2026届高三生物二轮复习PCR+微专题

破解PCR两大难点：引物设计与电泳图谱应用问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升多种霉菌能产生T-2毒素污染饲料，引起家猪中毒｡我国科学家将C3A酶基因导入家猪受精卵内，获得的转基因家猪具有降解T-2毒素的能力｡C3A酶含有R和Q两个功能区，质粒、C3A酶基因及两个功能区对应序列的相关结构如图1、2所示。为使目的基因与载体正确连接，科研人员使用PCR技术在CA3基因的两端加上限制酶识别序列，扩增目的基因时选用的引物组合是______｡引物1：5'-AAGCTTTCTGTT......-3'引物2：5'-AAGCTTCTTGAT......-3'引物3：5'-GAATTCCTTGGA.....-3'引物4：5'-GAATTCTCTGTT......-3'问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升扩增目的基因时选用的引物组合是______｡引物1：5'-AAGCTTTCTGTT......-3'引物2：5'-AAGCTTCTTGAT......-3'引物3：5'-GAATTCCTTGGA.....-3'引物4：5'-GAATTCTCTGTT......-3'T21(1)班级均分/得分率

0.34/17.02%年级均分/得分率0.39/19.39%问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升近三年PCR高考真题汇总年份省份2023年全国甲卷（四川、广西、贵州、西藏）T37、广东T20，福建T12，江苏T22，湖南T19，湖北T18，河北T22，山东T25，浙江T19，辽宁T25，重庆T12，北京T19，天津T162024年江西T19，山东T5、T22、T25，湖南T15、T17、T18，湖北T22，河北T23，福建T17，浙江T19、T20，安徽T19，山西、河南、云南、新疆T5、T35，黑吉辽T25，广西T21，贵州T21、海南T20、北京T19、天津T16。2025年江西T21，四川T19，陕、山、宁、青四省T21，西藏T11，黑吉辽内四省T25，甘肃T21，山东T25，河南T20，湖南T21，云南T18，浙江T23，安徽T19，T20，河北T15，T23，广东T7，江苏T22，T23，北京T21。1.（2025四川.T19）用PCR技术从杆菌M2基因组中扩增lrcA-lrcF´目的基因时，应选用________引物。

注：F1、F2、F3和F4为与相应位置的DNA配对的单链引物，“→”指引物5-3方向。2.（2025湖南.T21）为确定基因A已连接到质粒中且插入方向正确，应选用图中的一对引物___________对待测质粒进行PCR扩增，预期扩增产物的片段大小为______bp。F2、F4问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升782P1、P3

小结

只扩增目的基因用: ______检测目的基因是否正向插入载体用:_________②③

包含目的基因和左侧或右侧的序列

③⑥或②⑤

问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升3.（2025陕西.T21）5'端

AGATCT问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升为将S基因正确插入载体，PCR扩增S基因时需在引物的______（填“5'端”或“3'端”）添加限制酶识别序列，结合上表分析，上游引物应添加的碱基序列是5'-____________-3'，。上游

小结第一步：引物的5＇添加限制酶第二步：确定目的基因转录方向第三步：插入载体位置第四步：考虑同尾酶替换4.（2025浙江.T19）3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酵母细胞中甘油合成的关键酶。某假丝酵母菌株具有高活性的GPD，目前已测得其基因部分序列如图，而两侧的序列完全未知，能否利用图中给定的引物，把两侧未知的序列也大量扩增出来呢？请提出你的思路。问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升未知序列未知序列GPD基因已知序列5＇3＇3＇5＇引物1引物2引物3引物4第一步确定引物：引物3和引物4第二步将线性DNA环化：同种限制酶切割露出相同的粘性末端第三步利用反应体系进行PCR扩增：扩增出引物3和引物4在内的两端未知序列。用EcoRⅠ限制酶切割已知序列未知序列未知序列已知序列未知序列未知序列未知序列未知序列问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升引物3引物4已知序列已知序列未知序列未知序列自身环化问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升引物3引物4引物3引物4（2024江西.T19）问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升1、图中的M所起的作用是？2、能否根据图中的条带判断出电泳的方向？标准参照（2024T8联考T21）突变体水稻a基因（位于9号染色体上）是野生稻A基因内部插入654bp片段形成，且该序列在野生型3号染色体上亦存在。为探究原因，在3号与9号染色体上该654bp序列外侧各设计一对引物，对野生型及突变体基因组DNA进行PCR，产物电泳结果如图所示。据图分析突变体水稻N产生的原因？3号染色体上的654bp序列移接到9号染色体上问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升注：H2为野生型水稻，N为突变体水稻。3号上突变体少654bp9号上突变体多654bp（2025江西.T21）引物对1和引物对2分别可扩增A/a、B/b全部序列。下图是对纯合亲本甲、乙、丙和F2某个体PCR后电泳的结果。已知图中①为甲（双显性），②为乙（单显性），④为丙（双隐性）。（2）B基因突变为b基因的过程中了发生碱基_______。碱基增添替换问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升（1）可判断a基因由A基因发生___________突变形成。ABabAABBaabbaaBB问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升课本中的DNA测序必修二教材52页测序（双脱氧测序法）在DNA聚合酶、引物、四种单脱氧核苷酸（dNTP）存在的情况下，通过引入少量双脱氧核苷三磷酸（ddNTP），这些ddNTP的3'端缺少羟基，不能与下一个dNTP结合，导致DNA合成在遇到ddNTP时停止。这样，在每个反应系统中，都会合成一系列长度不等的核酸片段，通过电泳分离后，可以根据片段3'端的双脱氧碱基顺序读取合成片段的碱基序列，从而确定基因的序列。实验原理问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升dNTP和ddNTP问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升（2025安徽.T19）科研小组采用双脱氧测序法，扩增出野生稻和栽培稻Bh/bh基因的片段，电泳结果见图。问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升请根据电泳条带写出野生稻Bh基因的部分序列：

5'-CTACCCGTGAT-3'

3'-GATGGGCACTA-5'引物合成的链模板链快速书写技巧：根据电泳结束的方向由5'往3'依次书写相应碱基5'3'电泳测定DNA分子大小1、定移动方向2、确定大小3、结合情境判断用途

小结

问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升（2025吉林.T25）香树脂醇具有抗炎等功效，从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N，可高效生产香树脂醇。回答下列问题。问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升（1）可从___________中查询基因N的编码序列，设计特定引物。如图1所示，a链为转录模板链，为保证基因N与质粒pYL正确连接，需在引物1和引物2的5'端分别引入________和________限制酶识别序列。PCR扩增基因N，特异性酶切后，利用____________连接DNA片段，构建重组质粒，大小约9.5kb（kb为千碱基对），假设构建重组质粒前后，质粒pYL对应部分大小基本不变。

序列数据库

XhoⅠ

XbaⅠ

DNA连接酶

上游

（2025吉林.T25）香树脂醇具有抗炎等功效，从植物中提取难度大、产率低。通过在酵母菌中表达外源香树脂醇合酶基因N，可高效生产香树脂醇。回答下列问题。问题导向引物选取与设计电泳图谱应用巩固提升（2）进一步筛选构建的质粒，以1-4号菌株中提取的质粒为模板，使用引物1和引物2进行PCR扩增，电泳PCR产物，结果如图2。在第5组的PCR反应中，使用无菌水代替实验组的模板DNA，目的是检验PCR反应中是否有__________的污染。初步判断实验组________（从“1~4”中选填）的质