CN119432734A 细胞组合物、制备方法及其应用 （云南精准检验有限公司）

获得；第一激活采用CD3单抗；第二激活采用：靶细胞经HLA高分辨分型筛选后获得。本发明提供了一种人体外激活免疫细胞制剂对肿瘤细胞27.如权利要求1至6任一项所述细胞组合物的8.如权利要求1至6任一项所述的细胞组合物和/或如权利要求7所述制备方法获得的细胞组合物在制备检测效应细胞对靶细胞杀伤活S1：所述效应细胞第一激活：将所述PBMC细胞接种于预先包被所述CD3单抗的培养载且所述HLA_A位点分型、所述HLA_B位点分型和所述HLA_C位点分型的等位基因的分布频率S5：标记有检测信号的所述靶细胞的构建：将34[0002]人体外激活免疫细胞制剂是利用抗原呈递细胞结合CD3单抗及特定细胞因子体外5所述细胞因子的浓度为：600IU/mL的rhIL_2、60IU/mL的rhIL_4、6000300IU/mL的rhTNF_α和6000IU/mL的rhIFN[0017]在本发明的一些实施方案中，上述细胞组合物中，所述靶细胞包括：A549细胞、mL的人干扰素γ。[0022]本发明还提供了上述细胞组合物的制备方法，将所述效应细胞接种于所述靶细γ。[0027]本发明还提供了上述细胞组合物和/或上述制备方法获得的细胞组合物在制备检6频率不少于2.500%的肿瘤细胞系为所100~200μg/mL的重组人白介素_2和频率不少于2.500%的肿瘤细胞系为所述靶细胞，获得标记有检测信号的所述靶细胞；所述检测信号包括荧光蛋白和/或荧光素78[0064]图4示体外激活的免疫细胞制剂对HCC827_Luc_GFP细胞不同效靶比的杀伤情况图[0065]图5示体外激活的免疫细胞制剂对HCC827_Luc_GFP细胞不同共培养时间的杀伤情[0066]图6示体外激活的免疫细胞对HCC827_Luc_GFP细胞不同效靶比的杀伤作用（共培[0067]图7示体外激活的免疫细胞对HCC827_Luc_GFP细胞不同共培养时间的杀伤作用以及所述叙述的物体中的两者或更多者的各种不同组合，除非从上下文和用法中另有理何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于本发明的实践是9[0085]1.1.2单个核细胞于无血清培养基中以1×106/mL的浓度接种于预先包被CD3单[0105]取工作库细胞A549细胞、H1975细胞、H1299细胞、PC_9细胞、NCI_H1975细胞、HCC827细胞进行HLA精度为4分位[0109]4.1含绿色荧光蛋白基因、荧光素酶基因pCDH_MSCV_MCS_Luc_EF1α_GFP_T2A_[0119]1取3管SubcloningEfficiency™DH5α™感受态细胞各50μL，分别加入pCDH_gpMD2G的三质粒分别溶于1mLOPTI_MEM中，混匀制成转染液1；取48μLInvitrogenLipofectamine™2000转染试剂稀释于1mL的OPTI_MEM混匀制成转染液2，再室温放置10~15min后形成DNA_Lipofecta养皿放入5%CO2培养箱中培养8~12h，弃去含有转染液的培养基，再添加20mL~25mL含有[0129]1取出工作库Jurka细胞，37℃复苏后，使用含有10%FBS、1%丙酮酸钠的RPMI[0130]2加入10_1至10_5不同稀释度的病毒上清液0.5mL，另3孔350g离心5min，弃上清。再用200~500μLCellstainingbuffer重悬细胞沉淀，随后用BeckmanCytoFLEX流式细胞仪进行上样检测。采用其配套CytExpert2.5软件获取样本数22[0134]4.3.3待细胞汇合度90％转板至T25扩大培养，使用嘌呤霉素筛选HCC827_Luc_GFP抗性细胞，待细胞汇合度再次达到90％左右通过荧光显微镜拍照检测荧光。使用Imag滴=细胞阳性率×转导时的细胞总数×病毒稀释倍数/病毒体积计算为1.83×107个GFP[0145]将按照实施例4制得的HCC827_Luc_GFP复苏后，直接铺板或复苏后培养48~72h后2[0157]通过带化学发光检测模块528/20nm的多功能酶标仪进行发光测定的平均荧光值[0181]实施例6一种人体外激活免疫细胞制剂对肿瘤细胞杀伤活性的检测方法适用性