（正式版）DB4505∕T 0008-2023 《岛礁贝类生态增殖技术规范》

4505TechnicalspecificationforecologicI 1 13术语和定义 14海域选择 24.1自然条件 24.2海水理化条件 25物种选择 2 2 2 2 37.3检验内容与方法 3 3 3 38.3底播增殖 49增殖容量 4 410.1潜水员和设备 410.2潜水断面设置 410.3丰度监测与计算 4 411.1基于贝类丰度的增殖效果 411.2基于环境DNA的增殖效果评估 5 5 6附录A(规范性)贝类生态增殖放流情况记录表 附录B(资料性)基于环境DNA的贝类丰度计算 8B.1特异性qPCR扩增引物设计 8B.2PCR扩增、质粒构建及质粒标准模板制备 8B.3DNA标准定量曲线制作 8B.4环境DNA的qPCR扩增及贝类丰度计算 8附录C(资料性)基于微卫星分子标记的贝类增殖群体回捕占比率计算 C.6贝类回捕抽样样本的遗传区分及回 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。1岛礁贝类生态增殖技术规范GB/T12763.6海洋调查规范第6部分：海洋SC/T9401.6水生生物增殖放流技术规程第6部SC/T9401.11水生生物增殖放流技术规程第11部分：投放农业部公告第1125号一、二、三类动物疫病病种目录（水生动生态增殖ecologicalenhanc适应性驯化adaptivedome通过播撒底栖生物苗种到适合的海底生境中，利用天然生产力增加放流种群产量的过从环境样本中提取的所有DNA的集合，包括环境微生物以及从生物体上脱落下来的活细胞DNA和因24.1自然条件18℃~35℃规格等级小规格中规格3规格合格率≥90%以上，死亡个体比例、伤残生动物疫病病种b)投放贝类小规格苗种10000个或中规格苗种4000个或大规格苗种2000个，每10m²投放与贝8.2.1水运法48.3.1底播时间5增殖效果评估分级优良差增殖效果评估分级优良差增殖效果评估分级优良差67pH8分别针对所有用于生态增殖的贝类种类的线粒体COI基因或基因组DNA特异区域设计种特异性qPCRST——质粒浓度，单位为拷贝/μL；6.02×1023——阿伏伽德罗常数，单位为拷贝/mol；CON——质粒检测浓度，单位为μg/μL；660——碱基对平均分子量，单位为NT——质粒碱基数量，单位为bp。用本文件B.1设计的特异性引物进行qPCR扩增，以测得的扩增循环数(Ct值)为纵坐标，以质粒浓度的对使用标准采水器收集贝类生态增殖海域的底层海水，每个点采集膜对底层海水进行过滤，剪碎滤膜，采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒对滤膜上的生物样本进行B.4.2环境DNA的qPCR扩增及增殖种扩增体系为20μL，测量样品Ct值，通过标准曲线，求得Ct值9在调查海域至少设置采样点6个，采集采样点海域的底层海水500mL，提取环境DNA，并按照本文件B.4.2的方法对样品中生态增殖种类贝类的DNA进行定量，底层海水中生态增殖种类贝类DNA丰度的计算）：AE——调查海域底层海水中生态增殖种类贝类DNA丰度，单位为拷贝/mL；AEij——调查海域第i个采样点底层海水中第j种生态增殖种类贝类DNA丰度，单位为拷贝/mL。样本采集后，用剪刀剪取一块200mg～500mg的贝类体壁组织，置于10mL离心管中，加入5mL95%采用常规的海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取贝类样本DNA，DNA浓度≥50ng/μL，对于每个用于生态增殖的贝类种类，分别筛选具有种特异性的高度多态性SSR标记。筛选方法为：采集不同地理分布的各种贝类群体，进行基因组测序并利用MISA软件分别查找具有地理差异的各种贝组中分别筛选出20个～30个具有高度多态性C.6贝类回捕抽样样本的遗传区分及回捕占利用本文件C.5的分型结果，通过GenAIEx6.51b2和原生种群间的遗传距离，如某一种类贝类回捕抽样样本与该种类增殖苗种群体具有相似的分子遗传特征，且聚为一类时，可确定其为该种类增殖群统计每种贝类回捕抽样样本中增殖群体的回捕个体数，计算贝类增殖群体回捕占比率的方法见公）：,=∑-/∑#×100%············