基因工程的基本操作程序 高二生物人教版选择性必修三

第3章基因工程

第2节基因工程的基本操作程序1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。你知道转基因抗虫棉抗虫的机制是什么？培育转基因抗虫棉一般需要哪些步骤？

从社会中来

苏云金杆菌与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉提取导入抗虫基因（Bt抗虫蛋白基因）重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的

检测与鉴定(含抗虫基因）（含有并表达抗虫基因）

从社会中来

1.目的基因在基因工程的设计和操作中，用于________________或________________等的基因。改变受体细胞性状获得预期表达产物根据不同的需要，目的基因是不同的，它主要是指_________________。编码蛋白质的基因如：与生物抗逆性、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。目的基因——Bt抗虫蛋白基因（Bt基因

）

第一步：目的基因的筛选与获取Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。【思考2】抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？【思考1】Bt基因的杀虫机理是怎样的？当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。

第一步：目的基因的筛选与获取在基因工程操作前应充分考虑目的基因的安全性等问题！一第一步：目的基因的筛选与获取(1)较为有效的方法之一从相关的___________和___________的基因中进行筛选。已知结构功能清晰用苏云金杆菌制成的生物杀虫剂广泛用于防治棉花虫害对Bt基因的表达产物Bt抗虫蛋白有了较为深入的了解苏云金杆菌的杀虫作用与Bt基因有关掌握了Bt基因的序列信息Bt基因是培育转基因抗虫棉较为合适的目的基因功能清晰已知结构实例：Bt

抗虫蛋白基因（Bt基因）的筛选过程

第一步：目的基因的筛选与获取2.筛选合适的目的基因

第一步：目的基因的筛选与获取2.筛选合适的目的基因测序技术序列数据库序列比对工具DNA测序仪核苷酸序列比对氨基酸序列比对(2)其它方法：

第一步：目的基因的筛选与获取3.目的基因的获取人工合成从基因文库中获取利用PCR获取和扩增目的基因

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因聚合酶链式反应，缩写PCR。名称概念PCR是一项根据

的原理，在

提供参与DNA复制的

与

，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。DNA半保留复制体外各种组分反应条件PCR扩增仪PCR技术是一种在DNA聚合酶作用下体外大量扩增特异DNA片段的技术。该技术由穆里斯等人于1985年发明，穆里斯于1993年获得了诺贝尔化学奖。

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因解旋酶DNA聚合酶要点回顾：体内DNA复制5'端→3'端因为DNA聚合酶只能从5'端向3'端延伸子链。模板：原料：能量：酶：DNA的两条母链4种游离的脱氧核苷酸解旋酶、DNA聚合酶条件ATP特点:边解旋边复制、半保留复制

、多起点双向复制

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因结合体内DNA复制过程，思考PCR的进行需要哪些条件？参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶DNA母链4种脱氧核苷酸DNA聚合酶引物提供DNA复制的模板合成DNA子链的原料打开DNA双链催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸体外用高温代替一段已知目的基因的核苷酸序列dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP),既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）也需要在缓冲液中加Mg2＋

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因引物：是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。用于PCR的引物通常为20~30个核苷酸。在细胞中为一段单链RNA，在PCR中为一段人工合成的单链DNA。引物为DNA聚合酶提供游离的3′端，使DNA聚合酶从3′端延伸子链。（DNA聚合酶不具有从头合成子链的功能）-3′5′-3′--5′子链延伸-5′3′-5′--3′子链延伸（引物的5′端与模板链3′端互补配对）引物作用：

第一步：目的基因的筛选与获取若想获得以下已知序列的DNA片段，设计了一些PCR引物，应选用的PCR引物是

(从引物①②③④中选)DNA序列(虚线处省略了部分核苷酸序列)已知序列PCR引物①5′AACTATGCGCTCATGA3′②5′GCAATGCGTAGCCTCT3′③5′AGAGGCTACGCATTGC3′④5′TCATGAGCGCATAGTT3′①③4.利用PCR获取和扩增目的基因

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因耐高温的DNA聚合酶DNA模板引物缓冲溶液四种脱氧核苷酸条件:微量离心管控制温度（dNTP）（2种）一般添加Mg2+（激活真核细胞和细菌的DNA聚合酶）PCR扩增仪

