中国临床检验技术操作指南（2026版）

中国临床检验技术操作指南（2026版）1.范围与通用管理原则本指南旨在为全国各级医疗机构临床实验室提供标准化、规范化、可操作的技术指导，确保检验结果的准确性、精密度、可靠性以及临床适用性。随着检验医学的飞速发展，自动化、智能化、分子化已成为主流趋势，本指南在吸纳国际先进标准（如ISO15189、CLSI系列标准）的基础上，结合我国临床检验实际情况进行了系统性更新。临床实验室必须建立并实施全面的质量管理体系（QMS）。该体系应涵盖检验前、检验中、检验后的全过程，以及人员、设备、环境、试剂等关键要素。实验室管理层需制定质量方针和目标，并通过内部审核和管理评审持续改进体系有效性。所有检验技术人员必须经过严格的岗前培训、考核并获得相应资质后方可独立操作。对于开展的新项目、新方法，在正式应用于临床前，必须完成完整的性能验证或确认实验，包括但不限于正确度、精密度、线性范围、检出限、参考区间以及生物参考区间的验证。在室内质量控制（IQC）方面，实验室应针对每个检测项目制定合理的质控策略。推荐采用Westgard多规则质控理论，结合Levey-Jennings质控图进行实时监控。质控品的浓度水平应覆盖医学决定水平，且必须与患者标本同样对待，在相同检测条件下进行测定。一旦发现失控趋势，必须立即启动失控处理程序，查找根本原因（如试剂老化、校准漂移、光源衰减等），采取纠正措施并记录，严禁在未分析原因的情况下盲目重复测定直至在控。室间质量评价（EQA）是评价实验室准确度的重要手段。实验室必须参加由国家卫生健康委临床检验中心或省级临床检验中心组织的室间质评计划。对于无EQA计划的项目，实验室应通过与其他实验室进行比对试验，或使用正确度验证品进行评估，以确保结果的可比性。所有EQA结果必须保留完整记录，对于不及格的项目，必须进行根本原因分析并制定预防措施。2.临床检验分析前质量控制分析前阶段是保证检验质量的关键环节，据统计，约70%的检验误差发生在这一阶段。该阶段包括临床医生申请、患者准备、标本采集、标本运送以及标本接收等环节。2.1检验项目的选择与医嘱申请临床医生应根据患者的临床表现、病史、其他检查结果合理选择检验项目，避免过度检查或检查不足。实验室应提供检验项目手册，明确各项目的临床意义、生物参考区间、干扰因素及标本要求。对于危急值项目，医生应在申请单上注明紧急程度。电子申请系统应嵌入临床决策支持系统（CDSS），在医生申请不合理项目组合时自动提示。2.2患者准备患者的生理状态（如空腹、运动、体位、情绪）及用药情况对检验结果有显著影响。血液检验：许多生化检验（如血糖、血脂、肾功能、肝功能）要求空腹8-12小时，以避免饮食脂血和代谢底物的影响。剧烈运动可导致肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）等酶类升高，应在患者静息状态下采血。采血体位建议统一为坐位或卧位，体位改变可引起水分及大分子物质的分布变化，进而影响血脂蛋白、总蛋白等浓度。尿液检验：应指导患者正确留取清洁中段尿，避免阴道分泌物、包皮垢等污染。对于尿培养，必要时需进行耻骨上膀胱穿刺或导尿以获取无菌标本。凝血功能检验：止血带压迫时间过长可引起局部血管淤血，导致凝血因子激活或浓缩，影响PT、APTT结果。建议止血带压迫时间不超过1分钟。2.3标本采集容器与添加剂实验室应根据检测项目选择正确的采血管，并严格遵循采血管的采集顺序，以防止添加剂交叉污染。推荐的采血管顺序为：血培养瓶（厌氧/需氧）→凝血管（蓝帽）→血清管（红帽/黄帽）→肝素管（绿帽）→EDTA管（紫帽）→糖酵解抑制剂管（灰帽）。常用抗凝剂及添加剂的选择原则如下表所示：抗凝剂/添加剂种类管帽颜色适用检测项目原理与注意事项采血量及比例乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)紫色全血细胞计数、血型、糖化血红蛋白、核酸检测螯合钙离子，阻断凝血过程。