《玩具微生物要求》

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玩具微生物要求

1范围

本文件规定了玩具中的微生物限量、防腐效能挑战要求和试验方法。

本文件适用于下列玩具或玩具材料的微生物检验：

——玩具中的可触及含水材料；

——需要加水混合的粉末类玩具。

本文件不适用于下列玩具及玩具材料的微生物检验：

——用于展示生物现象的粉末类材料（如虾卵、种子、土壤）；

——在正常使用或可预见的滥用中不可触及的含水材料。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB5009.238食品水分活度的测定

GB6675.1玩具安全第1部分:基本规范

GB6675.2玩具安全第2部分:机械与物理性能

SN/T2206.1化妆品微生物检验方法第1部分:沙门氏菌

SN/T2206.8化妆品微生物检验方法第8部分:白色念珠菌

ISO6579-1食品链微生物学沙门氏菌检测、计数和血清分型的水平方法第1部分:沙门氏菌属检测(Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodforthedetection,enumerationandserotypingofSalmonella—Part1:DetectionofSalmonellaspp.）

ISO11930化妆品微生物学化妆品抗菌保护的评价(Cosmetics—Microbiology—Evaluationoftheantimicrobialprotectionofacosmeticproduct）

ISO16212化妆品微生物学酵母菌和霉菌的计数(Cosmetics—Microbiology—Enumerationofyeastandmould）

ISO18416化妆品微生物学白色念珠菌检测(Cosmetics—Microbiology—DetectionofCandidaalbicans）

ISO18787食品水分活度的测定(Foodstuffs—Determinationofwateractivity）

ISO21149化妆品微生物学需氧嗜温细菌的计数和检测(Cosmetics—Microbiology-Enumerationanddetectionofaerobicmesophilicbacteria）

ISO21150化妆品微生物学大肠杆菌检测(Cosmetics—Microbiology—DetectionofEscherichiacoli）

ISO22717化妆品微生物学铜绿假单胞菌检测(Cosmetics—Microbiology—DetectionofPseudomonasaeruginosa）

ISO22718化妆品微生物学金黄色葡萄球菌检测(Cosmetics—Microbiology—DetectionofStaphylococcusaureus）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

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中未结合水分的一种度量，但并不一定等同于含水量。

3.2婴儿产品infantproduct

设计供36月龄以下婴儿使用的产品。

3.3菌落总数aerobicbacterialcount

玩具检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性和兼性厌氧菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。

3.4霉菌和酵母菌数测定determinationofmoldsandyeastcount

玩具检样在一定条件下培养后，1g或1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明玩具被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉菌和酵母菌数。

3.5玩具toy

设计或预定供14岁以下儿童玩耍时使用的任何产品。

[来源：GB6675.1-2025]

3.6玩具化妆品toycosmetic

仅给玩具（如玩偶等）涂饰用的产品。

[来源：GB6675.1-2025]

3.7可触及accessible

玩具部分或部件能被GB6675.2中玩具部分或部件的可触及性测试描述的可触及探头轴肩之前的任何部分接触到。

[来源：GB6675.1-2025]

4要求

4.1菌落计数

菌落计数应按ISO11930进行或按照检验方法中要求的方式进行。

4.2需要加水混合的粉末类玩具

预期使用需要加水进行混合的粉末类玩具，应在加水混合后进行检测；检测时需考虑混合水量存在±10%波动的影响。

4.3微生物风险评估

在进行微生物检测前，应先评估玩具或玩具材料是否适合微生物生长，对于因预期使用可能受到污染的重复使用产品（如手指画颜料、软泥等），应予以特别关注。

一般而言，不适合微生物生产的产品通常为无水产品，或具备其他抑制微生物生长的特性，此类产品包括但不限于：

a）水分活度小于0.5的产品；水分活度的检测按第5章相关内容进行；

b）含水量低的硅氧烷基产品及含水量低的硅氧烷衍生物基产品；

c）蜡基及油基产品；

d）酒精含量≥20%（体积分数）的产品；

e）pH值＜3或＞10的产品。

在预期使用过程中不易受到污染的水性液体（如笔中的纤维吸附墨水、管装浆糊等），可视为不适合微生物生长的情形。

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经评估确认不适合微生物生长的产品，视为符合本文件要求，豁免检验。

