黄精斑点病室内药剂筛选

黄精斑点病室内药剂筛选摘要摘要：黄精斑点病作为主要病害，易导致黄精产量和品质下降。本研究通过菌丝生长速率测定10种常见杀菌剂对黄精斑点病病原的抑制效能以及室内毒力。实验发现，50%喹啉铜（涂蛙）、72%唑醚·代森联（佳富瑞）等4种药剂对黄精斑点病病原菌抑制效果最为显著。5个梯度浓度的含药培养基抑制率均达到了100%，抑制效果显著优于其他药剂；53.8%氢氧化铜（细绝）、80%烯酰吗啉（毅植靓颖）等药剂表现较弱。通过对十种药剂的毒力回归分析，明确了不同药剂的毒力大小顺序。综合抑菌效能与经济成本评估，建议优先选用72%唑醚·代森联（佳富瑞）、75%肟菌·戊唑醇（稳敌泰）作为药剂防控第一选择，为田间病害管理提供理论支撑。关键词：黄精斑点病；化学防治；抑菌活性；室内药剂筛选；毒力测定ScreeningofindoorchemicalagentsforPolygonatumcyrtonemaspotdiseaseAbstractPolyporusumbellatusspotdiseaseisamajordiseasethatcanleadtoadeclineintheyieldandqualityofPolyporusumbellatus.Thisexperimentdeterminedtheinhibitoryefficacyof10commonfungicidesonthepathogenofPolyporusumbellatusspotdiseaseandtheirindoortoxicitybymeasuringthemycelialgrowthrate.Theresultsshowedthat50%quinoliniccopper(Tuwa),72%azoxystrobin·mancozeb(Jiafurui),andother4fungicideshadthemostsignificantinhibitoryeffectonthepathogenofPolyporusumbellatusspotdisease.Theinhibitionrateofthe5concentrationgradientsofthedrug-containingmediumallreached100%,andtheinhibitoryeffectwassignificantlybetterthanthatofotherfungicides;53.8%copperhydroxide(Xijue),80%dimethomorph(Yizhilingying),andotherfungicidesshowedrelativelyweakperformance.Throughtheregressionanalysisofthetoxicityofthe10fungicides,theorderoftoxicityofdifferentfungicideswasclarified.Basedonthecomprehensiveassessmentofantibacterialefficacyandeconomiccost,itisrecommendedtoprioritizetheuseof72%azoxystrobin·mancozeb(Jiafurui)and75%triflumizole·tebuconazole(WendiTai)asthefirstchoiceoffungicidesfordiseasecontrol,providingtheoreticalsupportforfielddiseasemanagement.Keywords:Polygonatumodoratumspotdisease;Chemicalcontrol;Antibacterialactivity;Indooragentscreening;Toxicitydetermination目录TOC\o"1-3"\h\u27261.引言 6115521.1研究目的及意义 6113461.2研究现状 6300932.材料和方法 754592.1实验材料 750712.1.1供试病原 7200662.1.2实验试剂与药剂 7200322.1.3实验器材 827722.2实验方法 9327032.2.1黄精斑点病病原菌的活化 9172742.2.2室内药剂筛选试验 9270063.结果与分析 9229803.1十种药剂对黄精斑点病菌生长抑制结果 9453.2十种药剂对黄精斑点病病菌室内毒力 1432514.结论与讨论 1430608参考文献 155786致谢 181.引言1.1研究目的及意义黄精（Polygonatum

