肿瘤类器官构建规范专家共识总结2026

肿瘤类器官构建通用规范专家共识总结202601020304共识制定方法合规性与伦理样本采集处理培养与质控CONTENTS目录共识制定方法010203专家组构成本共识由上海市抗癌协会类器官专业委员会、中国医师协会临床精准医疗专业委员会、中国医药生物技术协会组织生物样本库分会等七家国家级学术机构联合发起，确保了共识的专业高度与行业代表性。共识由国内多家权威学术机构联合发起共识编制汇聚了73位专家，包括总顾问、执笔专家及共识组成员。专家来自全国40余家单位，学科背景覆盖肿瘤学、病理学、细胞生物学及伦理学等多个关键领域。专家组规模庞大且涵盖多学科背景61位共识专家组成员来自全国15个省级行政区，广泛的地区来源有助于整合不同区域的实践经验，保障了所制定技术规范的广泛适用性与可操作性。专家地域分布广泛，确保共识的普适性010203多数据库系统检索策略精准关键词组合与时间限定严格文献纳入与排除标准共识专家组为全面获取文献，系统检索了包括PubMed、WebofScience、中国知网和万方数据库在内的国内外权威数据库，确保检索范围覆盖中英文高质量学术资源。检索采用“Organoid”、“Tumor”、“类器官”、“生物样本库”等中英文核心关键词组合，并将文献检索时间严格限定至2025年10月，以纳入最新研究成果。制定明确的文献筛选标准，主要纳入肿瘤类器官构建、培养与质控相关的高质量研究，排除重复发表、无关主题及方法学信息不全的文献，最终精选49篇文献作为证据基础。文献检索方法本共识的证据等级和推荐级别标准参照国际通用的GRADE分级体系基本框架制定。该框架为医学指南提供了严谨的证据评估方法，确保了共识推荐意见的科学性与可靠性。考虑到肿瘤类器官构建是一项实验室技术，共识制定专家组对GRADE分级体系进行了适用性修订。这种修订旨在使证据分级更贴合技术操作与质量控制的实际场景与特殊需求。修订后的体系将证据等级明确划分为A、B、C三个级别，同时将推荐级别分为1级和2级。这种清晰的划分便于研究者快速理解不同建议的证据强度与推荐力度。分级体系的基本框架与来源针对技术属性的适用性修订具体的等级与级别划分证据分级方法合规性与伦理010203开展肿瘤类器官研究必须严格遵守《中华人民共和国生物安全法》《人类遗传资源管理条例》等法规，在研究前完成人类遗传资源的审批或备案手续，确保研究活动合法合规。研究需依据《涉及人的生物医学研究伦理审查办法》等规范，在开展前获取受试者的书面知情同意，并通过伦理委员会批准，切实保障受试者的权益与安全。按照《中华人民共和国个人信息保护法》要求，对患者临床信息与样本数据采取匿名化或去识别化处理，仅保留必要研究数据并安全存储，严防个人信息泄露。依法履行人类遗传资源管理审批备案严格执行知情同意与伦理审查制度落实患者隐私与数据安全保护措施遵守法律法规依法履行人类遗传资源管理审批或备案严格执行知情同意与伦理委员会批准加强患者隐私与数据安全保护开展肿瘤类器官研究必须严格遵守《中华人民共和国生物安全法》《人类遗传资源管理条例》等法律法规，所有涉及人类遗传资源的研究项目需提前完成审批或备案程序，确保研究活动合法合规。研究开展前必须获得受试者的书面知情同意，并通过伦理委员会的审查批准。依据《涉及人的生物医学研究伦理审查办法》等规范，保障受试者权益，确保研究符合伦理要求。实验室须遵循《中华人民共和国个人信息保护法》，对患者临床信息和样本数据采取匿名化或去识别化处理，仅保留必要研究数据并安全存储，严防信息泄露，保护患者隐私。伦理审查要求01.02.03.根据共识，所有涉及人类遗传资源的肿瘤类器官研究必须在开展前依法履行审批或备案程序，并获取受试者的知情同意及伦理委员会批准，确保研究合规合法，保障受试者权益。实验室须依据《中华人民共和国个人信息保护法》对患者临床信息和样本数据进行匿名化或去识别化处理，仅保留研究必要数据，并安全存储，以严格保护患者隐私。样本送达实验室后需立即录入信息管理系统，赋予唯一可追溯编号，并记录样本类型、采集时间等关键信息，实现全流程监控，防止数据泄露，维护患者信息安全。依法履行知情同意与伦理审批采取匿名化处理患者信息建立可追溯的样本信息管理体系保护患者隐私样本采集处理样本类型与采集原则运输条件与时效控制样本接收与信息记录样本采集需覆盖手术切除、活检、穿刺及体液等多种类型。