（正式版）DB43∕T 1823-2020 《茄果类蔬菜烟草花叶病毒病综合防控技术规程》

茄果类蔬菜烟草花叶病毒病综合防控技术规程oftheSolanaceousVegeta2020-08-25发布2020-11-25实施前言 Ⅲ1范围 12规范性引用文件 3术语和定义 4发生规律 5病害诊断 15.1室内检测 6防治方法 26.1防治原则 26.2农业防治 26.3生物防治 26.4田间诊断 26.5化学防治 27档案管理 3附录A(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病症状 4附录B(规范性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒分子生物学检查 5附录C(规范性附录)药剂防治病毒病一览表 7附录D(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病田间调查 8附录E(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病防控效果评估 9工本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由湖南省农业农村厅提出。本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：湖南省植物保护研究所、湖南省蔬菜研究所、东北农业大学、永州市农业科学研究所、平江县农业农村局、保靖县农业农村局、津市市植保植检站、武冈市农业农村局植保植检站、安乡县植保植检站。本标准主要起草人：刘勇、张德咏、彭静、张战泓、程晓非、周涛、吕军、王俊华、马家湘、廖用信、叶波、高阳、张卓、张松柏、孙书娥、谢钢、彭谦泽。本标准适用于茄果类蔬菜由烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)侵染引起的花叶病毒病的件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。采用TRIzol法提取植株叶片总RNA,反转录合成cDNA,带该病毒，具体方法和检测结果见附录B。2为害，尽量减少化学农药的使用，安全、经济、有效地将病害造成的损失控制在经济允茄果类蔬菜种子播种前用55℃温开水浸种15min,去除种子表明的病原菌和黏液，用10%的磷酸三钠溶液浸种0.5h左右，捞出后用清水冲洗3次后播种；或采用包衣种子。科学进行肥水管理，控制化学肥料的使用。在作物的不同生育期喷施300倍光合细菌菌剂，增强其续喷施2次，轻病症田块连续喷施3-4次，中度以上发病田块连续喷施5-6次，每次喷施间隔5d-7d。药剂及用法见附录C。扭曲、皱缩、边缘向内弯曲，重病植株植株严重矮化甚至死亡。症状特征详见附录A。6.5.1烟草花叶病毒病以预防为主，定期喷施高效低毒农药进行防治，严禁使用国家明令禁止使用的高毒、高残留化学农药，化学农药交替使用。通常在苗期开始喷施药剂，之后连续喷施3-4次，每次喷施间隔7-10d,进行病毒病预防与防治。农药的安全隔离期要符合GB4285的规定，常用药剂及用法见附录C。6.5.2根据田间定点系统调查和普查调查37档案管理田间防治烟草花叶病毒病防治方法应如实做好记载，及时检查药剂使用情况及效果，建立防控档案。具体调查内容及评估方法参见附录D和E。4附录A(资料性附录)茄果类蔬菜烟草花叶病毒病症状茄果类蔬菜感染烟草花叶病毒后，心叶出现叶片明脉或轻微花叶症状；随后新叶及中部叶片出现花叶症状，植株轻微矮化；随着病毒的进一步侵染，叶片畸形、皱缩，严重时，整株叶片严重花叶、畸形，植株明显矮化，甚至死亡。番茄植株感染烟草花叶病毒的典型症状见图A1,辣椒植株感染烟草花叶病毒的典型症状见图A2。图A1番茄植株感染烟草花叶病毒症状图A2辣椒植株感染烟草花叶病毒症状5附录B(规范性附录)(1)取约0.1g叶片于2mLRNase-free离心管，液氮速冻后冷冻组织研磨，至样品研磨为均匀(2)在样品解冻前，加入1mLTrizol,充分混匀，室温静置5min,加入0.2mL三氯甲烷，涡旋震荡15s,静置1-2min,至出现明显分层，4℃12000g离心15min。(3)小心吸取离心后上清液于1.5mLRNase-free离心管，加入等体积75%乙醇，-20℃沉淀1-2h,(5)重复操作(4),弃上清后瞬离离心管，使管壁上的液体集中于离心管底部。(6)移液枪小心吸出多余液体，风干5-10min。加入50-100μL去RNase水溶解。(7)凝胶电泳和NanoDrop检测RNA的质量和浓度，-80℃保存备用。2.RT-PCR扩增目的片段(1)使用HiScriptⅡ1stStrandcDNASynthesisKit试剂盒逆转录，反应体系见下表：体积(μL)定容至20反应程序：25℃:5min,50℃:45(2)引物序列表B2引物序列病毒引物名称引物序列片段长度(bp)体积(μL)TransStartTopDNAPolcDNA模板定容至50反应程序：94℃预变性10min,94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸2min30s,循环30次；最后72℃延伸20min,4℃保存。2.PCR产物凝胶电泳检测1%琼脂糖凝胶电泳检测，取5μL扩增产物与2μLSYBRGreenI染料、3μLloadi混匀，点入点样孔，加入电泳缓冲液，100V,电泳30min。电泳结束后，凝胶成像系统观察并拍照记录。扩增片段与阳性样品大小一致，则说明植株被TMV侵染，结果见附录图B1植株叶片携带TMV检测M:Ma7附录C(规范性附录)防治防治药剂安全间隔期防治时期喷雾535%氨基寡糖素可溶性水剂喷雾13喷雾53喷雾收获期收获38附录D(资料性附录)日期前茬曾使用过防治方法防治病当茬当前使用防治方法防治效果9附录E(资料性附录)E1植株病情分级标准(以株为单位)每块田，5点取样法，每个点选择20株以上的植株——0级：全株无病毒病症；——1级：心叶明脉或轻微花叶，病株无明显矮化；——3级：心叶及中部叶片花叶，或病株矮化为正常株高的3/4以上；——5级：心叶及中部叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩，或植株矮化；——7级：重花叶，多数叶片畸形、皱缩，植株矮化；—