sibiricum

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Redoute）系百合科植物滇黄精、黄精及多花黄精的干燥根茎，具有健脾润肺、生津养阴的药用价值作用。作为2020年引入贵州省安顺市中药材品种，其市场需求持续增长，产业发展前景广阔。然而，规模化栽培中存在管理失当、连作障碍等因素诱发的病害问题，叶斑病、叶枯病、炭疽病和茎腐病等多种病害发生率逐年攀升，这些病害多发生在7-9月，严重影响到黄精根状茎的产量和品质。黄精的种植基地也遭受到多种病害侵扰。病原学指出，斑点病致病菌群以真菌门类为主（占病例78.3%）REF_Ref2006\r\h[15]。该病害呈现明显季节流行特征:5月下旬在老叶上始发，7月上旬扩散至新生植株，至8、9月该病进入爆发期REF_Ref2065\r\h[16]。黄精斑点病初期叶片表面产生圆形或不规则深褐色病斑，随病程发展，病斑持续扩大严重时引发全植株叶片焦黄枯烂REF_Ref2091\r\h[17]，此病严重影响黄精植株光合作用，已成为黄精栽培产业可持续发展的主要障碍。基于上述背景，本实验通过系统评估10种杀菌剂的抑菌活性，旨在筛选出对黄精斑点病具有显著防控效果的药剂，为建立高效的病害管理技术体系提供理论依据。1.2研究现状黄精（Polygonatum

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Redoute)作为百合科多年生药用植物，其地理分布横跨我国温热带至亚热带地区（青藏高原除外）REF_Ref1484\r\h[1]。传统中医学理论体系将其归入补肾填精类药材，其滋阴润燥的药效特征在《本草纲目》等典籍中已有明确记载REF_Ref1510\r\h[2]。现代药理学研究证实，该药材含有多种生物活性物质，在延缓衰老、调节免疫应答、调控糖代谢平衡及抑制肿瘤生长等方面具有显著作用REF_Ref23021\r\hREF_Ref1542\r\hREF_Ref1542\r\h[3REF_Ref1549\r\h-5],具有较大的药用开发潜力。段华团队发现黄精多糖能够改变细胞周期分布特征，促使肝癌H22细胞停滞于G0/G1期，并通过激活Caspase系统触发凋亡过程REF_Ref1683\r\h[6]。陆连第等通过血流变学分析指出，该多糖成分对血脂异常具有调节作用，其机制可能与改善氧化应激状态相关REF_Ref1742\r\h[7]。另有研究团队从生殖医学角度切入，发现黄精制剂通过调控激素相关蛋白表达及信号通路，有效改善精子活力参数REF_Ref1712\r\h[8]。在心血管领域，李丽等证实研究该药材可通过调节NF-κB介导的炎症调控机制,减轻心肌组织损伤并促进修复过程REF_Ref1768\r\h[9]。值得关注的是，泰山黄精作为道地药材的代表性品种，是泰山四大名药之一REF_Ref1791\r\h[10]，一直在《中国药典》之列。随着黄精药用价值得到广泛认可，人工种植规模不断扩大以满足市场需求。但人工规模种植过程中面临多种因素威胁，据资料显示，黄精生产过程中以炭疽病、黑斑病、叶斑病等真菌性病害为主。这些病害显著影响黄精生理功能及产量形成。值得注意的是，在8-9月强势降水频发时段，黄精植株抗病能力呈现明显下降REF_Ref30784\r\h[18]。刘塔斯等学者在《药用植物种养加工技术》中系统论述了黄精病害防控策略，指出斑点病是黄精最具破坏性的病害类型REF_Ref1823\r\h[11]。该病害具有显著季节流行特征，夏秋季节高发且与降水呈正相关，发病初期叶片呈现不规则褪绿斑块，随着病程发展形成典型坏死斑，最终导致无法进行光合作用，病原菌经维管束向下侵染，引发地下器官氧化褐变，严重时造成绝收。黄精斑点病致病菌归属于半知菌亚门的真菌，主要包含为叶点霉属和尾孢属。这些病原菌具有强环境适应性，可在病残体或土壤中完成越冬，待温度回升条件适宜通过分生孢子侵染寄主组织REF_Ref1872\r\h[12]。黄精斑点病的发生与温湿度条件密切相关。最适合发病温度在15-25℃之间和缺乏阳光等环境条件有利于病原菌的繁殖和传播REF_Ref1902\r\h[13]。