GA-T 2323-2025 法庭科学 生物检材中硫代硫酸根离子检验 液相色谱-质谱法

GA/T2323-2025法庭科学生物检材中硫代硫酸根离子检验液相色谱-质谱法1范围本标准规定了法庭科学领域生物检材（血液）中硫代硫酸根离子的液相色谱-质谱（LC-MS）检验方法。本标准适用于法庭科学领域生物检材（血液）中硫代硫酸根离子的定性分析，以及新鲜血液检材中硫代硫酸根离子的定量分析。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。（注：本标准未明确列出具体引用文件，可根据实际检验工作关联的法庭科学通用标准、仪器操作标准等补充）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。术语定义硫代硫酸根离子（thiosulfateion）法庭科学中生物检材分析的目标分析物，作为硫化氢中毒的稳定代谢产物，是确认硫中毒的可靠指标之一。液相色谱-质谱（LC-MS）用于硫代硫酸根离子分析的检测技术，以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统，结合两者优势实现目标物的高效分离与精准检测。生物检材（biologicalsample）法庭科学分析中的样本类型，本标准特指血液，是硫代硫酸根离子检测的核心样本来源。4原理生物检材（血液）经前处理后，通过液相色谱系统实现硫代硫酸根离子与基质中其他干扰组分的分离；分离后的目标组分进入质谱检测器，经离子化后，通过质量分析器将离子碎片按质量数分开，根据目标离子的保留时间、特征离子质荷比及丰度比进行定性分析；采用内标法或外标法，根据目标离子峰面积与浓度的线性关系进行定量分析，确保检测结果的准确性和可靠性。相较于气相色谱-质谱（GC-MS）方法，本标准采用的液相色谱-质谱法无需对硫代硫酸根离子进行两步衍生化处理，操作更简化、快速，且能有效解决衍生产物稳定性差的问题，提升检测reproducibility。5试剂与材料5.1试剂硫代硫酸根离子标准品：纯度≥98%，作为定性定量分析的参照基准。内标物：选用适合液相色谱-质谱负离子检测模式的化合物（如对羟基苯甲酸苯酯），纯度≥98%，用于消除基质效应干扰，提升定量准确性。提取试剂：乙腈、甲醇（色谱纯），用于生物检材中目标物的提取与净化；氯化钠（分析纯），辅助提取过程。流动相试剂：乙酸铵（色谱纯，挥发性盐，浓度不超过20mmol/L）、甲醇、超纯水，用于配制液相色谱流动相；禁止使用不挥发性缓冲盐、三乙胺、表面活性剂及高浓度三氟乙酸（TFA），避免损伤质谱检测器。滤膜：0.22μm有机相滤膜，用于过滤处理后的样品，去除杂质，保护仪器。5.2材料离心管：5mL、10mL，聚丙烯材质，用于样品前处理的离心操作。液相小瓶：2mL，带密封垫，用于盛放待上机检测的样品。移液枪：10μL、100μL、1000μL，精度符合检测要求，用于试剂和样品的移取。离心仪、涡旋振荡器、超声仪、旋转蒸发仪：性能稳定，满足样品前处理操作需求。6仪器设备液相色谱仪：配备高压输液泵、自动进样器、柱温箱，能实现目标组分的有效分离；色谱柱选用适合离子分离的反相或离子交换色谱柱，确保硫代硫酸根离子与干扰组分分离度达标。质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI），支持负离子检测模式；具备质量分析功能，能精准检测目标离子的质荷比，分辨率满足检测要求。天平：精度≥0.1mg，用于标准品、内标物及试剂的称量。其他辅助设备：超纯水机、通风橱、冰箱（4℃及-20℃），用于试剂配制、样品处理及保存。7样品处理7.1样品采集与保存生物检材（血液）需在采集后1小时内完成预处理，避免硫代硫酸根离子降解或污染；采集的新鲜血液样品需置于4℃冷藏保存，长期保存需置于-20℃冷冻，避免反复冻融，影响检测结果。7.2前处理步骤取适量血液样品（通常0.5mL）置于5mL离心管中，加入适量氯化钠，充分搅拌溶解，破坏样品基质。加入乙腈（与样品体积比约1:1），涡旋震荡5~10分钟，超声提取15~20分钟，使硫代硫酸根离子充分溶出。将离心管置于离心仪中，以8000~10000r/min的转速离心10~15分钟，取上清液置于另一干净离心管中。重复步骤7.2.2~7.2.3，合并两次上清液，置于旋转蒸发仪中旋转蒸发至近干。用甲醇定容至1mL，涡旋震荡混匀，经0.22μm有机相滤膜过滤，收集滤液至液相小瓶中，待上机检测；若进行定量分析，需在定容前加入适量内标物溶液，混匀后再过滤。