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因PCR过程:高温(95℃)变性低温(50℃)复性中温(72℃)延伸PCR过程可以在PCR扩增(PCR仪)中自动完成。

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因PCR过程:耐高温的DNA聚合酶(Taq酶）4种脱氧核苷酸（dNTP）引物待扩增的DNA片段（模板）5’5’变性复性延伸温度上升到90℃以上，双链DNA解聚为单链当温度下降到50℃左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。温度上升到72℃左右时，溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。第二轮循环的产物第三轮的产物3’5’3’5’3’5’3’5’第一轮循环的产物3’5’3’5’由于一个循环得到的产物又可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍。即成指数形式扩增（约为2n，其中n为扩增循环的次数）。

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因PCR过程:问题1：复性的过程一定是引物与DNA模板链结合吗？①引物与DNA模板结合②解开的两条模板链重新结合③引物与引物结合加入过量的引物，引物与模板之间的碰撞结合机会，远远高于模板互补链之间的碰撞机会。在设计引物时，避免引物之间的碱基序列互补问题2：怎样提高复性时引物与模板配对结合率，

而不是模板链之间配对结合呢？问题3：如何避免引物与引物结合？

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因要求：1.写出互补链的碱基序列，并注明方向。2.从①－④中选择2个合适的位置设计引物，写出引物的部分序列，并注明方向。5’-ATG……ATCGAGACCGGT……TAA-3’3’-TAC……TAGCTCTGGCCA……ATT-5’①②③④3’…ATT-5’5’-ATG…3’问题4：根据查询的Bt基因编码链序列，尝试设计引物。1.PCR扩增时至少需要___种引物，原因是________________________________________22.设计引物的要求：2种引物之间不能发生碱基互补配对，原因是：_______________________________。防止引物之间配对，导致引物不能与模板链结合DNA的两条链是反向平行的（序列不同）

第一步：目的基因的筛选与获取4.利用PCR获取和扩增目的基因5’3’5’5’第一次循环第二次循环3’5’第三次循环3’3’1.利用PCR技术扩增目的基因，在第几次循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段（即出现完整的目的基因）？[思考讨论]2.利用PCR技术扩增目的基因设计引物时需要知道目的基因的全部核苷酸序列吗？只需要根据目的基因两端的部分核苷酸序列设计引物（无需知道全部序列）前提：模板DNA的起始数量为1，且引物与DNA分子的中间部位结合时①子代DNA分子数：______个②子代DNA分子中含模板链DNA分子数为：__个③子代DNA分子中含引物的DNA分子数为：___个④同时含两条引物的DNA分子数：______个⑤子代DNA分子中含引物A（或B）的DNA分子数为：

个⑥子代DNA分子中等长链DNA分子数为：

个⑦复制过程中共需引物__________个⑧第n次复制需要引物____个2n2n-22n-122n前提：模板DNA的起始数量为1，且引物与DNA分子的中间部位结合时2n-2n2n＋1-22n第1次扩增产物第2次扩增产物第3次扩增产物PCR不能直接扩增RNA，应先将RNA逆转录为cDNA后进行PCR扩增。（逆转录PCR，简称RT-PCR）[P79旁栏思考]用PCR可以扩增mRNA吗？①逆转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA链，形成RNA-DNA杂交分子；②核酸酶H降解RNA-DNA杂交分子中的RNA链，使之变成单链DNA；③以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子，即cDNA。DNA聚合酶不能识别RNA序列

第一步：目的基因的筛选与获取5.PCR扩增产物的鉴定琼脂糖凝胶电泳P84

DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在电场的作用下，这些带电分子会向与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就叫电泳。

较小的DNA片段在凝胶中的移动相对容易，较大的DNA片段移动难。

第一步：目的基因的筛选与获取5.PCR扩增产物的鉴定思考苏云金芽孢杆菌Bt基因转基因棉花×就算可以进行转录和翻译成蛋白质，游离的DNA片段也无法随着细胞分裂进行复制，导致子代细胞不再含有目的基因。游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解。

