免疫组化病理染色技师考试试卷及答案

免疫组化病理染色技师考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.免疫组化中最常用的抗原修复方法包括微波修复、高压修复和______。2.DAB显色体系的主要成分包括DAB、______和缓冲液。3.石蜡切片脱蜡时常用的试剂是______。4.抗原抗体结合的特点包括特异性、可逆性、______和依赖性。5.免疫组化中常用的酶标记物有HRP、AP和______。6.免疫组化显色剂中，NBT/BCIP的产物颜色为______。7.阳性对照的主要作用是______，确保实验体系有效。8.石蜡切片脱水时常用的乙醇梯度包括70%、80%、95%和______。9.苏木素复染的主要目的是______，便于观察组织形态。10.免疫组化封片常用的油溶性介质是______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下哪种不是酶标记物？A.HRPB.APC.荧光素D.葡萄糖氧化酶2.抗原修复的主要目的不包括？A.暴露抗原决定簇B.恢复抗原活性C.增加抗原浓度D.消除固定交联3.DAB显色时必须加入的辅助试剂是？A.乙醇B.H₂O₂C.二甲苯D.苏木素4.免疫组化最常用的组织固定液是？A.95%乙醇B.10%中性福尔马林C.丙酮D.戊二醛5.脱蜡时二甲苯的作用是？A.溶解石蜡B.固定抗原C.封闭非特异性位点D.显色6.间接法比直接法敏感的原因是？A.抗体用量少B.有放大效应C.步骤少D.无交叉反应7.阴性对照设置的目的是？A.验证抗体特异性B.确保试剂有效C.观察组织形态D.节省试剂8.抗原抗体反应特异性取决于？A.抗原分子量B.抗体浓度C.抗原决定簇与抗体可变区D.反应温度9.阻断内源性过氧化物酶常用的试剂是？A.3%H₂O₂B.10%福尔马林C.乙醇D.二甲苯10.脱水最后一步使用的试剂是？A.70%乙醇B.95%乙醇C.无水乙醇D.二甲苯三、多项选择题（每题2分，共20分，多选/少选/错选不得分）1.免疫组化常用酶标记物包括？A.HRPB.APC.荧光素D.葡萄糖氧化酶E.罗丹明2.抗原修复常用方法有？A.微波修复B.高压修复C.胰蛋白酶消化D.煮沸修复E.甲醛浸泡3.免疫组化常用显色剂有？A.DABB.AECC.NBT/BCIPD.苏木素E.伊红4.组织固定的主要作用包括？A.保持细胞形态B.稳定抗原C.溶解石蜡D.阻断内源性酶E.增加抗原活性5.免疫组化常用方法有？A.SP法B.ABC法C.EnVision法D.直接法E.间接法6.阳性对照选择原则是？A.已知明确阳性组织B.与待检组织同批次处理C.抗体浓度加倍D.省略一抗E.用无关抗体7.非特异性染色常见原因包括？A.血清封闭不足B.抗体浓度过高C.孵育时间过长D.内源性酶未阻断E.脱蜡不彻底8.石蜡切片脱水乙醇梯度通常包括？A.50%B.70%C.80%D.95%E.无水乙醇9.苏木素复染注意事项有？A.控制时间B.分化彻底C.冲洗干净D.避免与DAB重叠E.浓度越高越好10.封片注意事项包括？A.无气泡B.封片剂适量C.立即观察D.避免组织皱褶E.用二甲苯冲洗四、判断题（每题2分，共20分，√/×）1.免疫组化抗原修复只能用微波法。（）2.DAB显色产物为棕色。（）3.10%中性福尔马林固定时间越长，抗原保存越好。（）4.阴性对照需将一抗替换为无关抗体，其他步骤同待检组。（）5.间接法比直接法敏感。（）6.酶消化法适用于所有抗原修复。（）7.脱水时乙醇浓度应从低到高梯度进行。（）8.中性树胶是水溶性封片剂。（）9.阳性对照可使用不同批次试剂。（）10.免疫组化结果判断仅需观察阳性细胞数。（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述免疫组化抗原修复的目的及常用方法。2.简述DAB显色的操作要点。3.简述阳性对照和阴性对照的设置目的。4.简述非特异性染色的常见原因及解决方法。六、讨论题（每题5分，共10分）1.讨论如何提高免疫组化染色的特异性？2.讨论不同固定液对免疫组化结果的影响及注意事项。---答案部分一、填空题答案1.酶消化法（胰蛋白酶消化）2.H₂O₂（过氧化氢）3.二甲苯4.比例性5.葡萄糖氧化酶6.蓝色7.验证实验体系有效性8.无水乙醇9.显示细胞核10.中性树胶二、单项选择题答案1.C2.C3.B4.B5.A6.B7.A8.C9.A10.C三、多项选择题答案1.ABD2.ABCD3.ABC4.AB5.ABCDE6.AB7.ABCDE8.BCDE9.ABCD10.ABD四、判断题答案1.×2.√3.×4.√5.√6.×7.√8.×9.×10.×五、简答题答案1.目的：消除福尔马林固定导致的抗原交联，暴露抗原决定簇，恢复抗原活性。常用方法：①微波修复（加热缓冲液断裂交联）；②高压修复（高压高温快速修复）；③酶消化（胰蛋白酶/胃蛋白酶，适用于部分抗原）。2.操作要点：①新鲜配制DAB液（DAB+缓冲液+H₂O₂）；②避光孵育3-10分钟；③显微镜下观察（阳性呈棕色，背景清晰）；④自来水冲洗终止；⑤避免过度显色。3.阳性对照：用已知阳性组织，验证抗体/试剂有效，排除假阴性；阴性对照：替换一抗为无关抗体，排除非特异性染色（如交叉反应、内源性酶），确保结果特异性。4.原因：血清封闭不足、抗体浓度过高、内源性酶未阻断、脱蜡不彻底。解决方法：延长封闭时间（30分钟）、优化抗体浓度、充分阻断内源性酶（3%H₂O₂孵育10分钟）、确保脱蜡彻底（二甲苯浸泡2次各5分钟）。六、讨论题答案1.提高特异性方法：①选特异性克隆抗体；②充分封闭非特异性位点（10%山羊血清）；③优化抗体浓度/孵育条件；④设置严格对照（阳/阴/空白）；⑤彻底阻断内源性酶（HRP用H₂O₂，AP用左旋咪唑）；⑥避免抗体交叉反应（匹配二抗种属）。2.固定液影响及注意事项：①10%中性福尔