4.5微生物指标

4.5.1经评估存在微生物风险的玩具或玩具材料，均不应有微生物危害性。玩具或玩具材料在首次开封取出时，应同时满足以下全部要求。相关检测按第5章相关内容进行。

表1微生物指标

项目

产品类型

指标

菌落总数

婴儿产品

≤100CFU/ml或≤100CFU/g

玩具化妆品

其他类型玩具

≤1000CFU/ml或≤1000CFU/g

霉菌和酵母菌数测定

婴儿产品

≤100CFU/ml或≤100CFU/g

玩具化妆品

其他类型玩具

≤1000CFU/ml或≤1000CFU/g

金黄色葡萄球菌

所有类型玩具

不得检出

铜绿假单胞菌

不得检出

耐热大肠菌群

不得检出

白色念珠菌

不得检出

沙门氏菌

不得检出

4.5.2考虑多次稀释操作引入的不确定性，检测结果若高于上述限值不超过0.3个对数级（log1₀),仍可视为符合要求（示例：若检测中需进行多次稀释，则菌落计数结果不超过200CFU/mL可视为满足100CFU/mL的限值要求，不超过2000CFU/mL可视为满足1000CFU/mL的限值要求）。

4.6防腐挑战

4.6.1所有含水材料均应得到充分保护以防止微生物污染。本文件范围内的玩具材料应进行防腐挑战试验，防腐剂挑战按第5章相关内容进行，且须符合以下要求：

a）微生物接种物用量：1%（体积分数）的菌悬液浓度需在1x105至1x106CFU/mL之间。

b）菌种组合：接种菌种至少应包含金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃希氏菌ATCC8739、铜绿假单胞菌ATCC9027、白色念珠菌ATCC10231、巴西曲霉ATCC16404（不得存在菌丝体）。