构建基因表达载体是基因工程的核心步骤！使目的基因在受体细胞中稳定存在，且可以遗传给下一代；使目的基因能够在受体细胞中表达和发挥作用。☛目的：DNA复制的起始位点位于基因的上游；RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。位于基因的下游；终止转录便于重组DNA分子的筛选和鉴定。能控制表达所需要的特殊性状如：抗生素抗性基因，荧光蛋白基因等。载体≠表达载体：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段，但是表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。一至多个限制酶切位点供外源DNA片段插入

第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）

第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）

项目启动子终止子起始密码子终止密码子本质位置作用DNA片段DNA片段mRNA上三个相邻碱基mRNA上三个相邻碱基基因上游基因下游mRNA首端mRNA尾端RNA聚合酶识别和结合的部位,驱动基因转录出RNA决定转录的结束翻译的起始信号决定翻译过程的结束启动子、终止子、起始密码子、终止密码子的比较目的基因限制酶切割位点标记基因启动子限制酶切割位点终止子复制原点①

用限制酶切割载体，使其出现切口。②

用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段。③

将切下的Bt基因片段拼接到载体切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子。限制酶限制酶DNA连接酶重组DNA分子

第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）

图甲图乙方案一：只用PstⅠ切割目的基因和质粒方案二：同时用EcoRⅠ和PstⅠ切割目的基因和质粒哪种方案更好？【练习】限制酶选择技巧：

四、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1.哪个方案更合适？2.构建重组质粒时，能否使用SmaⅠ切割？2.为什么不用PstⅠ一种限制酶切割？不能，SmaⅠ会破坏抗性基因和外源DNA中的目的基因为防止目的基因、质粒自身环化及反向连接a.选目的基因两端和运载体都有的酶切位点；b.所选酶切位点不能破坏目的基因以及标记基因。选择酶切位点的原则：方案二【课堂任务】分析基因表达载体的构建：（1）构建该基因表达载体时，能否用XbaⅠ限制酶切割质粒？为什么？不可以，因为Xba

Ⅰ

位于终止子之后，切割后会影响目的基因的表达。（2）构建该基因表达载体时，能否用SmaⅠ限制酶切割质粒？目的基因呢？不可以，因为SmaⅠ切割会破坏质粒的抗生素抗性基因。不可以，因为SmaⅠ切割同样会破坏目的基因。抗生素抗性基因【课堂任务】分析基因表达载体的构建：（3）构建该基因表达载体时，能否只选用Pst

Ⅰ限制酶切割质粒及目的基因呢？抗生素抗性基因【课堂任务】分析基因表达载体的构建：自身环化片段间的连接目的基因与质粒连接质粒之间或目的基因之间连接反向连接a’aa’aaaa’a’正向连接目的基因aa’载体aa’单酶切：用同一种限制酶切割目的基因和质粒，用DNA连接酶连接后得到哪些分子？1.载体、目的基因的自身环化2.目的基因和载体反向连接弊端：（3）构建该基因表达载体时，能否只选用Pst

Ⅰ限制酶切割质粒及目的基因呢？连接后的产物：①目的基因与质粒正向连接

②目的基因与质粒反向连接

③目的基因自连

④质粒自连√抗生素抗性基因【课堂任务】分析基因表达载体的构建：因此，不能只选用Pst

Ⅰ

限制酶进行切割。（4）与只使用Pst

Ⅰ相比较，使用Pst

Ⅰ

和EcoR

Ⅰ两种限制酶同时处理质粒、

目的基因的优点是什么？抗生素抗性基因【课堂任务】分析基因表达载体的构建：限制酶Pst

Ⅰ切割Pst

ⅠEcoR

ⅠDNA连接酶连接限制酶EcoR

Ⅰ切割限制酶Pst

Ⅰ切割限制酶EcoR

Ⅰ切割Pst

ⅠEcoR

Ⅰ双酶切：目的基因载体①可以防止质粒、目的基因的自身环化连接；②还可以防止目的基因与载体的反向连接。（4）与只使用Pst

Ⅰ相比较，使用Pst

Ⅰ

和EcoR

Ⅰ两种限制酶同时处理质粒、

外源DNA的优点是什么？抗生素抗性基因【课堂任务】分析基因表达载体的构建：核心归纳★

限制酶选择的原则：(1)不破坏目的基因原则：(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：(3)善用双酶切，避免目的基因和质粒自身环化和反向连接如图甲中不选择SmaⅠ作为酶切位点。如图乙中不选择Sma

