抗生素抗性基因检测技师考试试卷及答案

抗生素抗性基因检测技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.PCR体系核心成分包括模板、引物、______、dNTP和缓冲液。2.常见β-内酰胺类抗性基因之一是______。3.抗性基因测序常用Sanger和______测序。4.核酸提取中去除RNA的酶是______。5.荧光定量PCR非特异性结合双链DNA的染料是______。6.抗性基因在细菌间传播的方式是______转移。7.抗性基因检测样本类型包括临床菌、环境样本和______样本。8.PCR引物长度一般为______个碱基。9.全国耐药性监测机构是______。10.阴性对照作用是排除______。答案：1.Taq酶（DNA聚合酶）2.blaTEM3.二代（高通量）4.RNaseA5.SYBRGreenI6.水平基因7.食品（动物源）8.18-259.国家细菌耐药性监测网10.污染二、单项选择题（每题2分，共20分）1.不属于抗性基因检测的方法是？A.PCRB.测序C.药敏试验D.ELISA答案：D2.荧光定量PCR中序列特异性染料是？A.SYBRGreenB.EvaGreenC.TaqMan探针D.溴化乙锭答案：C3.针对氨基糖苷类的抗性基因是？A.blaSHVB.aac(6')-IbC.ermBD.tetA答案：B4.核酸提取中避免DNA降解的试剂是？A.EDTAB.蛋白酶KC.RNaseD.DNase答案：D5.PCRCt值指？A.阈值循环数B.平台期循环数C.模板浓度D.产物总量答案：A6.不适合抗性基因检测的样本是？A.新鲜粪便B.冷冻血液C.福尔马林组织D.分离菌菌落答案：C7.抗性基因定位（质粒/染色体）的方法是？A.质粒提取后PCRB.普通PCRC.测序D.电泳答案：A8.同时检测多种抗性基因的技术是？A.单重PCRB.多重PCRC.单通道qPCRD.Sanger测序答案：B9.属于糖肽类抗生素的是？A.青霉素B.万古霉素C.庆大霉素D.红霉素答案：B10.耐药性检测金标准是？A.抗性基因检测B.MIC药敏试验C.测序D.PCR答案：B三、多项选择题（每题2分，共20分，多选/少选/错选不得分）1.抗性基因检测常用方法包括？A.PCR/qPCRB.测序C.微阵列芯片D.药敏试验答案：ABC2.核酸提取关键步骤是？A.样本裂解B.核酸结合C.洗涤D.洗脱答案：ABCD3.PCR引物设计注意事项？A.18-25bpB.避免二聚体C.Tm值相近D.3'端G/C结尾答案：ABCD4.荧光定量PCR类型包括？A.SYBRGreen法B.TaqMan法C.分子信标法D.普通PCR答案：ABC5.样本保存合适条件？A.4℃短期B.-20/-80℃长期C.室温D.福尔马林固定答案：AB6.抗性基因传播途径？A.接合B.转化C.转导D.垂直传播答案：ABCD7.常见β-内酰胺类抗性基因？A.blaTEMB.blaSHVC.blaCTX-MD.ermB答案：ABC8.二代测序前处理步骤？A.核酸提取B.文库构建C.质量检测D.电泳答案：ABC9.耐药性监测内容？A.临床菌耐药率B.抗性基因分布C.抗生素用量D.环境抗性基因答案：ABCD10.检测质量控制指标？A.阳性对照B.阴性对照C.内参基因D.重复实验答案：ABCD四、判断题（每题2分，共20分，√/×）1.PCR必须有模板才能扩增。（√）2.SYBRGreen只结合双链DNA。（√）3.所有抗性基因都在质粒上。（×）4.核酸提取后应立即检测。（√）5.qPCR不需要电泳验证。（×）6.多重PCR可同时扩增多抗性基因。（√）7.抗性基因阳性=细菌耐药。（×）8.测序需BLAST比对确定抗性基因。（√）9.交叉污染不会导致假阳性。（×）10.抗性基因检测仅用于临床。（×）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述2种抗性基因检测方法及原理答案：①qPCR：通过荧光信号实时监测扩增，Ct值与初始拷贝数负相关，TaqMan探针利用酶切释放荧光，SYBRGreen结合双链荧光增强；②二代测序：样本核酸片段化构建文库，高通量测序后比对抗性基因数据库，可同时检测多种基因及丰度。2.核酸提取关键注意事项答案：①样本新鲜：4℃短期、-80℃长期保存；②去杂质：蛋白/多糖/脂类会抑制PCR；③除RNA：RNaseA消化；④防污染：分区操作、无菌耗材；⑤测纯度：A260/A280=1.8-2.0为宜。3.Ct值与基因拷贝数的关系答案：Ct值是荧光达阈值的循环数，PCR指数期模板每循环翻倍，初始拷贝数越多Ct越小（拷贝数差10倍，Ct差≈3.3），可通过标准曲线将Ct转换为具体拷贝数。4.抗性基因传播主要途径答案：①水平转移：接合（性菌毛传质粒）、转化（摄游离DNA）、转导（噬菌体介导）；②垂直传播：子代菌继承染色体/质粒抗性基因；③环境传播：污水/粪便污染土壤水源，扩散至人/动物。六、讨论题（每题5分，共10分）1.如何减少假阳性/假阴性答案：①假阳性：设阴性对照、分区操作、无核酸酶耗材；②假阴性：设阳性对照、确保核酸完整无抑制剂、优化PCR体系（引物特异性、退火温度）、加内参基因（16SrRNA）；③重复实验：3个技术重复减少误差。2.抗