临床病理免疫组化染色技师考试试卷及答案

临床病理免疫组化染色技师考试试卷及答案一、填空题（共10题，每题1分）1.免疫组化中最常用的抗原修复方法包括微波修复、高压修复和______。答案：酶消化修复2.辣根过氧化物酶（HRP）的常用显色底物是______。答案：DAB（3,3'-二氨基联苯胺）3.阳性对照组织应选择______的组织。答案：已知含有靶抗原4.脱蜡步骤中常用的透明剂是______。答案：二甲苯5.抗体孵育后需用______缓冲液充分洗涤。答案：PBS（磷酸盐缓冲液）6.阴性对照常用______代替一抗。答案：非免疫血清（或PBS）7.苏木素复染的主要目的是______。答案：显示细胞核（衬染背景）8.抗原抗体反应具有特异性、可逆性、______和比例性。答案：敏感性9.DAB显色需避光，因易被______氧化。答案：光（或氧气）10.中性树胶封片时需用______调整浓度。答案：二甲苯二、单项选择题（共10题，每题2分）1.脱蜡不彻底会导致（）A.阳性信号增强B.背景染色加深C.抗原丢失D.显色延迟答案：B2.对组织损伤最小的抗原修复方法是（）A.微波修复B.高压修复C.酶消化修复D.加热修复答案：C3.阳性对照的主要作用是（）A.排除假阳性B.排除假阴性C.降低背景D.加快显色答案：B4.避免非特异性染色的方法不包括（）A.封闭充分B.延长洗涤C.提高抗体浓度D.优化抗原修复答案：C5.抗体孵育最适温度通常是（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃答案：A6.苏木素复染后用______分化（）A.盐酸乙醇B.氢氧化钠C.冰醋酸D.无水乙醇答案：A7.靶抗原短期保存常用温度是（）A.-20℃B.4℃C.-80℃D.室温答案：B8.可用于抗原暴露的酶是（）A.胰蛋白酶B.胃蛋白酶C.胶原蛋白酶D.以上都是答案：D9.中性树胶与二甲苯封片比例通常为（）A.1:1B.2:1C.1:2D.3:1答案：A10.阳性信号定位取决于（）A.细胞核B.细胞质C.细胞膜D.靶抗原类型答案：D三、多项选择题（共10题，每题2分）1.抗原修复的目的包括（）A.暴露隐藏抗原决定簇B.恢复抗原活性C.增强结合能力D.去除色素答案：ABC2.常用显色系统有（）A.HRP-DABB.AP-BCIP/NBTC.荧光素标记D.胶体金标记答案：ABCD3.非特异性染色原因包括（）A.封闭不充分B.抗体浓度过高C.洗涤不彻底D.修复过度答案：ABCD4.阳性结果判断要点（）A.定位准确B.符合预期位置C.阳性比例合理D.背景清晰答案：ABCD5.脱蜡至水的正确顺序（）A.二甲苯Ⅰ→Ⅱ→无水乙醇→95%→80%→70%→水B.二甲苯Ⅰ→无水乙醇→Ⅱ→95%→80%→70%→水C.无水乙醇→二甲苯Ⅰ→Ⅱ→95%→80%→70%→水D.二甲苯Ⅰ→Ⅱ→70%→80%→95%→无水乙醇→水答案：A6.抗体保存注意事项（）A.避免反复冻融B.4℃短期保存C.-20℃长期保存D.避光答案：ABCD7.免疫组化关键步骤（）A.脱蜡至水B.抗原修复C.封闭D.抗体孵育及洗涤答案：ABCD8.常用抗原暴露酶（）A.胰蛋白酶B.胃蛋白酶C.木瓜蛋白酶D.链霉蛋白酶答案：ABCD9.避免交叉污染措施（）A.换吸管加试剂B.阳性对照分开处理C.抗体分装D.更换缓冲液答案：ABC10.封片注意事项（）A.避免气泡B.树胶量适中C.轻放盖玻片D.立即镜检答案：ABC四、判断题（共10题，每题2分）1.所有免疫组化都必须抗原修复（）答案：×2.DAB有毒，操作需戴手套（）答案：√3.可省略阳性对照仅用阴性对照（）答案：×4.抗体浓度越高结果越好（）答案：×5.可用无水乙醇代替二甲苯脱蜡（）答案：×6.苏木素复染不影响阳性结果（）答案：√7.阴性对照用非免疫血清代替一抗（）答案：√8.抗原抗体反应不可逆（）答案：×9.DAB显色时间越长信号越强（）答案：×10.封片必须用中性树胶（）答案：×五、简答题（共4题，每题5分）1.简述抗原修复的目的及常用方法答案：目的是暴露甲醛固定中交联隐藏的抗原决定簇，恢复活性，增强结合能力。常用方法：①酶消化（胰蛋白酶、胃蛋白酶，适用于石蜡切片，损伤小）；②加热修复（微波/高压，用枸橼酸盐缓冲液）；③辅助方法（尿素、表面活性剂）。需根据靶抗原选择，避免过度修复破坏抗原。2.如何避免非特异性染色答案：①充分封闭（5%~10%非免疫血清孵育15~30分钟）；②优化抗体浓度（按说明书稀释，避免过高）；③充分洗涤（PBS洗3次，每次5~10分钟）；④灭活内源性酶（3%H₂O₂处理10分钟）；⑤控制孵育条件（4℃过夜比室温特异）；⑥用高特异性抗体。3.阳性/阴性对照的设置原则及意义答案：阳性对照：选已知含靶抗原的组织（如癌组织），与标本同处理，意义是排除假阴性，验证流程有效。阴性对照：①非免疫血清代一抗；②选无靶抗原的组织（如正常肝测肝癌蛋白）；③无关抗体代一抗，意义是排除假阳性，判断背景。4.脱蜡至水的步骤及注意事项答案：步骤：石蜡切片→二甲苯Ⅰ（10min）→Ⅱ（10min）→无水乙醇（5min）→95%→80%→70%乙醇（各5min）→蒸馏水（5min）。注意：二甲苯新鲜，脱蜡充分；乙醇梯度递减；避免切片干涸；最后用蒸馏水去乙醇残留。六、讨论题（共2题，每题5分）1.DAB显色背景染色的原因及解决方法答案：原因：①封闭不充分（内源性Fc受体未封）；②抗体浓度过高；③洗涤不彻底；④修复过度；⑤内源性酶未灭活。解决：①延长封闭时间（30min）或提高血清浓度；②调整抗体稀释倍数；③延长洗涤（每次10min×3）；④降低修复温度/缩短时间；⑤3%H₂O₂灭活内源性过氧化物酶；⑥换高特异性抗体。2.如何判断免疫组化结果的可靠性答案：①对照合格：阳性对