Ⅰ。✱至少要保留一个标记基因，以用于重组DNA的鉴定和筛选。(4)确保表达载体和目的基因出现相同黏性末端请选择载体构建的最佳方案：方案1：EcoR

Ⅰ方案2：BamH

Ⅰ、Sma

Ⅰ方案3：HindⅢ、EcoR

Ⅰ方案4：BamH

Ⅰ、HindⅢBamH

ⅠEcoR

ⅠHindⅢEcoR

ⅠSma

ⅠG↓GATCC···G↓AATTC————A↓AGCTT···G↓AATTC···CCC↓GGGCCTAG↑G···CTTAA↑G————TTCGA↑A···CTTAA↑G···GGG↑CCC目的基因Sma

Ⅰ终止子启动子复制原点【当堂练习】请选择载体构建的最佳方案：方案1：EcoR

Ⅰ方案2：BamH

Ⅰ、Sma

Ⅰ方案3：HindⅢ、EcoR

Ⅰ方案4：BamH

Ⅰ、HindⅢBamH

ⅠEcoR

ⅠHindⅢEcoR

ⅠSma

ⅠG↓GATCC···G↓AATTC————A↓AGCTT···G↓AATTC···CCC↓GGGCCTAG↑G···CTTAA↑G————TTCGA↑A···CTTAA↑G···GGG↑CCC目的基因Sma

Ⅰ终止子启动子复制原点×××【当堂练习】

载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因，而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，导入了载体并成功表达了的受体细胞才能够生存。如图所示：标记基因的筛选原理

第三步：基因表达载体的构建（核心步骤）导入受体细胞培养加入氨苄青霉素①导入重组质粒的受体细胞存活并繁殖②导入普通载体的体细胞存活并繁殖含有氨苄青霉素抗性基因载体（如质粒）

第二步：基因表达载体的构建（核心步骤）利用2种标记基因的筛选①将转化后的细菌放在含氨苄青霉素培养基上培养，能生长的是含重组质粒的细菌、含空质粒的细菌，如图1、2、3、4、5菌落；②再利用灭菌的绒布影印到含四环素培养基上，不生长的即为含目的基因的菌落，如图1、5。最后，可在含氨苄青霉素的培养基上挑取1、5菌落进行培养。

第三步：将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞的方法：转化的概念：目的基因进入

内，并且在受体细胞内

和

的过程。受体细胞维持稳定表达植物细胞动物细胞微生物细胞农杆菌转化法花粉管通道法（我国科学家独创）（常用）显微注射法Ca2+处理法

第三步：将目的基因导入受体细胞花粉管通道法（我国独创）（植物细胞）②在植物授粉后一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液(含目的基因）滴在花柱切面，使目的基因通过花粉管通道进入胚囊。①用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中；简便经济，但要求花朵较大方法：实例：优缺点：我国“转基因抗虫棉”

第三步：将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法（常用）（植物细胞）

能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力。随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种

植物也取得了成功。农杆菌细胞内含有

，当它侵染植物细胞时，Ti质粒的

可转移至被侵染的细胞，并整合到该细胞的

。2.转化原理：1.农杆菌的特点：T-DNATi质粒大型环状DNA农杆菌T-DNA染色体DNA上单子叶Ti质粒构建基因表达载体时，目的基因该插到Ti质粒哪里？T—DNA上

第三步：将目的基因导入受体细胞表现出新性状的植株植物组织培养第一次导入第二次导入第一次拼接第二次拼接将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上。(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA被拼接到受体细胞的染色体DNA上。(非人工操作)含目的基因的T-DNA导入受体细胞。将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌。Ti质粒T—DNA目的基因构建基因表达载体重组Ti质粒转入农杆菌导入植物细胞（如：叶片、花序等）农杆菌转化法

第三步：将目的基因导入受体细胞方法一：将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。方法二：将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。农杆菌转化的具体方法：体细胞受精卵受体细胞为？受体细胞为？显微注射法（动物细胞）

