临床检验分子诊断技术工程师考试试卷及答案

临床检验分子诊断技术工程师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.PCR反应的三个基本步骤依次是______、退火、延伸。2.实时荧光定量PCR中，常用的荧光染料是______。3.核酸提取中，常用的沉淀试剂是______。4.Sanger测序法的核心是引入______终止DNA链延伸。5.基因芯片的基本原理是______杂交。6.用于逆转录PCR（RT-PCR）的关键酶是______。7.临床分子诊断中，最常用的核酸样本类型是______。8.荧光原位杂交（FISH）技术中，探针需标记______。9.数字PCR（dPCR）的核心是将样本______。10.CRISPR/Cas9中，引导RNA（gRNA）的作用是______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.可检测基因点突变的技术是？A.PCRB.实时荧光定量PCRC.测序D.电泳2.核酸提取时去除蛋白质常用的试剂是？A.氯仿B.苯酚C.蛋白酶KD.乙醇3.实时荧光定量PCR中Ct值的含义是？A.循环数B.荧光阈值C.达到阈值的循环数D.产物量4.不适合RNA提取的样本是？A.新鲜血液B.冻存组织C.甲醛固定组织D.唾液5.Sanger测序属于？A.第一代测序B.第二代测序C.第三代测序D.第四代测序6.基因芯片的优势是？A.单样本多靶点B.成本低C.操作简单D.无需标记7.数字PCR的最大优势是？A.定量更准确B.速度更快C.成本更低D.样本量更少8.检测融合基因常用的技术是？A.FISHB.PCRC.测序D.芯片9.核酸电泳中DNA迁移率与分子量的关系是？A.正相关B.负相关C.无关D.随机10.RT-PCR的第一步是？A.逆转录合成cDNAB.PCR扩增C.核酸提取D.荧光检测三、多项选择题（每题2分，共20分）1.分子诊断常用核酸样本类型包括？A.基因组DNAB.mRNAC.miRNAD.病毒RNA2.PCR反应必需成分有？A.模板DNAB.引物C.dNTPD.Taq酶3.实时荧光定量PCR类型包括？A.SYBRGreen法B.TaqMan探针法C.分子信标法D.测序法4.基因测序技术包括？A.Sanger测序B.NGSC.单分子测序D.芯片测序5.分子诊断临床应用包括？A.遗传病诊断B.肿瘤基因检测C.病原体检测D.产前筛查6.核酸提取步骤包括？A.样本裂解B.核酸纯化C.核酸沉淀D.核酸溶解7.FISH技术应用包括？A.染色体异常检测B.融合基因检测C.基因扩增检测D.点突变检测8.数字PCR应用场景包括？A.低丰度突变检测B.拷贝数变异分析C.绝对定量D.基因表达分析9.样本采集注意事项包括？A.避免污染B.及时处理C.低温保存D.样本类型匹配10.RNA提取需避免？A.RNase污染B.蛋白酶污染C.DNase污染D.乙醇污染四、判断题（每题2分，共20分）1.PCR退火温度越高，特异性越强。（）2.实时荧光定量PCR可绝对定量和相对定量。（）3.Sanger测序只能检测短片段DNA。（）4.基因芯片可检测未知序列突变。（）5.逆转录酶具有DNA依赖的DNA聚合酶活性。（）6.FISH只能检测染色体异常。（）7.数字PCR无需标准曲线即可定量。（）8.异丙醇沉淀核酸速度比乙醇快。（）9.所有临床样本都需核酸提取。（）10.CRISPR/Cas9可用于基因编辑和诊断。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述PCR反应的基本原理。2.简述实时荧光定量PCRCt值的含义及意义。3.简述核酸提取的主要方法及适用场景。4.简述基因芯片的基本原理及临床应用。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论临床分子诊断中样本污染的常见原因及防控措施。2.讨论数字PCR与实时荧光定量PCR的临床应用差异。答案部分一、填空题1.变性2.SYBRGreenI3.无水乙醇（或异丙醇）4.双脱氧核苷酸（ddNTP）5.核酸分子6.逆转录酶7.基因组DNA（或RNA）8.荧光素9.分区扩增10.识别靶序列二、单项选择题1.C2.C3.C4.C5.A6.A7.A8.A9.B10.A三、多项选择题1.ABCD2.ABCD3.ABC4.ABC5.ABCD6.ABCD7.ABC8.ABCD9.ABCD10.AC四、判断题1.√2.√3.√4.×5.√6.×7.√8.√9.×10.√五、简答题1.PCR通过模拟体内DNA复制，体外扩增特定片段。核心步骤：①变性（94℃左右，双链解旋为单链）；②退火（温度降至引物Tm值附近，引物与单链互补结合）；③延伸（Taq酶以dNTP为原料，从引物3’端合成新链）。每循环一次，目标片段翻倍，20-30次循环后获得大量目标DNA。2.Ct值是荧光信号达到阈值时的循环数。意义：①与初始模板浓度负相关（模板越多，Ct越小）；②结合标准曲线实现绝对定量；③用于相对定量（需内参校准基因表达差异）；④Ct异常提示污染、模板降解或试剂失效。3.主要方法：①酚-氯仿法（经典，适用于多种样本）；②磁珠法（自动化，适合批量样本）；③硅胶膜法（操作简单，临床常规）；④CTAB法（去除多糖，适用于植物/真菌）。根据样本类型（血液、组织）和下游实验（PCR、测序）选择，磁珠法/硅胶膜法适合临床标准化。4.原理：将已知序列探针固定在载体上，与标记待测核酸杂交，通过信号强度判断靶序列。应用：①遗传病诊断（如地中海贫血突变）；②肿瘤检测（多基因扩增/突变）；③病原体鉴定（如新冠分型）；④药物基因组学（指导个体化用药）。优势是高通量单样本多靶点。六、讨论题1.常见污染：①样本交叉污染（采集/处理接触）；②试剂污染（引物/酶被外源核酸污染）；③气溶胶污染（PCR产物扩散）。防控：①样本处理用一次性耗材，分开操作；②试剂分装避免反复冻融，用无核酸酶试剂；③实验分区（试剂、样本、扩增、检测区独立）；④用滤芯吸头，扩增产物单独处理；⑤设置阴性对照排查污染。2.差异：①定量方式：qPCR依赖标准曲线（相对/绝对），dPCR无需标准曲线（直接计数拷贝数）；②灵敏度：dPCR可检测0.1%以下低丰度突