对细胞形态影响最小，过高浓度可导致血小板肿胀。1.5-2.5mgEDTA/1ml血液柠檬酸钠(3.2%或3.8%)蓝色凝血功能检查(PT,APTT,TT,Fib)钙离子螯合剂，抗凝作用可逆。抗凝剂与血液比例必须严格为1:9，比例过高可导致APTT延长。1:9(抗凝剂:全血)柠檬酸钠(3.2%)黑色血沉(ESR)用于魏氏法血沉测定。抗凝剂与血液比例为1:4。1:4(抗凝剂:全血)肝素锂/钠绿色生化急诊检测、血气分析、电解质抑制凝血酶活性和凝血活酶形成。可能抑制Taq酶活性，故不适用于PCR检测。肝素锂优于肝素钠，以免影响钠离子检测。15-30IU/1ml血液分离胶/促凝剂黄色/红色血清生化、免疫学、激素检测促凝剂加速凝血，分离胶在离心后形成物理屏障，将血清与血细胞分离，保持细胞成分稳定。需充分混匀促凝剂氟化钠/草酸钾灰色血糖、乳酸检测氟化钠抑制糖酵解酶（烯醇化酶），防止血糖体外降解。草酸钾为抗凝剂。2mg氟化钠/1ml血液2.4标本运送与接收标本采集后应尽快送检，运送过程中应防震、防漏、防污染、防日光直射。时间控制：血氨、血气、乳酸等标本应在采集后15-30分钟内完成检测；生化常规标本应在2小时内分离血清；凝血标本应在4小时内完成检测。温度控制：大多数常规标本宜室温（18-25℃）运送。对于需检测代谢物（如乳酸、丙酮酸）或激素（如ACTH、Renin）的标本，应采用冰水浴运送并立即离心分离。病毒培养标本需冷藏运输。接收标准：实验室接收人员应严格检查标本状态，核对患者信息。对于溶血、脂血、黄疸、量不足、容器错误、凝固（抗凝血）等不合格标本，应予以拒收并详细记录。对于轻度溶血标本，若对检测项目影响轻微（如钾离子检测除外），可在备注信息后谨慎检测，但需在报告中注明。3.临床生物化学检验技术操作规程3.1分析仪器的维护与校准全自动生化分析仪是生化检验的核心设备。操作人员必须每日执行开机维护、光路校准、加样针清洗等日常保养。每周需执行周保养，包括清洗比色杯、搅拌棒、试剂refrigeration系统检查。每月及每季度需由厂家工程师或资深技术人员进行深度保养。校准是保证结果准确的关键。实验室应制定校准计划，在以下情况必须进行校准：仪器安装、大修后、更换主要部件（光源、比色杯、加样针）、质控失控且无法通过保养纠正时、以及厂家规定的定期校准周期。校准品应使用可溯源至国际参考物质（如SRM909c,SRM968）或具有互换性的正确度验证品。校准后需通过检测质控品来验证校准有效性。3.2常规生化项目检测原理与干扰因素酶联比色法与速率法：大多数酶类（ALT,AST,ALP,GGT,CK,LDH）采用连续监测法（速率法），通过监测反应过程中吸光度的变化速率（ΔA/min）来计算酶活性。底物浓度应至少是Km值的10-20倍，以保证零级反应动力学。溶血对酶类测定影响复杂，如AST、LDH在红细胞中含量极高，溶血会导致结果假性偏高；而ALP因红细胞中缺乏且溶血液具有酸化作用，可能导致活性降低。终点法：适用于总蛋白（TP，双缩脲法）、白蛋白（ALB，溴甲酚绿法）、葡萄糖（GOD-POD法或己糖激酶法）、肌酐（Jaffe法或酶法）、尿素（脲酶-谷氨酸脱氢酶法）等。需注意反应的平衡时间。同型半胱氨酸（Hcy）：采用酶循环法或色谱法。标本需严格避光，并尽快分离血浆，因为Hcy在室温下会从红细胞中持续释放。脂类检测：总胆固醇（TC，CHOD-PAP法）、甘油三酯（TG，GPO-PAP法）。高脂血症标本会对比色反应产生严重的基质效应，必要时需进行样本稀释或采用空白补偿。对于低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），首选直接匀相法测定，而非Friedewald公式计算（特别是在TG>4.52mmol/L时公式失效）。3.3肾功能与心肌标志物的高敏检测肌酐检测标准化：为消除不同检测系统间的偏倚，目前推荐采用酶法或苦味酸动力学法，并溯源至IDMS参考方法。