汞离子单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

II汞离子单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立摘要汞离子（Hg²⁺）作为重金属污染物，在生态系统迁移转化过程中可通过食物链富集，对生态环境及人体健康产生不利影响。人类主要通过食物链摄入汞离子或直接接触含汞污染物，会引发各种健康问题，增加医疗负担，降低人们的生活质量。本研究以汞离子单克隆抗体制备及检测方法开发为核心目标，通过优化杂交瘤细胞筛选与克隆化培养技术，实现汞离子单克隆抗体的高效制备。在此基础上，基于所获抗体构建酶联免疫吸附测定（ELISA）检测体系，旨在为重金属汞离子的快速检测提供新方法，进一步完善其检测技术体系。以螯合剂（DTPA）与汞离子螯合的方式形成半抗原后，可进一步将其与载体蛋白（BSA）进行偶联，通过紫外光谱、SDS电泳等途径鉴定获得的人工免疫原Hg2+-DTPA-BSA；使用免疫原性好的Hg2+-DTPA-BSA免疫小鼠，利用杂交瘤技术，通过细胞融合、有限稀释法克隆化培养，筛选出强阳性的杂交瘤细胞株。结果显示，Hg2+-DTPA-BSA已成功制备，具有良好的特异性和较高的亲和力，其腹水效价达到1:105。研究过程中，以Hg2+-DTPA-BSA作为免疫原对小鼠进行免疫处理。经多轮筛选评估，最终择取抗体效价表现最优且抗原阻断效价处于最低水平的小鼠个体。继而对选中小鼠的脾脏组织实施无菌化处理操作，成功制备为细胞悬液。通过细胞融合技术成功获得了杂交细胞，该技术将脾细胞与骨髓瘤细胞相结合。随后，利用腹水小鼠法从这些细胞中提取出了单克隆抗体，并对这些抗体的免疫学特性进行了全面的分析和鉴定。鉴定结果显示，所制备的单克隆抗体不仅具备较高的效价水平，同时在稳定性方面也展现出良好的性能表现。通过技术创新与流程优化实现汞离子检测方法的实际应用效能提升，构建了一种适用于复杂基质样品的间接酶联免疫吸附测定（ELISA）新方法，更精准地测定汞离子浓度，有助于及时发现环境、食品、生物样本等中的微量汞污染，为环境监测和疾病诊断等提供可靠数据。关键词：汞离子，单克隆抗体，ELISA，重金属前言汞（Hg）是一种高污染性、高毒性的重金属REF_Ref19826\r\h[11]，又可称为水银。汞毒性极强且易在生物体内富集，严重危害生态环境安全与人体健康。易通过工业废气、采矿、燃煤等进入环境，在水体中转化为剧毒甲基汞；在动物医学领域，人类疾病是由食物链的富集造成的，比如鱼类和牲畜。这些隧道所带来的危害，将会严重损害人体呼吸系统、皮肤、中枢神经系统、肾脏和眼睛等REF_Ref9432\r\h[5]。因此，及时准确地检测汞离子浓度对于环境保护、公众健康及汞中毒的早期诊断至关重要。