶液和供试品溶液在同位置显相同淡黄色斑点，阴性对照无此斑点。薄层图见图2。123456图2樟脑薄层图谱Fig.2TLCfigureofCamphor注：1,2.樟脑对照品；3,4.供试品；5,6.阴性对照Notes：1,2.Camphorcontrol；3,4.Testproduct；5,6.Negativecontrol3.1.1.3樟脑的鉴别方法三在有塞试管中分别取樟脑对照品溶液，供试品溶液，不含樟脑的阴性对照品溶液各2ml,各试管均加2，4-二硝基苯肼溶液3ml，震荡摇匀，盖塞静置2小时，观察现象[4]，结果樟脑对照品、供试品均出现絮状沉淀，供试品沉淀较少，阴性对照溶液未有明显絮状沉淀析出。见图3123图3樟脑化学鉴别图Fig.3Chemicalidentificationchartofcamphor注：1.樟脑对照品2.供试品；3.阴性对照Notes：1.Camphorcontrol；2.Testproduct；3.Negativecontrol3.1.2薄荷脑的鉴别3.1.2.1薄荷脑的鉴别方法一在硅胶G薄层板上，取薄荷脑对照品、供试品、不含薄荷脑的阴性对照品各10µl并取相同间隔点板，展开剂乙酸乙酯：正己烷（3：17，V：V）混合后预饱和20min，均匀喷显色剂喷10%磷钼酸乙醇溶液，于110℃干燥至出现清晰斑点。结果薄荷脑标准品和供试品在相同位置显同样蓝色斑点，阴性对照上无此斑点。薄层图见图4123456图4薄荷脑薄层图谱Fig.4TLCfigureofMenthol注：1,2.薄荷脑对照品；3,4.供试品；5,6.阴性对照Notes：1,2.Mentholcontrol；3,4.Testproduct；5,6.Negativecontrol3.1.2.2薄荷脑的鉴别方法二取薄荷脑对照品溶液，供试品溶液，各10µl，分别取相同间隔点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：正己烷（3：17，V：V）为展开剂，预饱和20min后展开，均匀喷显色剂0.8%磷钼酸乙醇溶液，于110°C干燥至出现清晰斑点，结果供试品与薄荷脑标准品在相同位置显同样淡红色斑点。薄层图见图51234图5薄荷脑薄层图谱Fig.5TLCfigureofMenthol注：1,2.薄荷脑对照品；3,4.供试品Notes：1,2.Mentholcontrol；3,4.Testproduct3.1.2.3薄荷脑的鉴别方法三取薄荷脑对照品溶液、供试品溶液、不含薄荷脑的阴性对照品溶液各10µl，分别取相同间隔点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲苯（1：9，V：V）为展开剂，混合后预饱和20min，均匀喷显色剂10%磷钼酸乙醇溶液溶液，于110°C干燥至出现清晰斑点[5]，结果供试品与薄荷脑标准品在相同位置显同样蓝色斑点，阴性对照上无此斑点。薄层图见图6123456图6薄荷脑薄层图谱Fig.6TLCfigureofMenthol注：1,2.薄荷脑对照品；3,4.供试品；5,6.阴性对照Notes：1,2.Mentholcontrol；3,4.Testproduct；5,6.Negativecontrol3.2含量测定色谱条件色谱柱：InertsilODS-SP色谱柱(150mm×4.6mm，5µm)；流动相：甲醇：0.2%磷酸水溶液：乙醚（60:38:2）；流速：1.0mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：239nm；制备对照品溶液使用50mL容量瓶，精密称取曲安奈德对照品，用色谱纯甲醇稀释至刻度，制成浓度为0.115mg·mL-1对照液备用。制备供试品溶液使用50mL容量瓶，精密称取5g供试品，用流动相甲醇：0.2%磷酸水溶液：乙醚（60:38:2）稀释到刻度，封口膜封住瓶口，50℃水浴10分钟后取出放置常温再冰浴2小时，双层滤纸过滤取续滤液备用。制备阴性对照品溶液同供试品溶液制备法，制备不含曲安奈德的阴性对照。3.2.1系统适应性试验分别精取对照品、供试品以及阴性对照，经过双层0.22µm滤头滤过，各取10µL滤液入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定。结果可见供试品和对照品在相应位置有相同的吸收峰，而阴性对照品在相对应的保留时间内，相同位置处没有吸收峰（见图3）。1/11.7351/11.735A1/11.7351/11.735BC图3HPLC图Fig.3TheHPLCchromatogram注：A．对照品；Ｂ．供试品；Ｃ．阴性；1.醋酸曲安奈德Notes：A.Control；B.testproduct；C.negativecontrol；1.Triamcinolone3.2.2线性关系考察精称醋酸曲安奈德对照品，加甲醇：0.2%磷酸水溶液：乙醚（60:38:2）制成0.115mg·mL-1的溶液，分别吸取0.230、0.460、0.690、0825、1.15µg入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定。