T-HBIQA 0002.5-2024 食品中非法添加药物利莫那班的快速检测拉曼光谱法

T/HBIQAT/HBIQA本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是T/HBIQA0002-2024《食品中非法添加药物的快速检测拉曼光谱法》的第5部分。T/HBIQA0002已经发布了以下部分：——T/HBIQA0002.1-2024：食品中非法添加药物非布司他的快速检测拉曼光谱法；——T/HBIQA0002.2-2024：食品中非法添加药物保泰松的快速检测拉曼光谱法；——T/HBIQA0002.3-2024：食品中非法添加药物罗通定的快速检测拉曼光谱法；——T/HBIQA0002.4-2024：食品中非法添加药物氨基比林的快速检测——T/HBIQA0002.5-2024：食品中非法添加药物利莫那班的快速检测——T/HBIQA0002.6-2024：食品中非法添加药物双醋酚丁的快速检测——T/HBIQA0002.7-2024：食品中非法添加药物西布曲明的快速检测——T/HBIQA0002.8-2024：食品中非法添加药物苯扎贝特的快速检测——T/HBIQA0002.9-2024：食品中非法添加药物辛伐他汀的快速检测——T/HBIQA0002.10-2024：食品中非法添加药物阿托伐他汀的快速检测拉曼光谱法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由河北省检验检疫学会提出并归口。本文件起草单位：普拉瑞思科学仪器（河北）有限公司、河北大学化学与材料科学学院、河北省中药材质量检验检测研究中心有限公司、石家庄市食品药品检验中心、河北省原料快速检测有限公司。本文件主要起草人：李文华、宋莉、陆文亮、靳茂礼、常化仿、靳玲。1食品中非法添加药物利莫那班的快速检测拉曼光谱法本文件规定了食品中利莫那班的激光拉曼光谱快速检测方法。本文件适用于声称具有减肥瘦身、降压降糖等功能的食品中利莫那班成分的快速检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼光谱。一般样品经稀释，复杂样品经液液萃取，加表面增强试剂对信号增强，进行拉曼光谱扫描。与标准谱图库中的利莫那班特征拉曼位移（1090cm-1±3cm-1,1138cm-1±3cm-1,1603cm-1±3cm-1）进行匹配识别，对样品中的利莫那班进行定性判定。5试剂和材料5.1试剂除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1.1乙酸乙酯，色谱纯。5.1.3色素净化管：2mL离心管配比：0.12g无水硫酸镁+0.04g活性炭。5.1.4碱化试剂：准确称取8g氢氧化钠，用水定容至100mL。5.1.5促凝剂：1mol/L的硝酸。5.1.6表面增强试剂：纳米金溶胶或相当者。避光，4℃~20℃保存，有效期6个月。2注：表面增强试剂的参考配制方法：纳米金溶5.1.7利莫那班标准品：C22H21Cl3N4O，CAS号：168273-06-1，纯度≥98%。5.1.8利莫那班标准溶液：准确称取标准物质0.1000g，甲醇（HPLC）准确定容至100mL。保证配制样本浓度为1mg/mL，于4℃避光保存，有效期1个月。5.2材料5.2.1塑料具塞离心管：2mL和10mL。5.2.2移液吸头：200µL，1000µL和5000µL。6仪器和设备6.1便携式拉曼光谱仪稳频激光光源：发射波长为785±1nm，线宽<0.1nm，能量≥250mW；光谱分辨率≤10cm-1；光谱响应范围300cm-1~2700cm-1，或大于该响应范围。6.2移液器：10-100µL、100-1000µL和1000-5000µL。6.3涡旋振荡器。6.4离心机：转速≥10000r/min。6.5电子天平：感量为0.01g和0.0001g。7测定步骤7.1提取7.1.1胶囊类样品取待测样品内部粉末0.5g，倒入10mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入3000μL乙酸乙酯，涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500μL上清液于2mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转/分钟离心30秒；取离心后液体600μL于2mL离心管，向其中加入400μL碱化试剂，振荡10秒后，10000转/分钟离心10秒，取上层清液待测；7.1.2药丸类样品将待测样品用洁净容器破碎后取0.5g，用洁净容器破碎后，倒入10mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入3000μL乙酸乙酯（涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500μL上清液于2mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转/分钟离心30秒；取离心后液体600μL于2mL离心管，向其中加入400μL碱化试剂，振荡10秒后，10000转/分钟离心10秒，取上层清液待测；7.1.3液体类样品用移液器（或洁净滴管）吸取1000μL待测样品，加入到10mL离心管中，从步骤2开始进行处理；向离心管中加入2000μL乙酸乙酯，涡旋振荡1分钟，静置1分钟，取1500μL上清液于2mL离心管中，10000转/分钟离心30秒；取1000μL离心后清液于色素净化管中，振荡混匀，10000转/分钟离心30秒；3取离心后液体600μL于2mL离心管，向其中加入400μL碱化试剂，振荡10秒后，10000转/分钟离心10秒，取上层清液待测。7.2测定7.2.1拉曼光谱仪器分析参考条件激光能量≥250mW，数据采集时间≥4s。7.2.2表面增强和测定向检测瓶中依次加入300μL表面增强试剂（5.1.6），50μL待测液，100μL促凝剂（5.1.5），混匀后立即置于检测池中检测。7.3质控试验每批样品应同时进行阴性对照和阳性对照试验。7.3.1阴性对照称取空白试样，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作。7.3.2阳性对照准确称取空白试样20g置于15mL具塞离心管中，加入100μL利莫那班标准溶液（5.1.8），使待测样本浓度为20mg/kg，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作。8结果计算和表述8.1定性仪器软件将测试结果与标准谱图库中的利莫那班进行匹配识别，根据谱图1090cm-1±3cm-1,1138cm-1±3cm-1,1603cm-1±3cm-1处特征拉曼光谱，对样品中的利莫那班进行结果判定，当样品的拉曼峰包含该目标物的2个以上特征峰判定为阳性。阴性代表该样品不含有利莫那班或者低于检出限，阳性则代表该样品含有利莫那班且大于等于检出限。利莫那班表面增强拉曼光谱图见附录A.1。8.2确证本方法为初筛方法，当检测结果为阳性时，应用其他技术手段进行确证。9方法性能指标9.1检出限本方法检出限为20mg/kg。9.2灵敏度灵敏度应≥95%。9.3特异性4特异性应≥95%。9.4假阴性率假阴性率应≤5%。9.5假阳性率假阳性率应≤5%。性能指标计算方法见附录B中表B.1。5利莫那班标准溶液表面增强拉曼光谱图图A.1给出了利莫那班标准溶液表面增强拉曼光谱图及特征位移（1090cm-1,1138cm-1,1603cm-1）。图A.1利莫那班标准溶液表面增强拉曼光谱图6快速检测方法性能计算表快速检测方法性能指标计算表见表B.1。表B.1性能指标计算方法样品情况a检测结果b总数N11N12N1.=N11+N12N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N12N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2显著性差异(х2)x2=(|N12-N21|-1)2/(N12+N21),灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c（N11+N22）