传统的检测技术在实际应用中，存在一些明显的不足和限制，尤其是在功能和技术层面上，常常难以满足需求：此方法虽能精确测定富集结果，但大量文献中包含具体操作说明（如消解步骤），且与富集相关的仪器成本高昂，无法用于实时检测REF_Ref13504\r\h[12]，耗时且易引入误差。免疫分析技术因其高特异性、灵敏度和操作便捷性，近年来在环境污染物检测领域备受关注。利用双功能膦配体将重金属离子与载体蛋白重组以制备完整抗原的思路，为重金属免疫分析技术的发展开辟了新途径REF_Ref11937\r\h[3]。将汞离子与载体蛋白通过螯合剂偶联，制备免疫原，利用紫外分光光度法鉴定偶联效果。选取实验小鼠，注射免疫原。对抗体效价最高的小鼠进行脾细胞分离，通过HAT培养基筛选杂交瘤细胞。采用间接ELISA法，以包被汞离子-载体蛋白复合物为抗原，筛选出阳性杂交瘤细胞。再进行培养获取抗体。这些步骤为构建Hg2+离子残留的免疫检测方法构建了基础框架，对提升风险评估的效率与水平具有切实的现实意义REF_Ref11697\r\h[25]。面对日益严峻的环境问题，对汞及相关物质的快速、准确检测已成为一个全球性的难题。通过本研究所制备的单克隆抗体与ELISA检测技术的结合，我们能够在实验室环境下实现对汞离子的高效检测。未来，随着技术的进一步完善与优化，预计这种检测方法能够推广应用于不同的环境样本中，为全球汞污染的防治提供有力支持。此外，本研究中的单克隆抗体技术不仅能够用于汞离子的检测，还能够为其他重金属离子、环境污染物的检测提供理论依据与实践经验。对提高风险评估工作的效能和质量，保障食品安全有重要作用REF_Ref15091\r\h[4]。以上所提及的单克隆抗体技术，作为一种高特异性、高亲和力的检测工具，近年来在环境污染物检测中得到了广泛应用。免疫学检测技术为汞离子定量分析提供了新途径，其中酶联免疫吸附法（ELISA）展现出显著优势。该方法基于抗原抗体特异性识别机制，通过引入酶标记物构建信号放大体系，实现对汞离子的灵敏检测与精准定量。1材料与方法1.1材料1.1.1实验试剂碘化汞（HgI）、硝酸、提供牛血清白蛋白（BSA）、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）、DTPA螯合剂、1mol/LNaoH、鸡卵清蛋白（OVA）、ITCBE缓冲溶液或Hepes缓冲液、间接ELISA试剂盒（包含抗原，终止液和TMB等）、HAT培养基、冻干试剂、透析液1.1.2实验仪器磁力搅拌器、紫外分光光度计、电泳仪、分析天平、pH试纸、聚乙烯酶标反应板、96孔细胞培养板、移液枪、细胞培养箱、电泳槽蛋白质核酸分析仪、离心机1.1.3动物选择6-8周龄雌性BALB/c小白鼠，本次实验选择6周龄健康实验鼠。1.2试验方法1.2.1合成免疫原Hg2+-DTPA-BSA具体操作方法：（1）BSA的溶解：将25mg的BSA溶解在PBS缓冲液中，得到BSA的工作溶液。即溶解后浓度为1