在适宜的环境条件下，病原菌可产生大量的分生孢子，配合持续高湿环境及弱光照条件可加速病原菌侵染过程，造成病害的流行REF_Ref1934\r\h[14]。当前黄精栽培实践中，斑点病已经上升成为制约产业发展的主要障碍,由于种植户普遍存在认知局限与防控滞后问题，致使病害蔓延期错失关键防控。因此,迫切需要寻找高效、低毒、低残留的药剂来进行防治。本实验选取安顺市黄精种植基地患病黄精，开展室内药剂筛选工作重点评估不用药剂对黄精斑点病病原菌抑制效果及安全生态性，为可持续病害管理提供技术支撑。2.材料和方法 2.1实验材料2.1.1供试病原供试病原菌：黄精斑点病菌，为实验室分离保存，由金义兰老师提供。2.1.2实验试剂与药剂所有实验药剂均由金义兰老师提供，如下表。表1供试药剂信息药剂Fungicides生产厂家Maker剂型Formulation使用浓度g/L、ml/gConcentration53.8%氢氧化铜（细绝）陕西汤普森生物科技有限公司水分散粒剂WG4、2、1、0.5、0.2550%喹啉铜（涂蛙）陕西汤普森生物科技有限公司水分散粒剂WG4、2、1、0.5、0.2515%吡唑醚菌脂（康吡得）郑州郑氏化工产品有限公司悬浮剂SL4、2、1、0.5、0.2511%精甲·咯·嘧啶（土虎）陕西汤普森生物科技有限公司悬浮种衣剂FS4、2、1、0.5、0.2572%唑醚·代森联（佳富瑞）陕西汤普森生物科技有限公司水分散粒剂WG5.6、2.8、1.4、0.7、0.3548%苯甲·嘧啶酯（妙铠）郑州郑氏化工产品有限公司悬浮剂SL4、2、1、0.5、0.2575%肟菌·戊唑醇（稳敌泰）陕西汤普森生物科技有限公司水分散粒剂WG1.6、0.8、0.4、0，2、0.130%甲霜·噁霉灵(根瑞宁)郑州郑氏化工产品有限公司水剂AS4、2、1、0.5、0.25（ml/g）80%烯酰吗啉(毅植靓颖)河北中天邦正生物科技有限公司水分散粒剂WG4、2、1、0.5、0.2540%嘧霉胺(靓库)陕西汤普森生物科技有限公司悬浮剂SL5.6、2.8、1.4、0.7、0.35培养基：PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖10g、琼脂粉20g，加水定容至1000mL，琼脂粉与葡萄糖充分溶解后分装进锥形瓶捆绑好放入立式高压蒸汽灭菌锅中灭菌（134℃，30min）处理，用于接种病原菌观察其菌丝生长速率。葡萄糖(福晨化学，福晨（天津）化学试剂有限公司)琼脂粉（福晨化学，福晨（天津）化学试剂有限公司）抗生素为利福平胶囊（红云制药，成都锦华药业有限公司）2.1.3实验器材MJT-P250C霉菌培养箱（合肥达斯卡生物科技有限公司）CJ-2D净化工作台（天津市泰斯特仪器有限公式）LDZM-80L立式高压蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）2.2实验方法2.2.1黄精斑点病病原菌的活化将置于冰箱里的黄精斑点病原菌接种至新鲜培养基中，放入28℃的霉菌培养箱进行培养6d备用。2.2.2室内药剂筛选试验采用立式高压蒸汽灭菌器对自来水进行灭菌处理(134℃，持续30min)制成无菌水，后用作稀释母液。分别配置不同药剂的母液，依据药剂推荐浓度使用无菌水进行系列稀释，最终获得五个浓度梯度的药液。每个浓度均设立三个重复对照组。向PDA培养基中添加适量抗生素（利福平胶囊），有效抑制细菌污染对实验结果的影响，采用移液枪精确取量1ml药液和9mlPDA（约55℃）移入一次性培养皿中混匀，制成带药平板，对照组1ml药液使用无菌水代替，每组浓度处理做三次重复。将已经活化完成的黄精斑点病原菌用无菌打孔器（5mm）取下，接种于含药培养基中，放入菌种培养基（28℃）培养观察菌丝生长情况，隔两天用十字交叉法测量菌落直径并使用笔记本记录菌丝生长情况并拍照，培养8d后终止实验。按公式可以得出各药剂对黄精斑点病病原菌菌丝生长抑制情况，计算菌丝生长抑制率。菌丝生长抑制率=（空白组菌落净增长量-处理组净增长直径/空白组净增长直径）×100%计算出菌丝生长抑制率后利用Originpro等软件进行计算毒力回归方程，并计算出十种药剂的EC50、EC80。3.