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DB21Developmentthemethodofreal-timefluorescentRT-PCRfordetectionofPPRV辽宁省市场监督管理局发布I II 1 1 1 1 1 2 2 4 4 5标准起草单位通讯地址：辽宁省动物及产品检疫中心（沈阳市沈河区万柳塘路105号甲），1小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法本标准规定了小反刍兽疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的病学调查，适用于反刍动物血液血清、淋巴结及口鼻棉拭子中小反刍GB/T19495.2-2004转基农业部关于印发《病死及病害动物无害化处理技术规范》的通知（农医PPRV：小反刍兽疫病毒（PestedesPetitsRuminantsviRNA：核糖核酸（ribonucleicRNase：核糖核酸酶（ribonuclDEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyrocarbonatRT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptionpolymerasechainreactidNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriPBS：磷酸盐缓冲液（phosphatebuffersolutTAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液（Trisacetate-EDTAbuf基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应通道的信度进行实时监测和输出，实现检测结果的定性5.1台式冷冻离心机（离心范围0～2注：本标准中使用的试剂，除另有说明外，所有实验使用的试剂等级均为不含R3实验室检测。按照《兽医实验室生物安全技术管理规范》进行样品的生物安全标反应体系的成分：去离子水7.5ul，上游引物PPRVF0.5ul，下游引物PPRVR0.5ul，探针7.2.4.2取样本准备区准备好的PCR反应管，放置体系阶段11(此阶段结束时采集荧光信号)为直线或轻微斜线，无明显指数增长期和平台期。试验成立，参考图如下：0阳性：样本检测结果Ct值≤40,有明显指数增长，表明样本中检测出该病毒核酸；阴性：样本检测结果Ct值>43或无Ct值，表明样本中未检测出该病毒核酸；可疑：样本检测结果Ct值在40~43范围，判定为可疑；此时应对样本进行重复检测，如重复实验结果Ct值仍在40~43范围，有明显指数增长，则判定为阳性，

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