mg/mL，那么25mg

BSA溶解在25mL

PBS中。（2）DTPA的配制：DTPA的配制通常以摩尔浓度计算，通常使用DTPA溶液的浓度为1-10

mM。例如，使用1mM的DTPA溶液来结合BSA和汞离子。DTPA的分子量为393.32

g/mol，所以1mM

DTPA溶液中每升包含393.32

mg的DTPA。【0.375mmol×393.32g/mol=0.1475g=147.5mg】（3）汞离子的引入：取适量碘化汞，将其置于干净的容器中。向其中缓慢加入硝酸，利用硝酸的氧化性和酸性，对碘化汞进行消解处理，使汞离子充分游离出来

。结果为溶液酸性过强，缓慢滴加1mol/L

NaOH溶液，调节pH至合适范围，之后用蒸馏水将溶液稀释至所需浓度。（4）合成人工抗原：准确称取25mg的载体蛋白（通过分析天平仪器）。将称取的载体蛋白加入到Hepes缓冲液或ITCBE缓冲溶液中，通常按1:1的摩尔比配制。轻轻搅拌（可借助磁力搅拌器

），使载体蛋白充分溶解，形成均匀的载体蛋白溶液。启动磁力搅拌装置，以恒定流速将汞离子溶液逐滴添加至载体蛋白溶液体系中。然后加入Hg2+，继续孵育使DTPA与汞离子结合，BSA则作为载体蛋白，结合到DTPA和汞离子的复合物中。室温条件下，使混合溶液发生4小时的持续反应，最终产生了人工抗原。（5）纯化：用透析法去除未结合的DTPA、汞离子和其他杂质。通过透析（更换透析液数次）分离出所需的Hg2+-DTPA-BSA复合物。（6）冻干保存：合成的人工抗原可通过冻干方式保存，也可以保存在-20°C以下。1.2.2鉴定人工抗原（1）人工抗原紫外扫描分析（UV）选用PBS与ITCBE缓冲液作为稀释介质，分别对人工合成的免疫原Hg2+-DTPA-BSA及包被原Hg2+-DTPA-OVA实施稀释操作。采用紫外分光光度计，于220至360纳米波长区间内开展扫描检测，通过分析光谱数据对免疫原中蛋白质的偶联状况进行评估。（2）SDS凝胶电泳鉴定根据BSA的分子质量参数，采用SDS法对BSA、OVA以及其偶联物Hg2+-DTPA-BSA和Hg2+-DTPA-OVA进行电泳分离，采用适宜的方法对凝胶进行染色、脱色，然后将其到紫外凝胶成像系统进行分析观察REF_Ref11144\r\h[1]。1.3动物免疫取六周龄的雌性小鼠，参照张海棠、姜金庆等的方法REF_Ref16820\r\h[2]用做好的人工免疫原Hg2+-DTPA-BSA免疫小鼠，共进行5次免疫。加强免疫阶段在基础免疫完成后3个免疫周期（21天）启动REF_Ref14654\r\h[6]；在细胞融合前3-5天，进行最后一次加强免疫，此次可采用静脉注射，以增加和提高小鼠体内抗体分泌细胞的数量和活性。在加强免疫后7-10天，取少量尾静脉血，分离出血清来，根据间接酶联免疫检测法检查血液中抗重金属汞离子抗体的效价。挑选出抗体情况最好的小鼠，留着做下一步的细胞融合REF_Ref15112\r\h[21]。1.4细胞融合1.4.1融合骨髓瘤细胞和脾细胞通过眼球摘取法使小鼠流血并收集阳性血清，最后将其处死，在实验室条件下取出脾脏REF_Ref26466\r\h[14]，再去融合。获取的脾细胞和骨髓瘤细胞按照相对应的比例在离心管诱导混合，作用数分钟后，加入4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液终止反应，离心洗涤细胞，进行细胞融合程序，最后将融合的细胞移入到培养皿中进行培养REF_Ref28118\r\h[20]。1.4.2阳性杂交瘤细胞的筛选及克隆化用蒸馏水、BSA等配制筛选培养基，于96孔细胞培养瓶中接种融合细胞，添加筛选培养基开展培养。细胞融合10天后，即可看到融合的杂交瘤细胞覆盖培养孔30%左右，此时可吸取适量的上清液进行效价测定REF_Ref19843\r\h[22]。采用间接ELISA法筛选：用聚乙烯酶标反应板，先将汞离子免疫原包被酶标板，封闭液（含BSA等）封闭，37℃孵育后洗涤

