动物细胞融合技术与单克隆抗体+高二下学期生物人教版选择性必修3

二、动物细胞融合技术与单克隆抗体本节聚焦:什么是动物细胞融合技术？单克隆抗体是如何制备的？在临床上有哪些应用？第2.2节

动物细胞工程A细胞B细胞纤维素酶果胶酶1.去壁：酶解法正在融合的原生质体再生出细胞壁2.诱融物理法：化学法：电融合法、离心法聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高PH融合法等脱分化再分化移栽杂种植株愈伤组织A原生质体B原生质体移栽后的植株植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术植物组织培养原生质体融合（植物细胞的全能性）（细胞膜的流动性）37℃40min你还里的哪些动物细胞融合实例？

回顾旧知自然状态：卵细胞和精子相互识别，融合成为受精卵的过程细胞融合红色荧光染料标记膜蛋白绿色荧光染料标记膜蛋白人细胞小鼠细胞该实验说明：细胞膜具有流动性1.概念：2.原理：3.融合方法：4.意义：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。细胞膜的流动性PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。（化学法、

物理法、

生物法

）突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。动物细胞融合特有杂交细胞：具有原来两个或多个细胞的遗传信息动物细胞融合技术一动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合

相关信息灭活：指用物理或化学手段使病毒失去感染能力（无感染性），但是并不破坏病毒的抗原结构（有抗原性）。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活的仙台病毒无感染力，但有抗原性。所谓灭活的HVJ是RNA已经完全失活，只留下细胞膜融合能力的衣壳蛋白包膜活性。仙台病毒的HN蛋白可与细胞膜外的受体结合，通过F蛋白的作用，引起细胞膜融合基本原理在于仙台病毒含有细胞表面受体的结合位点，通过细胞表面吸附（步骤1），细胞通过HVJ-E相互连接（步骤2），可以促使不同细胞凝聚，最终使细胞膜利用强疏水性结合力进行相互融合（步骤3）。直接产生这种作用的部位是HVJ病毒的外壳，而不是内部的RNA。（2023·湖北·统考高考真题）添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是

。使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合【p49旁栏思考】19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？肺结核：一种由结核分枝杆菌感染引起的呼吸系统传染病。天花：由天花病毒引起的严重传染病。麻疹：由麻疹病毒感染引起的急性呼吸道传染病。病毒诱导了多个体细胞的融合，形成了多核细胞。肺结核病人病理切片1.视频中了解到针对新冠肺炎真正的特效药是什么？针对新冠病毒的单克隆抗体。Y形抗体抗体：在抗原物质的刺激下，由浆细胞产生的，可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中。什么是抗体？二、单克隆抗体每个B淋巴细胞活化增殖后只分泌

特异性的抗体一种抗原决定簇：抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。由血清中提取的抗体是由不同浆细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。抗体不纯

抗原动物体内注射浆细胞

抗体血清多克隆抗体刺激反复注射1.传统方法缺点：产量低、纯度低、特异性差。克隆血清多克隆抗体单克隆抗体刺激必须克隆单一B细胞（如：B3）产生单一抗体——单克隆抗体。问题：怎样获得针对某种蛋白质特异性抗体呢？不能那么我们是否可以通过大量的体外培养B细胞来获得单克隆抗体?因为B细胞（含浆细胞）是高度分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间就会死亡正常的B淋巴细胞在培养基中仅能存活5～7天，无需特别筛选1975年米尔斯坦和柯勒1984年获得诺贝尔生理学或医学奖杂交瘤技术B细胞在体外培养下是没办法无限增殖的，那谁可以呢？

——癌细胞（肿瘤细胞）！如果把这两种细胞进行融合，那所得到的融合细胞既能大量增殖，能产生足够数量的特定抗体。（1）注射特定抗原免疫小鼠2.单克隆抗体的制备从小鼠的体内（如：脾脏）获得相应的B细胞。这时候获得的是针对一种抗原的多种B细胞（1.2.3.4）。人体最大的免疫器官是脾脏脾是人体最大的外周免疫器官。脾实质分为白髓和红髓，前者由动脉周围淋巴鞘、淋巴滤泡和边缘区组成，主要分布B淋巴细胞、T淋巴细胞及巨噬细胞，后者脾索和脾血窦组成，主要含B淋巴细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。脾细胞中B淋巴细胞约占50%，因此脾作为实验材料。①②③④⑤融合：3种未融合：2种B、瘤B-B、B-瘤、瘤-瘤（2）诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合杂交瘤细胞的特点：既能无限增殖，又能产生特异性抗体。是B细胞突变形成的肿瘤细胞，可以无限增殖能分泌抗体可以用聚乙二醇（PEG）,灭活病毒和电激等进行诱导如何诱导融合？而我们需要的是杂交瘤细胞，怎么把它挑出来呢？多种杂交细胞及未融合的细胞诱导

融合小鼠骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞给小鼠注射特定抗原提取（产生抗体）（能无限增殖）