实验室应关注肾小球滤过率（eGFR）的自动计算与报告。心肌肌钙蛋白（cTnI/cTnT）：是诊断心肌梗死的“金标准”。2026版指南强调使用高敏肌钙蛋白（hs-cTn）检测系统。hs-cTn应具备在20%变异系数（CV）条件下能检测到第99百分位参考值的性能。临床应用时需配合“0h/1h”或“0h/2h”快速诊断/排除算法。由于hs-cTn在极低浓度下的微小变化即具临床意义，必须严格控制精密度，避免钩状效应。常见生化项目干扰因素及处理措施如下表：干扰类型影响机制受影响较大的项目处理措施溶血红细胞内物质释放、内源性酶活性、颜色干扰K,AST,LDH,CK,Fe,Hb,Tbil重新采血；通过样本空白扣除背景吸光度；建立溶血指数校正模型脂血样本浑浊导致光散射、体积置换效应TP,ALP,GGT,P,CO2CP高速离心去除脂层；样本稀释；使用脂质清除试剂；改用透射比浊以外的原理黄疸胆红素本身颜色、还原性物质消耗过氧化氢Tbil,Dbil,Cr(酶法),UA,TC样本空白校正；使用不受还原性物质干扰的酶配方药物干扰药物代谢产物与试剂反应、抑制酶活性多种项目，如VitC影响氧化还原反应询问用药史；停药后检测；使用特异性更强的方法4.临床免疫学检验技术操作规程4.1酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA仍是许多传染病标志物（如HIV、HCV、HBsAg）初筛的常用方法。操作关键点：加样需精准，避免气泡。温育温度与时间必须严格遵循试剂盒说明书（通常为37℃30-60分钟）。洗板是ELISA成功的关键，应保证洗板机注液量充足（每孔300-350μl），洗板次数足够，并在最后一次拍板时彻底吸干孔底残留液体，避免扣板时孔间交叉污染。结果判读：酶标仪读数波长选择正确（通常为450nm，参考波长630nm）。对于灰区结果（S/CO值在0.9-1.0之间），应进行双孔复查或确证试验。HIV抗体初筛阳性必须送疾控中心或确证实验室用免疫印迹法（WB）或线性免疫分析法进行确证。4.2化学发光免疫分析(CLIA)CLIA具有灵敏度高、线性范围宽、自动化程度高的特点，广泛应用于肿瘤标志物、激素、传染病定量检测。磁微粒分离技术：目前主流CLIA采用磁微粒包被抗原/抗体，通过磁场分离结合态与游离态。操作中需关注磁分离器的磁力强度，防止磁微粒吸附丢失。Hook效应（钩状效应）：在极高浓度的抗原存在时，由于抗体结合位点被饱和，反而导致信号下降，出现假低值。实验室应对高浓度项目（如β-HCG、CA125、AFP等）设置自动稀释重测功能，或在仪器参数中设置“前带”检查。肿瘤标志物应用：需注意肿瘤标志物主要用于疗效监测和复发预警，而非早期筛查。对于体检人群，应避免对轻微升高的结果进行过度解读，建议动态观察。4.3自身免疫性疾病检测抗核抗体（ANA）：推荐以HEp-2细胞为基质的间接免疫荧光法（IIF）作为筛查金标准。报告时应描述荧光核型（如均质型、颗粒型、核膜型、胞浆型）及滴度。滴度≥1:80通常具有临床意义。IIF阳性后，应进一步进行特异性抗体（如抗ds-DNA,抗Sm,抗SSA等）的检测（如线性免疫印迹法LIA或化学发光法）。类风湿因子（RF）与抗环瓜氨酸肽抗体：RF对类风湿关节炎（RA）特异性较低，抗CCP抗体是RA诊断的特异性指标，两者联合检测可提高诊断效率。5.临床血液与体液检验技术操作规程5.1血液常规分析全自动血细胞分析仪采用电阻抗法（库尔特原理）、激光散射法、流式细胞术结合细胞化学染色进行多参数检测。白细胞分类：五分类仪器应能准确识别中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞，并提示异常细胞（如异型淋巴细胞、幼稚细胞、核左移）。复检规则：实验室必须制定并严格执行国际血液学复检专家组推荐的41条规则或结合本室实际情况修改的复检规则。