DB62-T 4575-2022 实验用牛微生物学等级及监测

DB62/T4575-2022实验用牛微生物学等级及监测ICS07.100.01CCSB41甘肃省地方标准DB62/T4575-2022实验用牛微生物学等级及监测（Microbiologicalstandardsandmonitoringofexperimentalcattle）2022年08月16日发布2022年09月16日实施甘肃省市场监督管理局发布前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由甘肃省科学技术厅提出、归口并监督实施。本文件起草单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、甘肃省药品检验研究院、甘肃省畜牧兽医研究所、甘肃省分析测试中心、甘肃省动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：董鹏程、朱喜春、常攀峰、王亮、刘兰、罗金印、李润林、王瑜、王东升、李琪、樊世常、汪文琦。1范围本文件主要规定了实验用牛微生物学等级及监测的术语和定义、等级分类、检测要求、检测程序、检测方法、检测规则和结果判定等。本文件适用于实验用牛微生物学等级及监测。2规范性引用文件本文件引用下列文件中的条款。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。（注：标准原文中规范性引用文件具体条目可参考完整标准文本，此处按公开摘要信息呈现核心引用逻辑）3术语和定义3.1实验用牛（experimentalcattle）经人工饲育，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定以及其它科学实验的牛。3.2普通级牛（conventionalcattle）不携带所规定的人兽共患病病原和牛烈性传染病病原的实验用牛，简称普通牛。3.3无特定病原体级牛（specificpathogenfreecattle）除普通牛应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科学实验干扰大的病原的实验用牛，简称无特定病原体牛（SPF牛）。4微生物学等级分类按微生物学与寄生虫学等级分类，实验用牛分为普通级、无特定病原体级两个等级。5检测要求5.1临床观察实验用牛应外观健康，无异常表现。5.2微生物检测项目参考GB14922.2的规定，确定各等级实验用牛微生物检测项目应符合表1要求。等级病原微生物检测要求普通级口蹄疫病毒（Food-and-mouthdiseasevirus）▲布鲁氏菌（Brucella）●炭疽芽胞杆菌（Bacillusanthracis）○钩端螺旋体（Leptospira）○伯氏疏螺旋体（Borreliaburgdorferi）○贝氏柯克斯体（Coxiellaburnetii）○牛结节性皮肤病病毒○牛病毒性腹泻/粘膜病毒（Bovineviraldiarrheavirus/Mucosaldiseasevirus）●普通级牛轮状病毒（Bovinerotavirus）●副结核分枝杆菌（MycobacteriumaviumSubsp.paratuberculosis）●普通级胎儿弯曲杆菌（Campylobacterfetus）●无特定病原体级牛副流感病毒3型（Bovineparainfluenzavirustype3）●牛呼吸道合胞体病毒（Bovinerespiratorysyncytialvirus）●牛传染性鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus）●牛白血病病毒（Bovineleukemiavirus）●牛荚膜A、B型多杀性巴氏杆菌（BovinepasteurellamultocidacapsulartypeAandtypeB）●牛支原体（Mycoplasmabovis）●衣原体（Chlamydia）●牛流行性出血热病毒（Bovineephemeralfevervirus）○无特定病原体级蓝舌病病毒（Bluetonguevirus）○注1：▲应检测项目，普通级可免疫，无特定抗原抗体实验用牛和无特定病原体级不可免疫。注2：●应检测项目。注3：○必要时检测项目。