科学家用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内，如腺病毒载体等。病毒侵染法将含目的基因的表达载体提纯受精卵显微注射含目的基因的受精卵具有新性状的动物雌性动物输卵管或子宫胚胎移植早期胚胎

第三步：将目的基因导入受体细胞①体积大，易操作。②全能性高，易培养成完整个体。

细胞

处理大肠杆细胞

Ca2+感受态

与感受态细胞混合细胞吸收DNA分子基因表达载体使细胞处于一种能够吸收周围环境中的DNA分子的生理状态。注：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性，需要在体外进行再加工。Ca2+转化法（微生物细胞）增加细菌细胞膜的通透性因为没有内质网、高尔基体对蛋白质进一步加工。

第三步：将目的基因导入受体细胞

第四步：目的基因的检测与鉴定不一定！如何判断？在棉花细胞中，重组表达载体是否导入成功？是否可以稳定维持并表达出Bt蛋白？表达出的Bt蛋白是否具有杀虫的功效？

第四步：目的基因的检测与鉴定Bt基因mRNABt蛋白抗虫棉PCR等技术检测抗原-抗体杂交技术分子水平的检测抗虫接种实验个体生物学水平的鉴定以检测

Bt

基因是否导入棉花体内并表达为例：

第四步：目的基因的检测与鉴定1.检测转基因生物染色体DNA上是否插入了目的基因方法1：PCR扩增转基因生物提取DNADNA作为模板PCR操作M：marker；1-阳性质粒；2：原始品系；3-9转Bt品系；转Bt基因品系PCR琼脂糖凝胶电泳检测结果DNA半保留复制原理：是否扩增出目的基因电泳操作

引物如何设定？

第四步：目的基因的检测与鉴定2.检测目的基因是否转录出了mRNA方法：PCR扩增或分子杂交技术转基因生物提取RNARNA作为模板PCR操作电泳是否扩增出目的基因逆转录cDNA提取RNA转膜标记的DNA/RNA探针RNARNA分子杂交(NorthernBlot)流程图

第四步：目的基因的检测与鉴定3.检测目的基因是否翻译成蛋白质方法：

抗原与抗体的特异性结合原理：苏云金芽孢杆菌提取Bt抗虫蛋白注射小鼠体内抗体标记抗体提取蛋白电泳分离抗原抗体杂交转基因生物放射性检测

（杂交带）过程：提取转基因植物的蛋白质+相应抗体→是否出现杂交带抗原—抗体杂交技术（二）个体生物学水平鉴定没有抗虫基因的棉花植株有抗虫基因的棉花植株棉铃虫没有死亡棉铃虫死亡采摘叶片饲喂棉铃虫转Bt基因非转基因

第四步：目的基因的检测与鉴定基因工程的基本操作程序1.目的基因的筛选和获取-前提利用PCR获取和扩增人工合成2.构建基因表达载体-核心目的基因、启动子、终止子、标记基因3.将目的基因导入受体细胞-关键农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物)、

感受态细胞转化法(微生物);4.目的基因的检测与鉴定-保证分子检测：是否插入、转录、翻译个体水平：是否具有抗性以及抗性强度等。小结：

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

1.实验原理①PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合；PCR仪实质上就是一台能够自动调控温度的仪器，一次PCR一般要经历30次循环。②PCR扩增DNA片段还利用了DNA半保留复制的原理。（1）PCR的原理

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

1.实验原理（2）电泳的原理①电泳：DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。一般使用的电泳缓冲液pH=8，DNA分子带负电荷，在电场中DNA便向正极泳动。

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

1.实验原理（2）电泳的原理②鉴定：PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

2.材料用具琼脂糖凝胶电泳装置标准参照物（Marker）DNAMarker是已知的DNA分子大小的片段，在实验时和样本DNA同时进行凝胶电泳，通过对比两者的迁移速率，可以大致估计样本DNA的大小。

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

2.材料用具

探究实践DNA片段的扩增及电泳鉴定

3.方法步骤制备凝胶观察鉴定进行电泳电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，一般配制质量体积比0.8%～1.2%的琼脂糖溶液