；37℃下孵育细胞培养上清液与对照物，洗涤后添加酶标二抗，再次进行孵育和洗涤操作；加显色底物（TMB），反应后加终止液，用紫外分光光度计测吸光度值筛选阳性杂交瘤细胞。采用含BSA的培养液对阳性杂交瘤细胞进行梯度稀释，保留检测显示的强阳性细胞，同步挑选灵敏度、亲和性及生长状态俱佳的融合杂交瘤细胞开展大规模增殖REF_Ref19932\r\h[23]。此外，筛选过程中所使用的包被抗原浓度、检测抗体的稀释度等参数也可能影响筛选结果的准确性和灵敏度，需要进一步优化以提高筛选效率。1.5单克隆抗体的大量制备本研究采用6周龄的健康雌性小鼠，往腹腔内注射大约1mL的液状石蜡REF_Ref553\r\h[17]。10天后，将融合的杂交瘤细胞接种在小鼠的腹腔内，诱导体内产生大量的腹水，待小鼠的腹腔明显膨大后无菌收集腹水，提取杂交瘤细胞分泌的抗体REF_Ref611\r\h[18]。1.6制备单抗的性能鉴定1.6.1单抗特异性鉴定通过交叉反应率，来判定抗体是否可以特异性识别待测物REF_Ref3779\r\h[13]。将单克隆抗体与对照抗原进行反应，可采用免疫荧光法，将目标抗原固定在玻片上，滴加单克隆抗体，孵育并洗涤后，加入荧光标记的二抗，在荧光显微镜下观察。或其他方法，例pH稳定性检测（将抗体置于不同pH值的缓冲液中育养，而后检测其活性。如果在某些pH值下活性显著降低，说明抗体对该pH范围不稳定）、外观检查（观察抗体溶液的颜色和有无沉淀等，若出现变色或沉淀，可能指引稳定性问题）1.6.2单抗稳定性测定单抗稳定性会影响实验结果的准确性。准备待检测的单抗溶液，记录初始浓度和保存条件。设置未处理的原始样品作为对照，用于后续结果对比。通过人为设定高温、极端pH等条件，加速抗体降解，评估其耐受性（温度稳定性和冻融稳定性）。其中冷冻稳定性：对于需要冷冻储存的单抗，进行冷冻-解冻实验，观察冻融过程是否导致抗体结构的变化。1.6.3单抗效价测定基于间接ELISA法来测定选择的细胞株上清液单抗的效价，系统性探究上清液单克隆抗体在不同浓度Hg²⁺-DTPA螯合物标准体系内的抑制效应表现，进而运用专业算法，精确测算杂交瘤细胞上清液中特异性单抗对Hg²⁺-DTPA的半数抑制浓度数值。REF_Ref10264\r\h[10]。1.7ELISA检测方法的建立操作步骤：（1）包被原固定：稀释适量汞离子抗原后，加入96孔酶标板的每个孔中，一般在37°C孵育2小时。（2）洗涤：用PBST洗涤液将孔板洗涤3次（间隔为30秒）。（3）封闭：使用封闭液（如5%的猪血清或BSA溶液）封闭孔板，通常在37°C下孵育1小时。（4）再次洗涤：再次使用PBST洗涤液洗涤3次，去除多余的封闭液。（5）加入样本（抗体）：每孔200µL，使用1%BSA的阻断液。加入稀释后的1µg/mL抗体，每孔50µL。通常在37°C下孵育1小时，以确保充分反应。（6）再次洗涤：用PBST洗涤孔板3次，去除未结合的抗原或抗体。（7）加入二抗（标记抗体）：加入含有酶标记的二抗，稀释至1:1000到1:5000，加入50µL每孔。在37°C下孵育1小时。（8）再次洗涤：用PBST洗涤。（9）加入底物：加入100µL到200µL每孔的酶底物，常见的底物是TMB（四甲基联苯胺），它在酶的作用下会变色。在常温下避光孵育30分钟，底物会被酶催化转化，产生可见的颜色反应。（10）终止反应：加入终止液（如硫酸或其他酸性溶液）停止反应。（11）测量吸光度：使用酶标仪（ELISAReader）在特定波长（一般是450nm）下测量每孔的吸光度值REF_Ref5650\r\h[19]。1.7.1鉴定特异性进行间接ELISA实验，测量其OD450REF_Ref12592\r\h[15]，为常见检测手法。也可通过检测对Hg2+-DTPA的交叉反应率来判定。1.7.2绘制标准曲线绘制cELISA标准抑制曲线，以抑制率B/B0为纵坐标，质量浓度（Hg2+）的对数值为横坐标REF_Ref8122\r\h[9]。1.7.3测定灵敏度通过拟合Hg²⁺浓度与反应曲线，使用四参数洛吉斯蒂模型可以计算出IC50值，表示50%最大抑制的浓度。IC50可以通过浓度-反应曲线的拟合得出。检测范围则选择覆盖IC50周围的浓度区间，确保既不太低也不太高，从而保证实验的可靠性。2结果与分析2.1人工抗原紫外扫描分析DTPA本身通常在紫外区没有显著的吸收峰，但在Hg2+的引入后，某些波长上有轻微的改变或新的吸收峰。在紫外扫描中，BSA提供的吸收峰部分在280

nm处。230

nm的吸收峰主要来源于DTPA与汞离子复合后，分子结构的变化导致了新的吸收特性。在此次实验中，没有观察到DTPA或Hg2+的强烈吸收峰，但发现有少量的吸收峰出现在220-250

