（正式版）DB21∕T 3429-2021 《蒙古栎SSR分析技术规程》

DB21TechnicalRegulationsofSSRanalysisinQuercusmon辽宁省市场监督管理局发布I I高旭、李昀峰、扈延伍、曹颖、刘金义、庞家举、许家铭、翟金凤、），I1蒙古栎SSR分析技术规程本文件规定了蒙古栎SRR分析技术的定义和术语、仪器设备、溶液配制、引物和分4仪器设备及试剂2-20℃预冷，用自来水、蒸馏水先后冲洗叶面，再用滤纸吸干水分。），糖凝胶上电泳15min~20min，稳压90V，电泳缓冲液为1×TBE，325nm紫外灯下观察，照相，检测提取DNA的质量。按照GB/T28663），将长板玻璃板平铺于通风橱内，边条擦拭干净后置于长板玻璃板两侧，随后用短板玻璃板整齐地压盖住，确认边条与两玻璃板均对齐后，将其配制1%的琼脂糖凝胶，煮沸后用胶头滴管吸取，沿底边从左至右缓缓灌注入封胶框中，避免出现气泡，待琼脂糖凝胶完全漫过玻璃板底部，停止灌注，放置于按照LY/T2756要求的方法进行灌胶。灌胶后，将梳子轻轻插入灌胶口中，室温凝固3待凝胶完全凝固后，将装有凝胶的玻璃板轻轻从制胶板上取下，灌胶口向内用夹子固定在电泳槽上，使用1×TBE缓冲溶液灌注电泳仪的上下两槽，使下槽溶液漫过封胶框，上槽溶液漫过灌胶孔。垂照，电泳在200V稳压，电流100mA条件下进行，电泳时间约为1.54电泳结束，关闭电源，将上槽中1×TBE缓冲液放出，取下固定的夹子，去掉下部琼脂糖，取下玻璃板。将玻璃板水平放置，用起胶铲沿灌胶口一侧边缘将玻璃板缓慢撬起，将紧贴有凝胶的玻璃板放入装有双蒸水的洗胶盘中轻轻摇晃，待凝胶与玻璃板完全分离后，取出玻璃板，放净双蒸水。计算检测样品间的遗传相似性水平。采用非加权组平均法（unweightedpair-groupmethodwitharithmeticmeans,UPGMA）进行聚类分析；绘制聚对6-FAM和HEX荧光标记的PCR产物用超纯水稀释30倍（注：不同荧光标记的扩增产物他的最适稀释度通过预实验确定）。分别取等体积的上述2种稀释液混合，从中吸取1μL加入到基因分析仪专用965SSR广泛分布于蒙古栎基因组中，不同蒙古栎种源或家系间每个SSR位点重复单位的数量可能不6PCR仪、基因分析仪、凝胶成像系统、水平电泳槽及配套的制胶配件、垂直电泳槽及配套的制件、台式低温高速冷冻离心机、超微量紫外/可见分光光度计、高压灭菌锅、液氮罐、超低温冰箱、高Marker、丙烯酰胺、过硫酸铵（APS）、四甲基乙二胺（括FAX、HEX荧光标记DNA片段）、D7退火温度(℃)N1010265N1014482N1105306N1110207N1345390N12361N1247890N1457047N4544558N45298408D.1.10.5mol/LEDTA-二钠（pD.1.21mol/LTris-HCl（将24.22g三羟甲基氨基甲烷溶解于160mL水中，用浓盐酸（HCl）调节pH至8.0，用超纯水定容至将58.44g氯化钠（NaCl）溶于160mL水中，定容至200mL，高压灭mmol/LEDTA（0.5mol/L，pH8.0）和1.称取80g氢氧化钠（NaOH先用1606×DNALordingBuffer，其中含0.05%（质量分数）溴酚蓝、液的比例，混匀DNA样品和DNA上样缓冲液后，直接加到点样孔即可。），