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3动物源性食品中弓形虫检测方法NY/T573DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）ITS：内转录间隔区（InternalTranscribedSpacePBS：磷酸缓冲盐溶液（PhosphateBufferedSaliPCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReactioqPCR：实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePolymeraseChainRe5.1.1采样环节：在不同环节进行采样，包括屠宰环节（屠宰场）、销售环节（超市、农贸a)热鲜肉：畜禽肌肉（不同部位）、内脏（肝脏、脾脏、b)冷冻肉类及其制品（腌制肉、火腿、腊肉）；4），取出热鲜肉或冷冻肉类及其制品（需先解冻除去脂肪和和结缔组织，进行多点取样（至少3样品加入2~3颗陶瓷珠或不锈钢珠，用组5提取好的样品DNA，用核酸检测仪测定并记录在260nm和280nm的吸光度。将提取的DNA适7.1.8核酸浓度测定仪（如紫外-可见分光光度计、7.2.1磷酸盐缓冲液（PBS按照A.1。7.2.310mg/mL溴化乙锭（EB见附录A.3）或同类核酸染料。7.2.86×DNALoadingb组质粒DNA（浓度为104copies/μL以上）。阴性质控对照为不含弓形虫速殖子6样品；或含有靶基因序列的重组质粒DNA，浓度在1），阳性对照应出现302bp条带，阴性对照无条带，判定试对于首次检测为阳性的样品，建议使用荧光定量PCR方法或对PCR产物进8.2.1实时荧光定量PCR含TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺的即用型预混液（探针法，2×)。7阳性对照Ct值<26，并出现特异性扩增曲线；阴性），疑似：当样品36<Ct<40，且出现特征性的扩增曲线做3个重复；复检后至少2个重复反应有特异性阳性曲线且C8A.3SYBRSafe（10,000×浓缩液）A.4琼脂糖凝胶（1.0%）9外引物：NC1F：5'-TGCGGAAGGATCATTCACG-3'NC1R：5'-CCGTTACTAAGGGAATCATAGTT-3'ITS1R：5'-AGTTAGGAAGCAATCTGAAAG参考刚地弓形虫RH株17S,5.8S,26弓形虫DNAPCR检测结果电泳参照图见图B.1。参考刚地弓形虫repetitiveDNA基因序列（GenBank登录TTGACTCCGGCCCAGCTGCCTCTGTCGGGATGAGACCATTTTTTTTTGTTTTTTCACAGGCGAGCTCGCCTGTGCTTGGAAGGCGAGGGTGA

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