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细胞的制备方法及其在细胞有效性检测上疫细胞制剂机理，以分泌颗粒酶B的Tc细胞亚群25.如权利要求1至4任一项所述培养方法获得的细胞在制备检测免疫细胞制剂体外有3[0002]人体外激活的免疫细胞制剂是一种体外激活的的肿瘤特异性非基因改构自体免4[0022]本发明还提供了上述培养方法获得的细胞在制备检测免疫细胞制剂体外有效性[0028]在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述Tc细胞亚群包括：CD3+CD8+5以及所述叙述的物体中的两者或更多者的各种不同组合，除非从上下文和用法中另有理何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于本发明的实践是述的检测方法根据人体外激活的免疫细胞制剂特性，采用两步刺激刺激方式，并以CD69+6[0067]步骤7所述胞内抗体为CD69荧光抗体、CD44荧光抗体及颗粒酶B荧光抗体。以CD69CD44双阳性细胞比率不小于90%作为方法系统性内控指标，评估待检细胞活性是否符7[0073]1.1.2单个核细胞于无血清培养基中以一定的浓度接种于预先包被CD3单抗的[0085]将实施例1制得的冻存的人体外激活的免疫细胞制剂取出，夹住置于38.5℃恒温8[0097]用1×破膜缓冲液100μL/管重悬固定破膜后的细胞，每管加入胞内的荧光标记抗体及胞内同型对照，样本管加入颗粒酶B、CD69和CD44，抗体加量各2μL，室温避光20[0099]使用流式细胞仪进行检测，调节电压使阴性区内细胞百分比大于98圈取目标细胞的含量为93.04%，细胞刺激较为成功，CD3+CD8+GranzymeB+/CD3+CD8+占比的含量为[0104]表1的结果显示，不同密度的人体外激活的免疫细胞制剂在不同培养时间下显示9[0109]图1~图4结果显示，未进行刺激组，未经过刺激和阻断，CD44、CD69双阳比率为[0119]根据实施例2优化后的测定方法，通过检测CD3+CD8+GranzymeB+/CD[0132]结果显示，特异性各质控样本CD3+CD8+GranzymeB+/CD3+CD8+回收率分别为性这4个方面进行方法验证，验证结果显示本发明方法可用于人体外激活的免疫细胞制剂

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