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文档简介

重组DNA基本步骤

第1页重组DNA基本步骤取得目标基因DNA分子体外重组重组DNA分子引入宿主细胞和筛选判定第2页第3页取得目标基因路径限制性内切酶酶切产生待克隆DNA片段人工合成DNA反转录酶酶促合成法聚合酶链(式)反应扩增特定基因片段第4页第5页第6页这么就能够用限制性内切酶把一个基因组DNA分成很多片段，对于原核生物比较小基因组来说，能够直接用标识地探针来获取在经过特定方法，对于比较大基因组，能够先制作基因文库，然后钓取所需要带有目标基因片段。

第7页限制性内切酶对DNA切割方式有两种，一个切割方式是完全酶切，另一个方式为部分酶切。

第8页第9页体外重组连接惯用方法

1黏性末端连接法

2平齐末端连接发第10页第11页平齐末端连接法：

用化学合成法、逆转录酶酶促合成法取得DNA片段或cDNA片段，以及一些限制酶酶切产生DNA片段，称为平齐末端。当然平齐末端可用T4DNA连接酶连接，所需底物浓度高，效率低。所以通常要将平齐末端改造成黏性末端后再行连接。改造方法是加人工接头或结尾第12页第13页这一过程分为两个步骤

1重组DNA引入宿主细胞

2重组体克隆筛选与判定第14页第15页第16页ClicktoeditMaste

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