结果与分析3.1十种药剂对黄精斑点病菌生长抑制结果由下表可知，提供的10种药剂中，50%喹啉铜（涂蛙，水分散粒剂）浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率均达到100%；72%唑醚·代森联（佳富瑞，水分散粒剂)浓度为5.6g/L、2.8g/L、1.4g/L、0.7g/L、0.35g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率均达到100%；48%苯甲·嘧菌酯（妙铠，悬浮剂）浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率均达到100%；75%肟菌·戊唑醇（稳敌泰，水分散粒剂）浓度为1.6g/L、0.8g/L、0.4g/L、0.3g/L、0.1g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率均达到100%，以上四种药剂防治效果最佳，优先考虑作为防治黄精斑点病药剂第一选择。表2药剂对黄精斑点病病原菌抑制结果（数据图）药剂名称Fungicide浓度（g/L、ml/L）Concentration平均菌落直径（mm）Diameterofcolony抑制率（%）Rateofinhibiton50%喹啉铜4210.50.250000010010010010010072%唑醚·代森联0.70.350000010010010010010048%苯甲·嘧啶酯4210.50.250000010010010010010075%肟菌·戊唑醇0.30.100000100100100100100CK/78/注：菌落直径均去掉菌饼直径40%嘧霉胺（靓库，悬浮剂）浓度为5.6g/L、2.8g/L、1.4g/L、0.7g/L、0.35g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为99.03%、94.34%、50.96%、43.06%、11.21%，前两种浓度抑菌率较高，可用于与其他作用机制不同的药剂（多菌灵、代森锰锌）轮换使用，延缓病原菌抗药性；表3药剂对黄精斑点病病原菌抑制结果（数据图）药剂名称Fungicide浓度（g/L、ml/L）Concentration平均菌落直径（mm）Diameterofcolony抑制率（%）Rateofinhibiton40%嘧霉胺0.70.350.754.4138.2544.4169.2599.0394.3450.9643.0611.21CK/78/注：菌落直径均去掉菌饼直径53.8%氢氧化铜（细绝，水分散粒剂)浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为33.12%、7.69%、4.70%、3.64%、1.28%，抑菌效果不佳，不作考虑；11%精甲·咯·嘧菌（土虎，悬浮种衣剂）浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为60.79%、53.84%、44.12%、42.30%、38.12%，抑菌效果一般，不作考虑；30%甲霜·噁霉灵（根瑞宁，水剂）浓度为4ml/L、2ml/L、1ml/L、0.5ml/L、0.25ml/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为78.10%、49.97%、42.10%、29.40%、19.23%，抑菌效果一般，不作考虑；80%烯酰吗啉（毅植靓颖，水分散粒剂)浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为7.61%、4.70%、3.64%、1.28%、0.02%，抑菌效果极差，不作考虑；15%吡唑嘧菌酯（康吡得，悬浮剂剂)浓度为4g/L、2g/L、1g/L、0.5g/L、0.25g/L五种浓度对黄精斑点病病菌抑制率分别为68.70%、57.48%、55.34%、50.75%、50.11%，抑菌效果一般，不作考虑。表4药剂对黄精斑点病病原菌抑制结果（数据图）药剂名称Fungicide浓度（g/L、ml/L）Concentration平均菌落直径（mm）Diameterofcolony抑制率（%）Rateofinhibiton53.8%氢氧化铜4210.50.2552.167275.1674.338233.127.693.644.701.2815%吡唑醚菌脂4210.50.2524.4133.1634.8338.4138.9168.7057.4855.3450.7550.1111%精甲·咯·嘧啶4210.50.2530.5836.0043.5845.0048.2660.7953.8444.1242.3038.1230%甲霜·噁霉灵(ml/L)4210.50.2517.0840.5845.1656.5863.0078.1049.9742.1027.4619.2380%烯酰吗啉4210.50.2572.0674.3375.1677.0077.987.614.703.641.280.02CK/78/注：菌落直径均去掉菌饼直径3.2十种药剂对黄精斑点病病菌室内毒力测定为更好的了解药剂对黄精斑点病病原菌抑制作用，对其进行室内毒力测定。