CN119405873A 一种负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复合物及其制备方法与应用 （南京中医药大学）

一种负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复本发明针对现有止血材料对大型创伤和严多羟基酚类化合物与丝素蛋白通过自组装进行210.权利要求1~9中任一项所述丝素蛋白复合物的制备方法，包含丝素蛋白构象转变、发生自组装，其中多羟基酚类化合物与丝素蛋白的投料质量比<1:1，即得负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复合物。318.用权利要求10~17中任一项制备方法制备所得的负载多羟基酚类化合物的丝素蛋21.权利要求1~9、18中任一项所述丝素蛋白复合物在制备具有创面愈合、和/或抗感4菌作用，但也可能会使残留的材料在伤口处能引起强烈的炎症反应和阻碍骨组织的再生，5多羟基酚类化合物溶解或混悬后，与步骤(1)中所得丝素蛋白溶液相混合搅拌使其发生自[0012]作为制备方法的一种改进，所述多羟基酚类化合物为难酸混悬液与丝素蛋白共孵育后，所得溶液中丙二醇终浓度为5_20最优选丙二醇终浓度[0017]本发明开发的负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复合物作为一种有效的止血剂，更稳定的力学强度和强健的湿态组织粘附性，相较于其他药物具有更快的血中沉降速度，6[0020]图2～图4血液黏度对比图(n＝3)，各图中A图：*，与空白对照组相比较，*P<[0022]图6载药量对比图(n＝3)。*，与[0023]图7～图8载药量对比图(7[0042]实施例1负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复合物(β_SF_多羟基酚类化合物)的[0046]其中所述多羟基酚类化合物选自水难溶性多羟基酚类化合物，包括鞣花酸(EllagicAcid,EA)、白藜芦醇(丁香酸(SyringicAcid，SA)、芥子酸(SinapicAcid)、芦丁(Rutin，RUT)、杨梅素8[0048]与实施例1不同的是，步骤(1)中所述有机溶剂选用乙醇，所述机械分离方法为基酚类化合物的丝素蛋白复合物；所述机械分离方法优选高速或超高速离心后取沉淀部[0049]采用难溶性多羟基酚类化合物作为原料：制备得鞣花酸_丝素蛋白复合物(β_SF_[0051]所得β_SF_多羟基酚类化合物用生理盐水制备成2mg/mL供试品溶液作凝血效果考载多羟基酚类化合物的丝素蛋白复合物(β_S的复合物的效果优于其与水溶性多羟基酚类化合物的自组9[0054]而在所有复合物中β_SF_EA的凝血效果最佳。这可能与EA的多重氢键与平面结构基酚类化合物和丝素蛋白，制备所得多羟基酚类化合物_丝素蛋白复合物称为SH_SF_多羟量”采用差值法计算，即将EA投料量减去其与SF共孵育后的游离量。用高效液相色谱法(HPLC)分析EA含量，色谱柱采用HederaC18柱，流动相为乙腈:水＝20:80(v/v[0066]接着考察丙二醇浓度对EA载药量的考察，步骤(2)中采用丙二醇作溶剂制备EA混步骤(2)采用丙二醇作溶剂制备EA混悬液，与β_SF共孵育后所得溶液中丙二醇的终浓度为[0069]进一步用实施例3中方法考察不同EA:β_SF投料比对全血黏度的影响，表2中结果[0070]综上所述，β_SF_EA的制备工艺为采用β折叠的SF进行制备，投料比EA:β_SF<1:1构象的转变或投料比EA:β_SF≥1:1都不能够实现EA与β_SF的自组装。EA:β_SF＝1:2(w/w)SF可能通过分子间氢键自组装。X射线衍射[0087]新西兰大白兔适应性喂养一周，在实验前一天晚上禁食。用1％戊巴比妥钠以_1_1_1_1切变率下全血黏[0104]大鼠大腿肌肉创伤止血实验：SD大鼠以1％戊巴比妥钠进行腹腔注射的方式进行显著优于云南白药(P<0.05)和氨甲环酸(P<0.05)，也显著优于EA(P<0.05)与β_SF组(P<到接种有细胞的96孔板中，每组设置六个平行样，之后放入到37℃,5％的CO2细胞培养箱中，培养48h。吸出培养液，PBS清洗两次，加入100μLCCK8溶液(90μLDMEM培养基+10μRGR)OD[0116]我们通过CCK8实验研究了β_SF_EA和EA对L929细胞和LOβ_SF_EA所有组的相对增殖率都高于85根据ISO10993_1的毒性分级标准，表明β_SF_EA不含蛋白酶XIV的PBS溶液为空白样。将样品(n＝3)在PBS溶液和含有0.1μ/m[0125]实施例15负载多羟基酚类化合物的丝素蛋白纳米颗粒(β_SFN_多羟基酚类化合止血颗粒剂。描电镜进行形态学检查，图19B中扫描电子显微镜图(ScanningElectronMicroscope,缘动脉实验中，不论是出血时间还是出血量，β_SFN_EA组都比壳聚糖组有显著效果(P<0.05)。在出血时间上，壳聚糖组平均止血时间为209.0s，β_SFN_EA组平均止血时间为[0152]使用全层皮肤缺损伤口模型评估β_SF_EA单次使用后对后续皮肤创面愈合效果的皮肤打孔器在每只小鼠的背部垫片内建立一个圆管内皮生长因子(VEGF)的免疫荧光检测，探讨β_SFN_EA对创面区域的抗炎和血管生成作用。免疫组化染色检测皮肤创面IL_6、肿瘤坏死因子_α(T动脉非贯穿性伤口止血的同时还具有显著的促进血管组织[0158]SD大鼠以1％戊巴比妥钠进行腹腔注射的方式进行麻醉。将麻醉后的大鼠在解剖在腹壁相应的外侧形成1cm×2cm的腹膜缺损。β_SF_EA组将1mL的β_SF_EA样品置于受伤的[0162]阴性对照组在第7天和第14天表现出严重且无法去除的粘连，观察到腹壁和盲肠