CN119385069A 一种大白杜鹃无菌叶片离体再生体系建立的方法 （云南农业大学）

一种大白杜鹃无菌叶片离体再生体系建立养，增殖培养所用的增殖培养基为：WPM+0.5_0.7mg/LTDZ+0.4_0.6mg/LNAA+0.5_1mg/LGA32将大白杜鹃外植体茎段进行清洗、消毒后置于茎段培养基中进行将大白杜鹃外植体无菌叶片接种至再生诱导培养基上诱导GA3+300mg/L代森锰锌+35_4的HgCl2溶液浸泡11_12min+1%KMnO4浸泡9_10min+10%H2O2浸泡3_4min+1200_1500mg/L0.15mg/LTDZ+0.01mg/LNAA+琼脂7.5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，0.1mg/LTDZ+0.01mg/LNAA+琼脂7.+0.6mg/LTDZ+0.05mg/LNAA+0.5mg/LGA3+300mg/L代森锰0.9mg/LNAA+7.5g/L琼脂+30g9.杀菌剂组合在杜鹃离体组织培养过程中的应用，其特征在于，所述杀菌剂组合为3[0002]大白杜鹃(RhododendrondecorumFranch.)将大白杜鹃外植体无菌叶片接种至再生诱导培养基上诱导4+1%KMnO4浸泡9_10min+10%H2O2浸泡3_4min+1200_1500mg/L柠檬酸0.5mg/LGA3+300mg/L[0013]本发明的另一个目的在于提供一种杀菌剂组合在杜鹃离体组织培养过程中的应[0015]通过在增殖培养过程中添加本发明提供的杀菌剂组合下，内生菌污染率降低至图2不同TDZ浓度对叶片诱导出芽的影响图；注：a:0.02mg/LTDZ处理；b:图5不同NAA浓度对大白杜鹃组培苗生根的影响图；注:A:0mg/LNAA处理；B：5照。6处理5污10%H2O2处理下污染率都很低，并且伴有较高的成活率。各处理均能诱导长出新芽，且1%KMnO4各处理下大白杜鹃新芽长势优于其他各[0025]最佳消毒方法：1%KMnO410min+10%H2O24min+1500mg/L柠檬酸，此时污染率为A150.00±11.55abB240.00±5.77abC366.67±8.82bD436.67±6.67a7褐化率较低，绿叶率最高，与其他配方达到极显著差异水平。60天后不定芽芽诱导率0.020.010.10.010.30.01将上述高度为1_2cm芽苗转至增殖培养基中，培养基以WPM培养基为基础，添加[0032]最佳增殖培养基配方为增殖倍数生长状况10.20.013.23±0.23Aa20.60.055.47±0.29Bb310.1无法计数40.20.053.10±0.30Aa50.60.14.9±0.17Bb610.01无法计数70.20.13.30±0.21Aa80.60.015.20±0.21Bb910.05无法计数[0034]大白杜鹃在组培过程中会受到内生细菌的污染，特别是多次继代后污染愈加严8处理代森锰锌(mg/L)硫酸链霉素(mg/L)污染率(%)褐化率(%)成活率(%)00100.00±0.000.00±0.000.00±0.00D1500072.50±10.0090.00±13.60.00±0.00L1037.50±9.000.00±0.0062.5±6.85DL150027.50±6.00100.00±0.000.00±0.00DL23004015.00±6.0022.50±5.5962.5±5.60DL312.50±0.0015.00±5.5072.50±5.85100.00±0.000.00±0.0020.12.07±1.0630.53.27±0.896.22±2.1240.85.17±0.338.03±2.1251.52.11±0.112.89