例如：WBC、RBC、PLT首次结果超出极限值；出现白细胞分类报警信息；直方图或散点图异常等。复检手段必须包括血涂片显微镜镜检。血小板计数：对于血小板极低（<20×10^9/L）或直方图异常的标本，应采用手工法或光学法计数，以排除红细胞碎片、大血小板对电阻抗法的干扰。网织红细胞：使用流式细胞核酸染色法（如新亚甲蓝染色或噻唑橙染色）检测，可提供网织红细胞百分比（Ret%）及绝对值（Ret#），以及未成熟网织红细胞指数（IRF），是评估骨髓造血功能的重要指标。5.2尿液常规分析尿液干化学分析仪与尿沉渣分析仪联用是标准模式。干化学检测：利用试带模块的颜色变化进行半定量检测。需注意维生素C对隐血、葡萄糖、亚硝酸盐的假阴性干扰。亚硝酸盐阳性仅提示革兰氏阴性菌感染，阴性不能排除泌尿系感染。尿沉渣检测：推荐使用全自动尿沉渣分析仪（流式图像法或平面流式细胞术）进行定量计数。但对于管型、结晶、真菌、小细胞上皮等，仪器识别能力有限，必须进行人工显微镜复检。结果报告：应报告物理性状（颜色、透明度）、化学成分及有形成分。发现病理管型（透明管型除外）、大量红细胞、白细胞、酵母样菌、结晶（特别是胱氨酸、亮氨酸、胆红素结晶）时必须提示临床。5.3体液检验脑脊液（CSF）：包括常规、生化及细胞形态学。CSF标本采集后应立即送检，防止细胞破坏或葡萄糖分解。CSF细胞计数需避免红细胞干扰，若红细胞大量存在，白细胞计数需进行校正（扣除混入的白细胞）。墨汁染色用于新型隐球菌检测，抗酸染色用于结核分枝杆菌检测。浆膜腔积液：需区分漏出液与渗出液。常用Light标准：积液LDL/血清LDL>0.6，或积液蛋白/血清蛋白>0.5。积液CEA检测对鉴别良恶性积液有一定价值。血液与体液检验常见复检规则及处理策略如下表：触发条件(满足任意一条即复检)复检要求临床意义WBC<3.0或>20.0(×10^9/L)涂片镜检，人工分类排除仪器计数错误，确认异常细胞PLT<80或>1000(×10^9/L)涂片镜检，确认血小板聚集排除EDTA依赖性假性血小板减少Hb与RBC比例不符(MCV、MCHC异常)涂片镜检，观察红细胞形态排除冷凝集、双形性贫血、地中海贫血仪器出现原始细胞报警涂片镜检，分类计数筛查白血病尿干化学隐血/蛋白+且镜检RBC/WBC-尿沉渣人工镜检排除热不稳定性酶、肌红蛋白尿或菌尿干扰尿干化学WBC-且镜检WBC+尿干化学重测或人工镜检排除尿液中高葡萄糖、高蛋白或头孢菌素对酯酶反应的抑制6.临床分子诊断检验技术操作规程分子诊断是临床检验中发展最快、技术要求最严格的领域。2026版指南特别强调了实验室污染控制、性能验证及结果溯源的重要性。6.1核酸提取核酸提取的质量直接决定PCR的成败。推荐使用磁珠法提取，该方法自动化程度高、重复性好、易于封闭操作，降低生物安全风险。标本前处理：痰液、组织等粘稠标本需进行液化或匀浆处理。全血标本提取DNA时，应去除蛋白及血红素抑制物；血浆提取RNA时，需加入RNA保护剂并防止RNase降解。提取效率监控：每次提取应设置内标（InternalControl,IC），监控提取及扩增全过程的效率。内标可为非竞争性内标（人工构建的序列）或竞争性内标。6.2聚合酶链式反应(PCR)实时荧光定量PCR(qPCR)：是目前临床主流技术。通过监测荧光信号增长强度，结合Ct值进行定性或定量分析。反应体系配制：必须在分区明确的试剂准备区进行，使用无核酶/DNA酶的耗材。加样时应采用“挥发性小体积”原则，防止气溶胶污染。推荐使用预分装的PCR反应板或PCR仪自动加样功能。扩增程序设置：包含预变性、循环（变性、退火/延伸）、数据采集等阶段。对于多重PCR，需优化引物探针浓度，避免引物二聚体及非特异性扩增。结果分析：阈值线（Threshold）的设定应处于指数扩增期，且高于基线噪音。对于定性项目，典型的阳性曲线呈S型。定量项目需使用标准曲线（外标法）或内标法计算拷贝数。