饲料中香芹酚和百里香酚含量的测定高效液相色谱法

CS65.120

CCSB46

团体标准

T/SXSL00X-2022

饲料中香芹酚和百里香酚含量的测定

高效液相色谱法

Determinationofcarvacrolandthymolcontentinfeed-High

performanceliquidchromatography

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

陕西省饲料协会发布

饲料中香芹酚和百里香酚含量的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了饲料中香芹酚和百里香酚的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中香芹酚和百里香酚的

测定。

本文件香芹酚和百里香酚的检出限为0.25mg/kg，定量限为0.75mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引

用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

订单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有特别需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的香芹酚和百里香酚用乙腈提取，经过C18吸附材料和硅酸镁吸附材料净化、过滤后注

入高效液相色谱仪，用紫外检测器检测，外标法定量。

5试剂和材料

除特别注明外，仅使用分析纯的试剂。

4.1水，GB/T6682，一级水。

4.2乙腈，色谱纯。

4.3无水乙醇。

4.4冰乙酸。

4.5香芹酚标准贮备液（1mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.00001g）香芹酚标准品（CAS:499-75-2，

纯度≥98.0%）于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，混匀。于4℃以下保存，有效期6

个月。

4.6百里香酚标准贮备液（1mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.00001g）百里香酚标准物品

（CAS:89-83-8，纯度≥98.0%）于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，混匀。于4℃以下

保存，有效期6个月。

4.7混合标准中间液（100μg/mL）：准确吸取香芹酚标准贮备液和百里香酚标准贮备液各1mL于

10mL棕色容量瓶中，用初始流动相（4.9）定容，混匀。于4℃以下保存，有效期为3个月。

4.8标准系列溶液：准确吸取混合标准中间液（4.7）0.02mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、

10.0mL于100mL棕色容量瓶中，用流动相（4.9）稀释定容，配制成浓度分别为0.02μg/mL、0.1μg/mL、

0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、10.0μg/mL的系列标准工作溶液。临用现配。

4.9流动相：用水稀释10mL冰乙酸至1000mL，混匀。量取500mL与500mL乙腈混匀。临用

现配。

4.10C18吸附材料。

4.11硅酸镁吸附材料。

4.12滤膜：有机系，0.22μm。

5仪器设备

5.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.0001g。

5.3离心机：转速≥10000r/min。

5.4超声波提取仪。

5.5涡轮混合器：转速≥1000r/min。

6样品

选取具有代表性的样品至少500g，按照GB/T20195试样制备方法，用四分法缩减至200g，

全部粉碎，全部通过0.45μm孔径分析筛，充分混匀后，装入密闭容器中，作为试样备用。

7试验步骤

7.1提取

平行做两份试验。称取2g（精确至0.0001g）试样于50mL离心管中，准确加入10mL乙腈（4.2），

涡旋1min，超声提取20min，期间每隔5min摇一次，于8000r/min离心5min，取全部上清液转入

另一离心管中，残渣用10mL乙腈复提取一次，合并提取液，待净化。同时做空白试验。

7.2净化

移取上清液5mL于10mL离心管中，加入0.1gC18吸附材料（4.10）和0.1g硅酸镁吸附材料

（4.11），涡旋混匀1min，静置1min，取上清液过膜（4.12）后待测。

7.3液相色谱参考条件

色谱柱：C18色谱柱，250×4.6mm，粒度5μm，或性能相当者。

流速：1.0mL/min。

柱温：30℃。

波长：275nm。

进样量：10μL。

8试验数据处理

试样中香芹酚和百里香酚的含量w以质量分数表示，单位为毫克每千克（mg/kg），按（1）计

算：

퐶푖×푉×1000

푤=×푛.......................（1）

푖푚×1000

式中：

Ci—从标曲中查得的试样中香芹酚或百里香酚的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；

V—试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；

m—试样的质量，单位为克（g）；

n—试样的稀释倍数。

测定结果用平行测定的算数平均值表示，结果保留三位有效数字。

9精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果与这两个测定值算数平均值的绝对差值不大于该平

均值的10%。

前言

本文件按照GB/T1.1－2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》的

规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由陕西省饲料协会提出并归口。

本文件起草单位：

本文件主要起草人：

本文件为首次发布。

饲料中香芹酚和百里香酚含量的测定高效液相色谱法

1范围

本文件规定了饲料中香芹酚和百里香酚的高效液相色谱测定方法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中香芹酚和百里香酚的

测定。

本文件香芹酚和百里香酚的检出限为0.25mg/kg，定量限为0.75mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引

用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

订单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有特别需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的香芹酚和百里香酚用乙腈提取，经过C18吸附材料和硅酸镁吸附材料净化、过滤后注

入高效液相色谱仪，用紫外检测器检测，外标法定量。

5试剂和材料

除特别注明外，仅使用分析纯的试剂。

4.1水，GB/T6682，一级水。

4.2乙腈，色谱纯。

4.3无水乙醇。

4.4冰乙酸。

4.5香芹酚标准贮备液（1mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.00001g）香芹酚标准品（CAS:499-75-2，

纯度≥98.0%）于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，混匀。于4℃以下保存，有效期6

个月。

4.6百里香酚标准贮备液（1mg/mL）：准确称取10mg（精确至0.00001g）百里香酚标准物品

（CAS:89-83-8，纯度≥98.0%）于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇溶解定容，混匀。于4℃以下

保存，有效期6个月。

4.7混合标准中间液（100μg/mL）：准确吸取香芹酚标准贮备液和百里香酚标准贮备液各1mL于

10mL棕色容量瓶中，用初始流动相（4.9）定容，混匀。于4℃以下保存，有效期为3个月。

4.8标准系列溶液：准确吸取混合标准中间液（4.7）0.02mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、

10.0mL于100mL棕色容量瓶中，用流动相（4.9）稀释定容，配制成浓度分别为0.02μg/mL、0.1μg/mL、

0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、10.0μg/mL的系列标准工作溶液。临用现配。

4.9流动相：用水稀释10mL冰乙酸至1000mL，混匀。量取500mL与500mL乙腈混匀。临用

现配。

4.10C18吸附材料。

4.11硅酸镁吸附材料。

4.12滤膜：有机系，0.22μm。

5仪器设备

5.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2分析天平：感量0.00001g和0.0001g。

5.3离心机：转速≥10000r/min。

5.4超声波提取仪。

5.5涡轮混合器：转速≥1000r/min。

6样品

选取具有代表性的样品至少500g，按照GB/T20195试样制备方法，用四分法缩减至200g