nm区域，这取决于Hg2+与DTPA的配位结构。2.2抗原SDS电泳分析Marker（泳道1）：左侧标注了不同分子量（KD）的条带，这些是分子量标准;泳道2和泳道3：均出现清晰条带，且位置接近66.2KD。则表明BSA的迁移速率较慢，完全抗原Hg2+-DTPA-BSA的迁移速度因其分子量更大而最慢。可说明人工免疫原整体表现为偶联成功。注：1：Maker2:Hg2+-DTPA-BSA3:BSA2.3单抗性能的鉴定分析2.3.1单抗特异性鉴定分析使用酶联免疫吸附实验（ELISA）技术，研究金属离子是否与抗体发生结合以及其亲和力。通过测定IC50值（抑制浓度50）来定量分析金属离子与抗体的结合亲和力。以下元素都属于重金属元素，它们具有不同的氧化还原性质和配位能力。数据表明，成功获得的单克隆抗体特异性优异。多克隆抗血清于异种金属螯合物体系中的交互免疫应答现象金属离子IC50交叉反应率%Hg2+45.68100CO2+＞6.4*103＜0.5Zn2+＞6.4*103＜0.5Cr3+＞6.4*103＜0.5Pb2+＞3.2*103＜0.9Cu2+＞6.4*103＜单抗的稳定性鉴定分析实验表明，杂交瘤细胞在体外培养5个月及液氮冻存复苏3个月后，依然能稳定分泌抗体，效价无明显下降。冻存腹水后效价亦稳定，显示单抗具有良好的稳定性REF_Ref30266\r\h[16]。2.3.3单抗的效价鉴定根据间接ELISA结果，一只小鼠抗体效价为106。说明人工抗原刺激机体能产生抗体，高效价的单克隆抗体不仅表现出较强的亲和力（能够在低浓度下结合抗原），而且具有较好的特异性（能够有效识别目标抗原而不与其他物质发生非特异性反应）。测定IC50值见表所示。2.4ELISA检测方法特异性的鉴定分析由表所知，该检测方法对Hg2+-DTPA的交叉反应率为100%，与Pb2+-DTPA有一定的交叉反应，与其他金属离子螯合物交叉反应率极低，可看做无交叉反应，表明具有较好的特异性。阻断ELISA试剂盒对多元重金属螯合物的免疫交叉反应金属离子IC50交叉反应率%Hg2+-DTPA28.36100CO2+-DTPA＞6.4*103＜0.5Zn2+-DTPA＞6.4*103＜0.5Cr3+-DTPA＞6.4*103＜0.5Pb2+-DTPA＞3.2*103＜0.9Cu2+-DTPA＞6.4*103＜0.52.5抑制标准曲线的绘制依循阻断酶联免疫吸附测定法实施量化分析，其衍生的抑制效应曲线如图：如图所示，该抑制曲线的横轴为Hg2+的浓度，纵轴为结合率。在该图中所传递的信息为汞离子浓度不断增加，但结合率越来越低。凭借阻断ELISA测定手段，探究系列浓度Hg2+-DTPA螯合物标准液环境下，上清液单克隆抗体所产生的抑制性响应，证实了细胞所分泌的抗体是特异性针对Hg2+,而不是螯合剂或其他蛋白。证明该实验结果较成功。2.6灵敏度测定根据所得IC50值，算出检测限为5.12ng/ml。一般IC50的数值低IC50值：意味着该化合物在较低浓度下就能有效地抑制目标生物学过程，通常表示该化合物或药物效力较强，抑制效果强；高IC50值：意味着该化合物需要更高的浓度才能达到50%的抑制效果，通常表示该化合物或药物效力较弱，抑制效果弱。3讨论3.1免疫原设计与抗原性本研究通过合理设计汞离子-载体蛋白偶联物作为免疫原，成功激发了小鼠的免疫应答并获得了特异性B淋巴细胞。合适的偶联策略确保了汞离子能够以适当的空间构象暴露，从而诱导机体产生针对汞离子的特异性抗体。实验中通过优化合成条件，使免疫原具备良好的抗原性。然而，免疫原的抗原性仍可能受到多种因素影响，如载体蛋白的选择（选择合适的载体蛋白对于半抗原刺激机体产生抗体具有非常大的作用REF_Ref32602\n\h[7]）、偶联反应的副产物等，未来可进一步探索不同载体蛋白或偶联方法，以提高免疫原的免疫原性和抗体的特异性。最终，我们选择牛清白蛋白作为载体蛋白来制备完全抗原Hg2+-DTPA-BSA。3.2人工免疫原的制备流程在试验中，人工免疫原的制备流程包括选择合适的载体蛋白（BSA）、化学偶联汞离子与载体蛋白、纯化免疫原、免疫动物、采血并检测抗体水平，细胞融合等。这些步骤需要精确操作，确保获得高质量的抗体，为后续的检测工作提供可靠的工具，最终达到预期的实验目的。3.3人工免疫原的鉴定人工免疫原的鉴定涉及到通过设计和合成适合用于免疫反应的抗原（免疫原）来识别目标分子。