测定结果如下表。表5药剂对黄精斑点病病菌的室内毒力测定（数据图)杀菌剂Fungicide毒力回归方程VirulenceregressionequationEC50(g/L、ml/L)EC80(g/L、ml/L)R2(COD)53.8%氢氧化铜y=8.229x--2.67422.324432.705090.9749650%喹啉铜////15%吡唑醚菌脂y=4.8732x+48.9171.917683.333230.9241611%精甲·咯·嘧啶y=5.907x+38.6881.393882.471480.9714172%唑醚·代森联////48%苯甲·嘧啶酯////75%肟菌·戊唑醇////30%甲霜·噁霉灵（ml/L）y=14.151x+21.6981.646163.240360.9236780%烯酰吗啉y=1.8696+0.55211.200372.523450.9567840%嘧霉胺y=15.194x+26.661.200092.314080.936054.结论与讨论本次实验争对贵州省安顺市的黄精斑点病进行室内药剂筛选，采用菌丝生长速率法、十字交叉测量法等方法进行观察记录，并利用originpro等软件对数据进行整合、分析。本次实验选取了市面上常见的十种药剂应用于黄精斑点病病菌病原菌抑制效果研究，分别对其设定了五个梯度浓度，三组重复实验来验证药剂效应。通过对实验抑制率、毒力回归方程等数据分析，并结合上述所给的图表（所选取的杀菌剂的毒力回归方程均通过R2（COD）验证（0.972367-0.97496））可得以下结论：在十种药剂里面，50%喹啉铜（水分散粒剂）、72%唑醚·代森联（水分散粒剂）、48%苯甲·嘧菌酯（悬浮剂）、75%肟菌·戊唑醇（水分散粒剂）对病原菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率最高，所设定的五个梯度浓度抑制率都达到100%，可作为黄精斑点病防治药剂的第一选择，优先推荐进一步进行田间试验。由于防治效果好，抑制率均达100%,无法进行下一步毒力回归方程分析，所以上述的四种药剂均不进行室内毒力测定；其余6种试剂中，40%嘧霉胺EC50为1.20009、EC80为2.31408在剩余药剂里抑制效果最好，其两个高浓度5.6g/L、2.8g/L的含药培养基对黄精斑点病病原菌抑制率达到90%以上，前者更是高达99.03%，但中低浓度抑制效果不佳，未达到50%；15%吡唑醚菌酯EC501.91768、EC803.33323，其五个梯度浓度均高于50%，但抑制率不高，防治效果一般，最高浓度达68.7%；53.8%氢氧化铜EC502.32443、EC802.70509，其五个梯度浓度抑制效果均不佳，最高为33.12%；11%精甲·咯·嘧啶EC501.39388、EC802.47148，4g/L、2g/L两个浓度抑制率达到50%以上，最高达60.79%，其余浓度均不达50%，防治效果一般；80%烯酰吗啉EC501.20037、EC802.52345，其主要防治对象真菌性病害，所以五个梯度浓度对黄精斑点病病原菌抑制效果极差，最高浓度抑制率仅达7.61%；30%甲霜·噁霉灵EC501.64616、EC803.64036，最高浓度抑制率达78.10%，其余均未达到50%。综合分析50%喹啉铜（水分散粒剂）、72%唑醚·代森联（水分散粒剂）、48%苯甲·嘧菌酯（悬浮剂）、75%肟菌·戊唑醇（水分散粒剂）可有效控制黄精斑点病，可以通过科学的田间试验进行科学适配，轮换使用不同作用机制的药以延缓抗药性。参考文献中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第一卷：总论[M].北京：科学出版社，2004.陈晔，孙晓生.黄精的药理研究进展[J].中药新药与临床药理，2010,21(3):328-330.崔阔澍，肖特