DB14 807-2013 山羊胚胎移植技术规程

2014-01-20实施2014-01-20实施I 1 13术语和定义 1 2 2 27供体母羊超数排卵 入……………………8受体母羊的准备 39受体母羊同期发情 310胚胎采集与质量鉴定 4 5 附录A(规范性附录)试剂、药品、生物制剂和激素 7附录B(规范性附录)山羊胚胎移植主要仪器、器具及用品 8附录C(规范性附录)器具的洗涤与灭菌 9 10附录E(资料性附录)山羊胚胎移植记录表 附录F(规范性附录)胚胎质量评定 15件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。将超数排卵及配种后优种母羊体内的早期胚胎取出或体外获得的早期胚胎移植到同期发情受体母2B、附录C、附录D,记录表格见附录E。胚胎操作室要求密闭良好、菌、无尘，面积不小于20m²,室内温度为25℃~30℃,配备有照明6.2种公羊3用埋植器将CIDR放入供体母羊阴道内，放入之日为第1d,第11d更换CIDR,第15～16d开始用递减方法连续4d注射FSH,每天2次，间隔12h,注射总量9mL~10mL(180mg～200mg)。最后续4d注射FSH,每天2次，间隔12h,注射总量9mL~10mL(180mg~200mg)。超数排卵处理结束12h后，将试情公羊放入供体母羊群中(试情公羊!母羊=1:30),以母羊站立接受试情公羊爬跨作为发情标准，上、下午各试情一次，每次1h左右，做好发情母羊的标记和记录。供体母羊发情后，采用公羊本交或人工授精方法进行配种，每天上、下午各1次，共配种3～4次。受体羊与供体羊同一时间放入CIDR,取出CIDR的时间比供体羊早8h～9h,取CIDR时肌肉注4供体羊手术前停食24h,可自由饮水。手术前一天，将手术部位(乳房前腹中线部或后肢股内侧鼠mL～10mL冲胚液(37℃)的注射器，匀力推注射器，使冲胚液依次经输卵管、硅胶管流入集胚皿。用510.4缝合160万单位，然后将羊轻轻从手术架上抬下放到室外，待羊苏醒后赶进羊舍。11胚胎移植6移植胚胎的受体羊统一按妊娠母羊进行管理，但要注意观察其胚胎移植后2个发情周期内是否发7盐水、甘油、蔗糖、洗涤剂、静松灵、0.1%新洁尔灭、碘酒、70%～75%酒精等，各种化学试剂均为分8一次性创口巾2台1台6台4台鼠齿镊10把台1台天平(万分之一)台台超净工作台台冲胚管(8g3cc、10g3cc)1个1个培养皿(φ35mm、φ100mm)1台1台注射器(2mL、5mL、10mL、20mL)液氮罐(10L、3L)烧杯(500mL、250mL、100mL)量筒(100mL、50mL、25mL)定量瓶(500mL、100mL、50mL)试剂瓶(50mL、100mL、500mL)12套橡胶手套(一次性)PE手套(一次性)9C.1.2刷洗刷洗的玻璃器皿和金属器械用自来水反复冲洗，直至洗涤剂冲洗干净，然后用超纯水(阻值16MΩ以上)涮洗2～3次，晾干备用。表D.1PBS液配制及灭菌成分氯化钙(CaCl₂)147.020.68氯化镁(MgCl₂或MgCl2.6H₂O)95.21或203.30.5磷酸二氢钾(KH₂PO₄)136.091.47磷酸氢二钠(Na₂HPO₄或Na₂HPO4.7H₂O或142.0或268.0或358.08.090.05或0.11.15或2.16或2.向烧杯中加入约800mL的超纯水(阻值16MQ～18MQ),充分搅拌溶解。3.用盐酸将PH值调节至7.2～7.6,然后加入超纯水(阻值16MΩ~18MΩ)定溶至1L。4.高温(120℃)高压(0.105Mpa)灭菌20min~30min,4℃保存。使用进口成品PBS粉剂配制方法，根据产品使用说明含量(g)氯化钠(NaC1)8.0氯化钾(KC1)0.2氯化钙(CaCl₂)0.1氯化镁(MgCl₂或MgCl2.6H₂O)0.05或0.10.5或1.0磷酸二氢钾(KH₂PO₄)0.2磷酸氢二钠(Na₂HPO₄或1.15或2.165.75或10.811.5或21.6D.3胚胎保存液的配制及灭菌供体羊号品种放CIDR时间换CIDR时间撤CIDR时间时分发情时间配种时间地点第一次发情结束时间持续时间第二次第三次配种公羊号采胚日期采胚开始时间采胚结束时间检胚人员：检胚人员：地点：CCIDR批放CIDR时撤CIDR时PMSG厂家、l间间批号PMSG注射PMSG发情日备受体羊号发情日期移植时间卵巢黄体、红体数(左/右)卵泡数(左/右)子宫或输卵管移植(左/右)参加人员：