注：可选择性添加其他目标菌株，等效菌株亦可接受。

c）取样时间点：最少需要在接种后第7天、第14天和第28天进行取样检测。

d）样品量：最少10g。

4.6.2防腐剂挑战结果应符合以下要求：

表2防腐挑战

测试对象

细菌

霉菌

酵母菌

取样时间点

第7天

第14天

第28天

第7天

第14天

第28天

第7天

第14天

第28天

判定

指标a

婴童玩具

≥3

NI

NI

≥1

NI

NI

-

≥0

≥1

玩具化妆品

其他类型玩具

-

≥3

NI

-

≥1

NI

-

≥0

NI

注1：“NI”表示“noincrease”，即与上一时间点的计数结果相比，对数差异未超过0.5log；

注2：“-”表示无需进行测试；

注3：当与初始染菌量进行比较时，若对数差异未超过0.5log，对数减少值视为0。

a判定指标为不同取样时间点的供试品中存活菌量对比初始染菌量的对数减少值；

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5.1水分活度

按GB5009.238或ISO18787进行测定。

5.2微生物指标

5.2.1菌落总数

样品按照附录A进行前处理后，按《化妆品安全技术规范》第五章2菌落总数检验方法进行测定。注：也可参照ISO21149或其等效方法进行测定。

5.2.2霉菌和酵母菌总数

样品按照附录A进行前处理后，按《化妆品安全技术规范》第五章6霉菌和酵母菌检验方法进行测定。

注：也可参照ISO16212或其等效方法进行测定。

5.2.3金黄色葡萄球菌

样品按照附录A进行前处理后，按《化妆品安全技术规范》第五章5金黄色葡萄球菌检验方法进行测定。

注：也可参照ISO22718或其等效方法进行测定。

5.2.4铜绿假单胞菌

样品按照附录A进行前处理后，按《化妆品安全技术规范》第五章4铜绿假单胞菌检验方法进行测定。

注：也可参照ISO22717或其等效方法进行测定。

5.2.5耐热大肠菌群

样品按照附录A进行前处理后，按《化妆品安全技术规范》第五章3耐热大肠菌群检验方法进行测定。

注：也可参照ISO21150或其等效方法进行测定。

5.2.6白色念珠菌

样品按照附录A进行前处理后，按SN/T2206.8进行测定。

注：也可参照ISO18416或其等效方法进行测定。

5.2.7沙门氏菌

样品按照附录A进行前处理后，按SN/T2206.1进行测定。

注：也可参照ISO6579-1或其等效方法进行测定。

5.3防腐挑战

按ISO11930开展防腐挑战试验，也可参照其他等效方法进行测定。

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A.1一般要求

A.1.1收到样品后应及时检验，如不能及时检验可在室温或产品标签上说明的储存条件下保存样品。检验前后不要冷藏、冷冻、保温样品。

A.1.2开启样品包装前，应仔细检查包装的完好性。并用含1%HCl(v/v)的70%乙醇溶液或含4%碘的70%乙醇溶液或2%的戊二醛溶液消毒样品外包装。

A.1.3从样品制备开始至接种到培养基的时间一般不应超过20min。

A.1.4采用改良letheen肉汤或SCDLP作为样品制备的稀释液，这两种稀释液中均含有中和剂。附录C还列出来其他中和剂的配方及使用方法供参考。

A.2制备方法

A.2.1水溶性样品

称取10g或量取10mL样品置盛有90mL稀释液的无菌锥形瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液；也可称取10g或量取10mL样品置盛有90mL稀释液的无菌均质袋中，用均质器均质1min—2min，制成1:10的样品匀液。

进行微生物的定量检验时，还需另取1:10的样品匀液1mL注入到9mL稀释液试管中（注意勿使吸管接触液面），在漩涡混合器上混匀，制成1:100样品匀液。依此10倍稀释法制成更高稀释度的样品匀液，每递增稀释一次，应换用一支1mL吸管。

A.2.2非水溶性样品、固体和膏状样品

称取10g或量取10mL样品置装有约20颗无菌玻璃珠的锥形瓶中，加入10g的吐温80和80mL稀释液，在40℃—44℃水浴中振荡混合10min，制成1:10的样品匀液；也可称取10g或量取10mL样品置无菌均质袋中，加入在40℃—44℃水浴中预温的10g吐温80以及和80mL稀释液，用均质器均质3min—5min，制成1:10的样品匀液。

进行微生物的定量检验时，还需另取1:10的样品匀液1mL注入到9mL稀释液试管中（注意勿使吸管接触液面），在漩涡混合器上混匀，制成1:100样品匀液。依此10倍稀释法制成更高稀释度的样品匀液，每递增稀释一次，应换用一支1mL吸管。

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B.1改良letheen肉汤

B.1.1成分

肉类胃酶消化物20.0g酪蛋白胰酶消化物5.0g牛肉浸膏5.0g

酵母浸膏2.0g卵磷脂0.7g

吐温805.0g

氯化钠5.0g

亚硫酸氢钠0.1g水1000mL

B.1.2制法

将吐温80和卵磷脂依次加入沸水中使其完全溶解，再加入其他成分加热混匀，或脱水培养基加于水中，加热轻轻搅拌使其溶解后，分装到适合的容器中，于121℃高压灭菌15min。灭菌后冷却培养基，室温下其pH值为7.2±0.2。

B.SCDLP液体培养基（SCDLP）

B.2.1成分

酪蛋白胨17.0g大豆蛋白胨3.0g氯化钠5.0g

磷酸氢二钾2.5g葡萄糖2.5g

卵磷脂1.0g吐温807.0g水1000mL

B.2.2制法

将各成分或脱水培养基加于水中，加热搅拌使其溶解。分装到适合的容器中后，于121℃高压灭菌15min。灭菌后冷却培养基，室温下其pH值为7.2±0.2。

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