手术标本应选取无坏死区域且体积不小于5mm³；活检宜多点取材以增加细胞量；体液样本需尽快处理。采集原则强调样本的代表性与质量，为后续培养奠定基础。样本离体后须立即置于预冷保存液中，并在2-8℃低温下运输。手术标本建议在24小时内送达处理，活检标本应不超过12小时。严格控制冷缺血时间与运输时效，是保障细胞活性的关键前提。样本送达后需立即登记入库，赋予唯一追溯编号，并记录类型、采集时间、运输条件等关键信息。超出推荐时限的样本标记为高风险，需评估细胞活性后再处理，确保流程可追溯与质量可控。样本采集运输根据共识，实验室应建立标准化的样本接收流程。样本送达后需立即登记入库，赋予唯一编号，并至少记录样本类型、采集时间、运输条件及冷缺血时间等关键信息，确保全过程可追溯。样本接收需建立标准化流程与可追溯记录共识明确建议，手术标本应在离体后24小时内、活检或细针穿刺标本应在12小时内送达并处理。若超出此时限，则需标记为高风险样本，并在继续构建前评估细胞活性。实体组织样本的接收时限与风险评估标准对于恶性胸腹水、脑脊液及循环肿瘤细胞等液体样本，应尽快接收处理，全程建议低温运输。在培养前常需进行离心或密度梯度分离等步骤以富集肿瘤细胞、去除杂质，从而提高建系成功率。体液与液体活检样本的接收处理原则样本接收标准根据共识，样本采集需选取肿瘤实体部位并避免坏死区域。离体后应立即置于预冷保存液中，于2-8℃低温运输。手术标本建议在24小时内、活检标本在12小时内送达处理，以最大限度缩短冷缺血时间，保障细胞活性，这是构建成功的基础。共识指出，处理方式需依据样本类型调整。实体组织需经机械剪切与酶解消化；而胸腹水、脑脊液及循环肿瘤细胞等液体样本，则需尽快进行离心、密度梯度分离等富集步骤以去除杂质，从而提高建系的成功率和稳定性。样本处理后，必须评估细胞活力与数量。共识明确，细胞存活率≥70%可直接培养；若存活率<50%或活细胞数少于1×10^4个，则视为高风险样本。对此类样本，需优化方案或谨慎评估后方可尝试培养，这是质量控制的关键环节。样本采集与运输的标准化操作多样化样本类型的差异化处理原则细胞悬液的质量评估与高风险样本界定样本处理流程培养与质控样本质量是构建成功的关键，需建立标准化流程。手术标本应选取无坏死区域且体积≥5mm³，离体后立即置于预冷保护液中，在2-8℃下运输。建议手术标本在24小时内、活检标本在12小时内送达处理，以最大限度缩短冷缺血时间，保证细胞活性。组织送达后需立即进行机械剪切和酶解消化。机械剪切将组织剪切成1mm³小块，酶解常用胶原酶、分散酶等组合方案。消化后经细胞滤网过滤，评估细胞活力≥70%方可接种。细胞数过少或存活率过低需优化处理或视为高风险样本。接种多采用基质胶滴法，细胞与基质胶按3:7混合。培养基建议以AdvancedDMEM/F12为基础，添加核心生长因子EGF、Noggin、R-spondin1及N2、B27等。不同癌种可在统一框架下微调配方，接种后保持37℃、5%CO₂环境，72小时内首次换液。样本采集与运输的标准化要求样本处理与细胞悬液制备的关键步骤类器官接种与培养基的标准化框架原代培养条件传代时机与形态判断标准标准化传代操作流程传代后处理与记录规范传代时机需依据类器官密度、大小和生长状况综合判断。通常当类器官数量密集、体积增大（如直径超过300µm）或中心出现暗色凋亡区域时即需传代。囊性类器官直径达200-300µm或实心类器官密布全孔视为适宜传代节点，传代周期一般为1-3周。传代操作需先将类器官从基质胶中取出，常用冰冷PBS吹洗解离。离心后加入TrypLE等消化液于37℃水浴消化数分钟，严格控制时间（通常不超过15分钟），待大团块解离为直径<50µm的小细胞簇时立即终止。消化后细胞存活率需≥80%方符合标准。消化终止后以200-400×g低速离心3-5分钟收集细胞，计数后按1:2至1:5比例重新接种。每次传代必须准确记录日期、传代比例、代次及细胞活力等关键数据，并录入信息管理系统确保全过程可追溯，为后续实验提供可靠依据。传代培养操作010203过程记录监控每次传代必须记录日期、传代比例及代次等关键信息，并录入信息管理系统以确保全程可追溯。操作包括用冰冷PBS回收类器官，经TrypLE等消化液适度消化成小细胞簇后，重新接种。当类器官密集生长、直