归纳骨髓瘤细胞细胞融合

注射抗原B淋巴细胞B细胞BB融合B瘤融合

瘤瘤融合瘤细胞筛选杂交瘤细胞在选择培养基中停止生长B淋巴细胞培养几天后死亡（3）筛选杂交瘤细胞：选择性培养基多种杂交细胞及未融合的细胞诱导

融合小鼠骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞给小鼠注射特定抗原提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基（既能迅速大量增殖，又能产生抗体）（产生抗体）（能无限增殖）

归纳（2023·湖北·统考高考真题）在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对

和

生长具有抑制作用。未融合的亲本细胞

融合的具有同种核的细胞怎么把不同种类的杂交瘤细胞给区分开呢？常用的是稀释，倒入多孔细胞培养板培养，稀释度要保证每个孔内不多于一个细胞多孔细胞培养板（每一个孔尽量只接种1个杂交瘤细胞进行培养）杂交瘤细胞抗体检测克隆化培养多孔细胞培养板（4）克隆化培养和抗体检测用标记的抗原检测每个小孔上清液第二次筛选：原理：抗原-抗体杂交这里有三个孔都可以产生目标抗体。为了得到目标抗体进行检测就是的“抗体检验”。“阳性”是一种术语，代表“存在”;“阴性”代表“不存在”。“检验阳性”的意思就是有这种抗体。被检验为阳性的孔称为“阳性孔”（2023·湖北·统考高考真题）(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是

。通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞（2025·湖南·高考真题）(2)制备抗蛋白A单克隆抗体用蛋白A对小鼠进行免疫后，将免疫小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导融合的常用方法有

（答出一种即可）。选择培养时，对杂交瘤细胞进行克隆化培养和

，多次筛选获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。体外培养或利用小鼠大量生产的抗蛋白A单克隆抗体，可用于非洲猪瘟的早期诊断。聚乙二醇（PEG）融合法（或灭活病毒诱导法、电融合法）

抗体检测多种杂交细胞及未融合的细胞诱导

融合小鼠骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞给小鼠注射特定抗原提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞克隆化培养、抗体检测（既能迅速大量增殖，又能产生抗体）（产生抗体）（能无限增殖）（可进行多次）

归纳体内培养：从小鼠腹水中提取。体外培养：从培养液中提取。（5）提取单克隆抗体单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并可能大量制备（2022·辽宁·统考高考真题）(4)用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行

培养。用

技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集

，提取单克隆抗体。细胞培养液

克隆化

抗原抗体杂交

应用到的技术：原理：

细胞膜具有一定的流动性、细胞增殖多种杂交细胞及未融合的细胞诱导

融合小鼠骨髓瘤细胞多种B淋巴细胞给小鼠注射特定抗原提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔大量单克隆抗体克隆化培养、抗体检测（既能迅速大量增殖，又能产生抗体）（产生抗体）（能无限增殖）从腹水中提取从培养液中提取（可进行多次）动物细胞融合动物细胞培养

归纳（2025·黑吉辽蒙卷·高考真题）下图是制备抗白细胞介素-6（IL-6）单克隆抗体的示意图。下列叙述正确的是（

）A．步骤①给小鼠注射IL-6后，应从脾中分离筛选T淋巴细胞B．步骤②在脾组织中加入胃蛋白酶，制成单细胞悬液C．步骤③加入灭活病毒或PEG诱导细胞融合，体现了细胞膜的流动性D．步骤④经过克隆化培养和抗体检测筛选出了杂交瘤细胞C（2025·甘肃·高考真题）肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种细胞因子，高浓度时可以引发疾病。研究者利用细胞工程技术制备了TNF-α的单克隆抗体，用于治疗由TNF-α引发的疾病，制备流程如下图。下列叙述正确的是（）A．①是从小鼠的血液中获得的骨髓瘤细胞B．②含未融合细胞、同种核及异种核融合细胞C．③需用特定培养基筛选得到大量的杂交瘤细胞D．④需在体外或小鼠腹腔进行克隆化培养和抗体检测B只选择不扩增骨髓例题：单克隆抗体是指（

）A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体B.

单个B淋巴细胞增殖产生的抗体C.

单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体D.

单个抗体通过克隆化，产生大量抗体单克隆抗体：由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质单一、灵敏度高、特异性强的抗体。例题：用a表示骨髓瘤细胞，b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别为（）A.a、aa、ab、bb、b→a、aa、ab→ab培养B.a、aa、ab、bb、b→ab、bb、b→ab培养C.a、aa、ab、bb、b→ab→产生特定抗体的ab培养D.a、aa、ab、bb、b→aa→能无限增殖的aa培养第一次筛选：选择性培养基→获得杂交瘤细胞。第二次筛选：抗体检验→获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。3.单克隆抗体的应用全球销量排名前10位的药物中，有5个是单抗药物乙肝测定试剂艾滋病检测试剂血型检测试剂新冠病毒检测试剂准确、高效、简易、快速原理是抗原-抗体杂交用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体制备的早早孕诊断试剂盒，在第八天就可以做出诊断，灵敏度高，比较简易，快速。如果是乙型肝炎患者，体内就会有某些蛋白质，可制备乙型肝炎的核心抗体，然后用抗体