以浓度为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）绘制标准曲线，得曲安奈德回归方程为y=1970154.348x-4314.3，相关系数R=0.999987，表明曲安奈德在0.230～1.15µg之间呈良好的线性关系。3.2.3精密度试验精取对照品10μL重复进样5次，测曲安奈德峰面积，求得RSD=0.19%，表明仪器精密度良好。3.2.4稳定性试验精取同一批号（20191106）供试品10μL分别于0、1、2、4、6、8h进样，以上述色谱条件测定醋酸曲安奈德，求得RSD=0.12%，显示复方樟脑膏中的曲安奈德在8h内稳定。3.2.5重复性试验取同一批号（20191106）样品6份，精密称定，按3.2项下制备供试品方法制备供试液，进行含量测定，得到醋酸曲安奈德平均含量为0.1042mg·g-1，RSD=0.09%，结果表明该试验重复性良好。3.2.6加样回收率试验精密称取已知含量为0.1036mg·g-1的同一批号（20191106）样品9份，各加入0.5mg醋酸曲安奈德对照品，在上述色谱条件下进行测定，计算回收率。结果见表1。表1回收率测定结果（n=9）Tab1Determinationresultsoftherecoveryrate（n=9）取样量/g曲安奈德/mg加样量/mg测得量/mg回收率/%平均/%RSD/%5.55140.57130.5581.1147598.71100.430.165.27480.54650.5581.11315100.795.39400.55880.5581.1140899.755.50110.56990.7081.30030101.755.47530.56720.7081.29954101.915.47080.56680.7081.29897101.905.51010.57080.9281.4767898.535.32640.55180.9281.49545101.065.43270.56280.9281.4827799.463.2.7样品测定分别取3批不同编号的样品，以供试品相同制备方法制样品溶液，进行测定。结果见表2。表2复方樟脑软膏样品中醋酸曲安奈德含量测定结果Tab2Measurementresultsoftriamcinolonecontentincompoundcamphorointmentsample(n=3)样品批号样品含量1次mg/g样品含量2次mg/g平均值%3批样品平均值201911060.10340.10380.1036201912180.10470.10420.10450.1043202001130.10510.10450.10484讨论4.1复方樟脑软膏改进后制成O/W型乳膏剂，经稳定性试验可以看出，制得的乳膏性质稳定，符合《药典》（2015版）[2]项下乳膏剂稳定性考察，可供临床使用。4.2薄荷脑和樟脑均为挥发性物质，在展开剂中常不能呈现完整点型，对含量测定具有较大影响，定性鉴别影响较小，展开剂乙酸乙酯：正己烷（3：17，V：V）和乙酸乙酯：甲苯（1：9，V：V），均对薄荷脑以及樟脑有良好的展开作用，其中乙酸乙酯：正己烷（3：17，V：V）适宜展开薄荷脑，而樟脑在乙酸乙酯：甲苯（1：9，V：V）展开剂中点型更为完整。薄荷脑、樟脑的显色剂常选择磷钼酸乙醇溶液和香草醛硫酸溶液[6]，经对比，在0.8%和10%浓度中，10%磷钼酸乙醇溶液显色效果最为明显，但由于显色剂本身浓度高，喷涂时应注意少量均匀喷涂，以免造成色谱板背景颜色过深影响分辨，而常用8%香草醛硫酸溶液显色效果不佳。4.3在对挥发性物质进行薄层色谱法鉴别时，常因药物易溶于展开剂，而造成点型不佳，在本研究过程中发现樟脑、薄荷脑本身易溶于有机溶剂，对实验操作要求高，做TLC时应选择空气流动小，气流平稳处，例如通风橱内（关闭通风开关），以及在干燥薄层色谱时，避开窗边等通风处，加热自然烘干更利于点型保持完整。4.4软膏药物成分多样，根据处方的不同可能存在不同的影响因素，使用二硝基苯肼对樟脑进行化学鉴别一方面专属性不强，等待结果耗时长；另一方面二硝基苯肼为剧毒物，配制过程容易引发危险，影响从业人员生命安全，建议使用薄层鉴别法代替。4.5由于该处方为乳膏剂，基质成分复杂，想很好的分离出吸收峰来很难，笔者换了很多流动相如甲醇：水（65:35），甲醇：0.2%磷酸水溶液（60:40），因曲安奈德、达克罗宁、樟脑的最大吸收波长分别为240nm[7]、279nm[8]、289nm[9]，也换了很多波长，都没有得到很好的分离峰，最后选择甲醇：0.2%磷酸水溶液：乙醚（60:38:2）为流动相，选定239nm为测定波长，从而分离出了曲安奈德较好的吸收峰。4.6研究中笔者尝试对樟脑、薄荷脑进行HPLC定性定量检测，在探寻过程中发现，传统的先水浴加热溶解再冰浴过滤提取乳膏中物质并不适用于提取小剂量的挥发性物质，首先加热会增加挥发的可能性，其次乳膏冰浴后会产生大量的凝固物，易堵塞滤纸造成等待时间增加以及挥发性物质的逃逸，若使用抽滤则会打散块状凝固物，滤过不净威胁到高效液相色谱仪的使用安全。此类提取方法效率低且提取纯度不高，在HPLC中常看到峰面积过小，以及受其他基质影响与标准物质很难做到完全重合，如必须对樟脑、薄荷脑进行定量测定，建议使用气相色谱法。5结论全国各地医院近几年在响应政府提高患者医疗质量，降低医疗费用的号召下陆续开