实验室需建立Ct值与样本浓度的线性回归方程，确保相关系数（r）≥0.990。6.3污染控制措施由于PCR的高灵敏度，极微量的气溶胶污染即可导致假阳性。物理分区：实验室原则上应分为四个独立区域：试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区。各区间设有缓冲间，气流方向从试剂区流向产物区，不得返流。单向流动：人员、物品、标本只能按单一方向流动。清洁与消毒：每日实验前后，各区应用紫外线灯照射30-60分钟，操作台面用75%酒精或核酸清除剂擦拭。防污染试剂：选用UNG酶（尿嘧啶-N-糖基化酶）技术，在反应体系中加入dUTP替代dTTP。扩增前进行UNG酶处理步骤，可降解以往扩增产物中的含dUTP的DNA，从而防止以往产物的污染。6.4基因测序与二代测序(NGS)Sanger测序：用于已知基因突变的验证、病原体分型。需进行PCR产物纯化，确保测序图谱峰型清晰，无杂峰。NGS(高通量测序)：应用于肿瘤基因panel、遗传病筛查、宏基因组（mNGS）病原体检测。湿实验：涵盖文库构建、靶向捕获、上机测序。需关注文库片段大小分布及浓度（Qubit、qPCR检测）。干实验：涵盖原始数据质控、比对、变异检测、注释。实验室应建立生物信息分析流程的标准操作程序（SOP），并定期验证数据库的更新版本。mNGS：用于不明原因发热病原体检测。需严格区分背景噪音与真实致病菌，结合reads数、覆盖度、微生物基因组长度及临床特征进行判读。7.临床微生物检验技术操作规程7.1标本采集与处理血培养：采血严格无菌操作。成人推荐同时采集需氧瓶和厌氧瓶，每瓶采血量8-10ml（采血量是检出率的关键因素）。对于疑似导管相关血流感染，应同时采集导管血和外周静脉血进行配对培养。下呼吸道标本：痰液标本应以显微镜下白细胞>25个/LPF、上皮细胞<10个/LPF为合格标准。气管吸出物及肺泡灌洗液（BALF）优于痰液。7.2细菌分离培养与鉴定培养基选择：根据标本类型选择合适的培养基（血平板、麦康凯平板、巧克力平板、SS平板等）。特殊细菌（如弯曲菌、军团菌）需提供特殊气体环境（微需氧、含二氧化碳）。鉴定技术：除传统的生化反应管外，主要采用质谱技术（MALDI-TOFMS）。该技术通过检测细菌蛋白指纹图谱进行鉴定，速度快、准确率高。使用质谱仪时，需确保标准菌株质控在控，涂菌方式需均匀且层厚适中。7.3药物敏感性试验(AST)纸片扩散法(Kirby-Bauer法)：结果判读依据CLSIM100标准，测量抑菌环直径，解释为敏感（S）、中介（I）、耐药（R）。肉汤微量稀释法(MIC法)：可测定最低抑菌浓度，结果更精确，是药敏试验的金标准。E-Test法：结合了扩散法和稀释法的优点，可直接读出MIC值。特殊耐药机制检测：需常规检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌（ESBLs）、耐碳青霉烯类肠杆菌（CRE/CRPA/CRAB）、万古霉素耐药肠球菌（VRE）。对于CRE，需进一步进行碳青霉烯酶分型（如KPC,NDM,OXA-48）。7.4抗菌药物敏感性试验折点更新实验室应每年更新CLSI或EUCAST药敏折点标准。注意从“敏感”改为“剂量依赖性敏感”（SDD）的药物，提示临床需根据PK/PD原理调整给药剂量。对于多重耐药菌（MDR）及泛耐药菌（XDR），需及时报告医院感染控制科。8.实验室信息管理系统与生物安全8.1实验室信息管理系统(LIS)LIS是实验室的数字化神经中枢。全流程管理：LIS应覆盖从医嘱申请、标本采集、核收、检测、审核到报告发布的全流程。双向通讯：实现LIS与分析仪的双向通讯，自动下载样本信息，上传检测结果，减少人工录入错误。自动审核规则：LIS应内置自动审核专家系统，根据患者历史结果、质控状态、delta-check（差值检查）等逻辑自动判别结果是否可自动发布，提高效率