《微生物检验技术培训课程》课件-弧菌科检验

弧菌科检验VIBRIOFAMILYTESTING学习目标掌握霍乱弧菌、副溶血性弧菌的主要特征及微生物学常规检验1熟悉霍乱弧菌、副溶血性弧菌的致病性2弧菌科包括弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光菌属。引起人类致病不致病弧菌属弧菌属是一群氧化酶阳性，发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感的细菌，钠离子能刺激其生长（耐盐），有些菌株具有嗜盐特点（在无盐时不能生长）。弧菌属目前发现本属细菌共有36个种，大多数不致病。霍乱弧菌O1群和O139群，引起霍乱（甲类传染病）。副溶血性弧菌，引起食物中毒。霍乱发病急，传染强，死亡率高一、霍乱弧菌1.生物学特征——形态与染色：弧性或逗点状（新标本分离）。革兰染色阴性。有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼。米泔水样粪便中排列呈“鱼群穿梭状”。一、霍乱弧菌霍乱弧菌米泔样粪便直接涂片镜检一、霍乱弧菌米泔水样粪便中排列呈“鱼群穿梭状”一、霍乱弧菌1.生物学特征——培养特性：兼性厌氧，最适生长温度35℃，耐碱不耐酸，在PH7.4-9.6范围内能生长，尤其在PH8.5-9.2碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好。初次分离时常用碱性蛋白胨水(APW)增菌。由于其他杂菌受到抑制，而霍乱弧菌经6-9小时可在液体表面大量繁殖，形成菌膜。一、霍乱弧菌在选择性培养基硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS)上，霍乱弧菌可形成较大的菌落，因发酵蔗糖产酸而使菌落黄色。一、霍乱弧菌1.生物学特征——血清学分型：根据O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成155个血清型。根据是否与O1抗血清凝集分为两大群：霍乱弧菌O抗原不典型O1群霍乱弧菌：不致病血清学分型：抗原因子生物学差异分型小川型（AB）稻叶型（AC）彦岛型（ABC）EI-Tor生物型小川型（AB）稻叶型（AC）彦岛型（ABC）古典生物型O1群霍乱弧菌引起霍乱（七次大流行）（凝集）O1群霍乱弧菌非O1群霍乱弧菌：O2~O138，引发肠胃炎（无凝集）非O1群霍乱弧菌O139群霍乱弧菌1992在印度发现一种非O1群霍乱弧菌引起的霍乱样腹泻病的暴发流行，该菌既不与O1群霍乱多价抗血清凝集，也不与O2—O138群霍乱弧菌菌体“O”抗原发生凝集，是一种新的弧菌，因而命名为O139群霍乱弧菌。一、霍乱弧菌1.生物学特征——抵抗力：对热、日光、干燥、酸、消毒剂敏感，但耐碱力较强。100℃煮沸1-2分钟可杀灭细菌；对低温的耐受力强，4℃条件下在牛奶、肉和鱼虾等水产品中的存活时间可以达到3~4周时间。用1:4漂白粉处理患者排泄物或呕吐物，1h后达到消毒目的。一、霍乱弧菌2.临床意义人类是唯一易感者。到达小肠后：黏附繁殖，霍乱毒素（外毒素），肠细胞分泌紊乱。抢救不当，发病后数小时至十多个小时内死亡，死亡率高达60%。一、霍乱弧菌3.微生物学常规检验标本采集：发病早期及使用抗菌药物前采集的标本患者或疑似患者米泔水样粪便、呕吐物。直肠棉拭由肛门插入直肠内3-5cm处采取。其他传播环节：食物、水、环境类样本。标本运送：霍乱弧菌不耐酸和不耐干燥，应及时接种，及时送检6小时内20℃-25℃，保存液碱性蛋白胨水或卡-布运送保存液，专人送检。一、霍乱弧菌检验程序标本增菌培养（碱性蛋白胨水）初步报告直接涂片动力、制动试验分离培养（TCBS、碱性琼脂平板）血清学鉴定（01多价血清或0139血清）生化鉴定、分型（氧化酶试验+、霍乱红试验+、黏丝试验+、血清学分型）确诊报告快速诊断6-8小时18-24小时二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒嗜盐性弧菌，广泛分布于近海的海水、海底的沉积物和鱼类、贝类海产品中。二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒1.形态与染色G-杆菌，有多形性，弧状、杆状等。有极端鞭毛，运动活泼，无芽胞、无荚膜。二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒2.培养特性条件：营养要求不高，最适3.5%氯化钠，无盐或高盐浓度（8%）不生长；需氧，兼性厌氧；pH7.7~8.0最适，pH9.5仍可生长；35℃最适生长。液体培养基：碱性蛋白胨水中形成菌膜。TCBS：不发酵蔗糖。呈现绿色或蓝绿色菌落。TCBS二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒3.生化反应所有生化反应培养基均加入3.5%NaCl。鉴别意义反应：蔗糖发酵试验和嗜盐试验。神奈川现象（KP）KP阳性：几乎病患中分离的96.5%菌株能溶解人和兔红细胞，不溶解马红细胞。KP阴性：从海水及海产品中分离的非致病菌株多不能溶解人和兔红细胞。二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒4.抵抗力---弱对氯、苯酚（石炭酸）等消毒剂敏感，不耐热，65℃30分钟即被杀死。1%食醋中5min死亡。在淡水中生存不超过2日，但在海水中能生存47天以上，盐渍酱菜中存活30天以上。耐碱不耐酸，在2%冰醋酸或食醋中5分钟死亡。二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒5.临床意义（食物中毒和急性肠胃炎）烹饪不当或污染海产品盐渍食物潜伏期24h肠道感染，呕吐、腹泻等肠道外感染KP阳性菌株二、副溶血性弧菌--引起沿海食物中毒6.