总的来说，人工免疫原的鉴定有以下几个方面：免疫原的设计与合成、人工免疫原的表征、免疫原的评价标准和选择合适的免疫途径。总之，人工免疫原的鉴定是为了确保能够产生具有高特异性和高亲和力的单克隆抗体，这对于后续的ELISA检测方法的建立至关重要。在这个过程中，除了测试免疫原的有效性，还要评估其与目标分子的结合特性，确保所制备的抗体能够准确、灵敏地检测汞离子。3.4单抗大量制备的问题就目前来看，单克隆抗体的制备主要通过体内培养法和体外培养法REF_Ref32670\n\h[8]，它们各自的具体内容和应用有所不同；前者通过在动物体内免疫并筛选得到单抗的方法。这种方法的核心是通过免疫小鼠等实验动物来产生抗体，然后利用体内的免疫反应筛选出产生目标抗体的B细胞；后者通过在体外的细胞培养系统中直接选择和扩增产生抗体的B细胞，并通过技术手段使其长期稳定地分泌抗体。3.5与其他检测方法的比较在现当代免疫检测技术体系架构中，单克隆抗体较之于多克隆抗体，彰显出极具辨识度的应用优越性REF_Ref9940\r\h[24]。与传统的汞离子检测方法，如原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法等相比，本研究建立的ELISA方法具有操作简便、快速、无需昂贵大型仪器等优势。然而，在检测精度和准确性方面，可能略逊于传统仪器分析方法。因此，在实际应用中，可将ELISA方法与传统仪器分析方法相结合，利用ELISA方法进行快速初筛，对阳性样品再采用仪器分析方法进行精确测定。4结论上述实验成功制备了Hg2+-DTPA-BSA完全抗原，用于免疫小鼠获得了较理想的结果。综上所述，本研究成功制备了汞离子单克隆抗体并建立了相应的ELISA检测方法，在汞离子检测方法的探索进程中取得实质性进展，但仍有许多方面需要进一步深入研究和优化。参考文献秦保亮.抗重金属Hg2+单抗制备及ELISA检测方法的建立[D].河南科技学院,2016.张海棠、姜金庆，王顺来等.镉离子人工抗原的制备及其抗体特性[J].西北农林学报.2011,37(3)：385-388.张燚.Hg2+快速免疫检测技术研究[D].吉林大学,2011.赵丽.三种重金属单抗的制备与抗体基因序列分析及其免疫检测方法的建立[D].内蒙古农业大学,2011.高志刚.重金属Hg2+单克隆抗体的制备与ELISA检测方法研究[D].内蒙古民族大学,2009.杨凤丽.重金属汞单克隆抗体制备与免疫检测方法建立[D].南京农业大学,2007.王建华,唐勇,向军俭,等.镉离子多克隆抗体ELISA竞争法的初步建立[J].中国生物制品学杂志,2008,(01):56-59.刘萍，陈苗苗，刘学荣，等.单克隆抗体的研究进展[M].中国畜牧兽医，2012,39（1）：67-70.王耀,李燕飞,曹金博,等.叶酸的高灵敏竞争ELISA方法建立及其初步应用[J/OL].食品工业科技,1-13[2025-04-25]./10.13386/j.issn1002-0306.2024120390.[郭常伟,唐勇,向军俭,等.重金属铜离子单克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立[J].中国生物制品学杂志,2011,24(06):720-723.王玉珍.汞离子新型单克隆抗体的制备及其高灵敏度SERS竞争免疫分析方法的建立[C]//国家外国专家局国外人才信息研究中心（InformationResearchCenterofInternationalTalents,StateAdministrationofForeignExpertsAffairs,China）,中国国际贸易促进委员会大连市分会（ChinaCouncilforthePromotionofInternationalTrade,DalianSub-Council）.2016第七届国际DNA和基因组活动周——2016第九届国际蛋白质和多肽大会、2016第八届国际抗体大会、2016第八届世界疫苗大会会刊.山西大同大学化学与环境工程学院;,2016:228.王玉珍,冯锋,秦君,等.重金属汞离子免疫分析方法的研究[J].山西大同大学学报(自然科学版),2013,29(03):36-39.邹淑珍.汞、铬、铅三种重金属免疫快速检测方法的研究[D].江南大学,2017.邢常