5.3检测项目分类5.3.1必须检测项目在进行实验用牛质量评价时必须检测的项目。普通级可免疫接种疫苗，无特定病原体级不能免疫接种疫苗。5.3.2必要时检测项目申请生产许可证、从国内外引进实验用牛、疑有该病原体感染和实验特殊需要时应检测的项目。普通牛规定的必须检测和必要时检测项目，在无特定病原体牛中为必须检测项目。6检测程序检测程序见图1。编号→保定→外观检查→采血、采集耳后/背部毛发或皮屑、采集鼻拭子/咽喉拭子/肛拭子（或新鲜粪便）→检测→结果判定→判定结论图1检测程序7检测方法检测方法应符合表2要求。微生物检测标准检测方法适用范围口蹄疫病毒GB/T18935抗体检测、抗原检测（食道-喉部分泌物）、核酸检测（组织）相应检测样本GB/T22915核酸检测（血样、咽喉拭子）血样、咽喉拭子GB/T27528核酸检测（水泡液）水泡液布鲁氏菌GB/T18646抗体检测（血清或奶样）血清、奶样SN/T1088核酸检测（阴道拭子、奶样、组织）阴道拭子、奶样、组织牛分枝杆菌GB/T18645皮内变态反应试验、抗原检测（血样、奶样、粪便或病料）血样、奶样、粪便、病料GB/T27639核酸检测（血样、奶样、粪便或病料）血样、奶样、粪便、病料炭疽芽胞杆菌NY/T561抗原检测（血液、病变部位的水肿液或渗出液）、核酸检测（血液、病变部位的水肿液或渗出液）血液、病变部位的水肿液、渗出液钩端螺旋体GB/T14926.46抗体检测相应检测样本SN/T3741.1抗原检测（血液、尿液、组织）血液、尿液、组织伯氏疏螺旋体SN/T3392抗体检测、抗原检测（血样或蜱）、核酸检测（血样或蜱）血样、蜱贝氏柯克斯体SN/T1087抗原检测（阴道分泌物、奶样、粪便、动物组织或流产胎儿）、抗体检测阴道分泌物、奶样、粪便、动物组织、流产胎儿牛结节性皮肤病病毒GB/T39602抗体检测（血清）、核酸检测（皮肤组织、抗凝血、口鼻分泌物、精液）血清、皮肤组织、抗凝血、口鼻分泌物、精液注：表中未列出的微生物检测方法，参照对应病原微生物的国家、行业标准执行；本标准附录A至附录D规定了部分病原微生物的专项检测方法（详见标准完整文本）。8检测规则（一）检测频率：普通级实验用牛每年至少检测1次；无特定病原体级实验用牛每6个月至少检测1次。（二）抽样方法：抽样应随机进行，抽样数量根据实验用牛饲养规模确定，小型饲养场（≤50头）抽样比例不低于10%，中型饲养场（51-200头）抽样比例不低于8%，大型饲养场（＞200头）抽样比例不低于5%，最低抽样数量不低于3头。（三）检测样本：按本标准6.0规定采集血样、拭子、毛发、粪便等样本，样本采集后应妥善保存、及时送检，避免样本污染或病原微生物失活。9结果判定9.1临床观察判定：外观健康、无异常症状者，临床观察合格；出现精神萎靡、食欲减退、呼吸困难、皮肤病变、腹泻等异常症状者，临床观察不合格。9.2微生物检测判定：必须检测项目中，任意一项检测结果阳性，判定该个体不合格；必要时检测项目，根据检测目的和实验需求判定，若检测结果阳性，需结合实际情况评估是否合格。9.3个体判定：临床观察合格且微生物检测符合对应等级要求者，判定该个体合格；临床观察不合格或微生物检测不符合对应等级要求者，判定该个体不合格。10判定结论10.1批次判定：抽样检测中，不合格个体数≤抽样总数的5%，且无必须检测项目阳性个体，判定该批次合格；不合格个体数＞抽样总数的5%，或存在必须检测项目阳性个体，判定该批次不合格。10.2等级判定：合格个体根据微生物检测结果，判定为对应等级的实验用牛；不合格个体需隔离观察、重新检测，或按相关规定处理，不得作为实验用牛使用。附录A（规范性）牛副流感病毒3型RT-PCR诊断方法（详见标准完整文本，主要规定了牛副流感病毒3型的RT-PCR检测原理、试剂材料、仪器设备、操作步骤、结果判定等内容）附录B（规范性）牛荚膜A、B型多杀性巴氏杆菌多重PCR诊断方法（详见标准完整文本，主要规定了牛荚膜A、B型多杀性巴氏杆菌的多重PCR检测原理、试剂材料、仪器设备、操作步骤、结果判定等内容）附录C（规范性）牛呼吸道合胞体病毒套式RT-PCR检测方法（详见标准完整文本，主要规定了牛呼吸道合胞体病毒的套式RT-PCR检测原理、试剂材料、仪器设备、操作步骤、结果判定等内容）附录D（规范性）牛轮状病毒多重半套式RT-PCR检测方法（详见标准完整文本，主要规定了牛轮状病毒的多