8检验步骤8.1仪器条件设置8.1.1液相色谱条件色谱柱：选用合适的反相或离子交换色谱柱（如C18柱），柱长150mm，柱径4.6mm，粒径5μm。流动相：采用甲醇-乙酸铵溶液（体积比根据实验优化确定），流速0.3~0.5mL/min，保持流速稳定。柱温：30~35℃，确保色谱分离效果稳定。进样量：1~5μL，根据仪器灵敏度优化确定。洗脱方式：采用等度洗脱或梯度洗脱，确保硫代硫酸根离子的保留时间稳定，与干扰峰完全分离。8.1.2质谱条件离子源：电喷雾离子源（ESI），负离子检测模式。离子化电压：根据仪器性能优化确定，通常为-2000~-4000V。特征离子：选取硫代硫酸根离子的特征质荷比（如m/z111）作为定量离子，选取1~2个辅助特征离子作为定性离子，确定特征离子丰度比范围。其他参数：碰撞能、干燥气温度、雾化气压力等，根据仪器型号及实验优化确定，确保检测灵敏度和重复性。8.2标准曲线绘制配制系列浓度的硫代硫酸根离子标准溶液，加入适量内标物溶液（定量分析用），浓度范围覆盖实际样品可能的含量（参考范围：血液中0.5~250μmol/L），至少设置5个浓度点（含空白对照）。按照8.1设置的仪器条件，对系列标准溶液进行上机检测，记录每个浓度点的目标离子峰面积（定量离子）与内标离子峰面积（定量分析用）。以硫代硫酸根离子标准浓度为横坐标，以目标离子峰面积（或峰面积比）为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数（r²≥0.995），确保标准曲线线性良好。8.3样品检测按照8.1设置的仪器条件，对经前处理后的样品溶液进行上机检测，记录目标离子的保留时间、特征离子质荷比及峰面积（或峰面积比）。同时进行空白实验（不加样品，其余操作同前处理）和平行实验（每份样品至少做2个平行样），确保检测结果可靠。9结果判定9.1定性判定若样品溶液中出现与硫代硫酸根离子标准溶液一致的保留时间（相对偏差≤2%），且特征离子的质荷比与标准品一致，特征离子丰度比与标准品的相对偏差在±10%范围内，空白实验无干扰，则可判定样品中含有硫代硫酸根离子；否则，判定为不含硫代硫酸根离子。9.2定量判定根据样品溶液中目标离子峰面积（或峰面积比），代入标准曲线回归方程，计算样品中硫代硫酸根离子的浓度。平行实验结果的相对标准偏差（RSD）≤10%，定量结果有效；否则，需重新检测。定量分析仅适用于新鲜血液检材，陈旧血液检材因硫代硫酸根离子可能降解，仅可进行定性分析。10质量控制标准品管理：标准品需妥善保存，定期核查纯度；配制标准溶液时，需准确称量，做好记录，确保浓度准确。仪器校准：定期对液相色谱仪、质谱仪、天平、离心仪等设备进行校准，确保仪器性能符合检测要求；每次检测前，需对仪器进行调试，确保运行稳定。空白实验：每次检测需进行空白实验，若空白实验出现干扰峰，需排查试剂、耗材及仪器污染问题，重新进行检测。平行实验：每份样品至少做2个平行样，平行样结果相对标准偏差需符合要求，否则需重新处理样品并检测。基质效应控制：采用内标法进行定量分析，有效降低生物基质对检测结果的干扰；定期核查基质效应影响，优化前处理步骤和仪器条件。11注意事项样品采集后需及时处理，避免硫代硫酸根离子降解，采集和处理过程中需防止样品污染，使用专用耗材，避免交叉污染。实验所用试剂均需符合色谱纯或分析纯要求，流动相需经0.22μm滤膜过滤并脱气，避免杂质堵塞色谱柱或影响检测结果。质谱仪操作需严格遵循仪器操作规程，开机后需进行预热，检测结束后需对色谱柱和离子源进行清洗，避免残留污染，延长仪器使用寿命；避免使用不挥发性试剂，防止损伤质谱检测器。实验过程中需做好个人防护，佩戴手套、口罩，在通风橱内进行试剂配制和样品处理，避免接触有毒有害试剂。实验数据需及时记录，包括样品信息、仪器条件、检测结果、平行样数据等，记录需完整、准确，便于追溯；检测报告需符合法庭科学检验报告规范。本标准仅适用于血液检材，其他生物检材（如尿液）的检测可参考本标准，需根据检材特性优化前处理和仪器条件。12附录（资料性附录）12.1标准编制信息本标准由全国刑事技术标准化技术委员会（SAC/TC179）提出并归口，由山西医科大学、公安部鉴定中心、司法鉴定科学研究院、北京市公安局刑事侦查总队、江苏省公安厅刑警总队起草；2025年1月8日发布，2025年7月1日实施，计划号为2020BZ065，中国标准分类号为A92，国际标准分类号为07.140。12.2常